畜牧人

標題: 豬的細菌性疾病-分子生物學引物設(shè)計思路 [打印本頁]

作者: cym19790520 時間: 2007-1-18 22:32
標題: 豬的細菌性疾病-分子生物學引物設(shè)計思路
基于細菌16、23SrDNA的基因檢測法
不論是細菌的16SrDNA，還是23S rDNA均由保守區(qū)和可變區(qū)構(gòu)成。不同菌種間保守區(qū)序列差異較小，但可變區(qū)序列則隨菌間的親緣關(guān)系不同而有一定的差異，人們利用這一特性設(shè)計引物進行菌種鑒別?；驒z測的基本原理為：提取DNA→PCR擴增→純化擴增產(chǎn)物→凝膠電泳對產(chǎn)物進行檢測→測序循環(huán)→純化測序產(chǎn)物→序列數(shù)據(jù)分析。針對l6、23SrRNA基因的保守性和特異性特點，檢測可采用以下幾種方式：①兩種引物設(shè)計在保守區(qū)，成為通用引物，而在中間的特異區(qū)中選擇序列作探針。先用通用引物作PCR快擴增，可篩選出含有病原菌的標本。擴增產(chǎn)物再與種或?qū)偬禺愋蕴结橂s交，對靶細菌作出鑒定，可以達到診斷的目的。②兩條引物設(shè)計在保守區(qū)，在中間的特異區(qū)中，選擇一條或兩條特異性引物作套式或半套式PCR，然后用限制性內(nèi)切酶進行酶切，結(jié)果產(chǎn)生了不同的酶切圖譜。該方法可較好地對臨床標本中的感染菌進行鑒定，其敏感度可達到檢測l0個大腸埃希菌或250個金黃色葡萄球菌的水平。③將一對引物中的一條設(shè)在特異區(qū)，而另一條設(shè)在細菌的高度保守區(qū)，檢測某一種屬的病原菌，運用這一方法檢測糞便中的艱難梭菌，可比培養(yǎng)法迅速得到準確的結(jié)果，可在l06個大腸埃希菌的背景下檢出l0個艱難梭菌，說明該方法具有很高的特異性。另外，也可直接在16SrRNA特異區(qū)中設(shè)計引物檢測各種特定病原菌，該方法應(yīng)用較為廣泛，如檢測支氣管灌洗液中的軍團菌、皮膚活組織中檢測麻風桿菌、痰和咽拭子中檢測肺炎支原體等。

作者: 小人物 時間: 2007-1-21 10:55
呵呵，不錯，只是引物設(shè)計在豬場不實用，有些太深奧了，大多數(shù)人只是想知道這東西有什么用？怎么用？結(jié)果怎么解釋？再說現(xiàn)場還沒有幾個豬場能夠使用PCR來檢測，過幾年也許會有的。:L

作者: 全會好 時間: 2007-4-7 13:01
豬場使用PCR檢測,引物可以購買,設(shè)計有多難呀.

歡迎光臨畜牧人 (http://ffers.com.cn/)