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標題: 動物性飼料體外蛋白質(zhì)消化率測定的關(guān)鍵控制點 [打印本頁]

作者: gengqing3329 時間: 2007-1-26 16:00
標題: 動物性飼料體外蛋白質(zhì)消化率測定的關(guān)鍵控制點

以下是本人在網(wǎng)上找到的一篇文章，可是這篇文章中直說樣品放在搖床上，可是搖得速度或震蕩的速度是多少？我以前也在化驗室室做過這方面的很多試驗，可是不同的速度會有不同的結(jié)果！請問速度到底是多呢？

動物性飼料體外蛋白質(zhì)消化率測定的關(guān)鍵控制點

隨著我國養(yǎng)殖業(yè)和飼料工業(yè)的迅速發(fā)展，常規(guī)蛋白質(zhì)飼料資源如魚粉、豆粕等越來越短缺，飼料原料的質(zhì)量很不穩(wěn)定，摻假、使雜現(xiàn)象嚴重。副產(chǎn)品如羽毛粉、血球粉等由于采用的加工工藝不同，盡管蛋白質(zhì)含量很高（70%~80%，甚至高達90％），但其消化率變動范圍很大。我們實驗室近3年共對近百個魚粉、肉粉、肉骨粉和羽毛粉樣品進行了體外消化率的測定，魚粉和肉骨粉的結(jié)果范圍為63.2%～96.8％，羽毛粉為20.2%～78.3％。盡管優(yōu)質(zhì)純魚粉的消化率達90％以上，但摻入羽毛粉、血粉等后，魚粉從常規(guī)分析蛋白質(zhì)含量夠，但使其消化率大大下降，有的僅60％左右，因此，評定動物性飼料的營養(yǎng)價值，除了常規(guī)分析指標粗蛋白、鈣和磷等，其消化率是一個很重要的評價指標。
通過動物試驗評定飼料營養(yǎng)價值費時費力，成本較高。目前我國已經(jīng)頒布的GB/T17811-1999《動物蛋白質(zhì)飼料消化率的測定胃蛋白酶法》，是相對于動物性試驗的簡便、快速評價方法。但在使用這一方法時，由于對方法的理解和掌握不夠，導致不同實驗室間的測定結(jié)果差異很大?，F(xiàn)將測定過程中的關(guān)鍵控制點介紹如下。
1 方法的適用范圍
該方法僅適合于動物性蛋白質(zhì)飼料，如魚粉、肉骨粉、羽毛粉、酵母粉、血粉等體外消化率測定。該方法不適合用于植物蛋白質(zhì)飼料原料（如豆粕、菜籽粕、棉籽粕及其它雜粕）或配合飼料，因為它們中存在的復(fù)雜碳水化合物如纖維性物質(zhì)及淀粉等會干擾胃蛋白酶對蛋白質(zhì)的消化。
2 樣品選取和制備
選取有代表性的樣品，粉碎并全部過20目篩（孔徑0.9 mm）。注意事項：①不能過細，也不能過粗。因為樣品的粉碎粒度直接影響消化率的高低，粉碎過細，單位質(zhì)量樣品的接觸面積增加，會導致消化率結(jié)果偏高；反之，則會導致結(jié)果偏低。②不能只取篩下物去做分析測定，因為篩下物的樣品不能完全代表待檢樣品。因此要讓樣品全部通過20目篩，混勻后再進行測定。
3 試劑和溶液配制
3.1 2g/l胃蛋白酶溶液的配制
①移取6.1ml濃鹽酸，加蒸餾水稀釋至1 000ml；②將上述稀鹽酸加熱升溫至42～45℃，取下，然后加入2g活性為1：10 000生化級胃蛋白酶，輕輕地攪動，使其溶解。
3.2 注意事項
①所用的胃蛋白酶必須為生化級，如果有條件的，最好對其活性進行實測。如果其活性為1：3 000或其它規(guī)格，應(yīng)按照活性比例，相應(yīng)增加或減少酶的用量，使胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶的活性為20IU/ml。因為胃蛋白酶溶液中酶活性的高低直接影響消化率的高低。如果與標準偏離，測定結(jié)果將無可比性，失去參考價值。②溶液一定要現(xiàn)用現(xiàn)配，避免配制時過熱，注意勿在加熱板或電爐上直接加熱胃蛋白酶溶液，否則會使沉于燒杯底部的酶直接局部過熱而失活。
4 測定步驟及注意事項
4.1 測定步驟
稱取試樣1g（精確至0.000 1ｇ）于300ml具塞三角瓶中，準確加入42～45℃的2g/l胃蛋白酶溶液150ml，加塞，置于搖床，45℃條件下消化16h。消化后殘渣用濾紙過濾，并用蒸餾水洗凈濾紙上的未消化殘渣，然后將未消化殘渣連同濾紙一起轉(zhuǎn)入凱氏消化管，按照凱氏定氮方法測定粗蛋白質(zhì)含量。同時測定樣品中粗蛋白。根據(jù)樣品中粗蛋白含量與未消化殘渣中粗蛋白質(zhì)含量之差與樣品中粗蛋白含量的比值計算得出體外消化率的結(jié)果。
4.2 注意事項
①如果樣品的脂肪含量達1%~10％，最好脫脂；含脂肪大于10％，則必須脫脂，否則脂肪會影響測定結(jié)果。另外，脫脂后的樣品需干燥后再稱樣測定。②胃蛋白酶的活性高低與溫度有密切關(guān)系，42～45℃條件下活性較高。如果溫度過高會使酶失去活性；反之，會使酶的活性降低。因此，消化用的搖床或烘箱的溫度一定要控制準確，最好經(jīng)過溫度校準。③在pH值和溫度一定的條件下，消化時間的長短是影響消化率的一個關(guān)鍵因素。消化時間越長，消化率越高；反之，消化率越低。為了使所獲得的數(shù)據(jù)結(jié)果具有良好的可比性，要嚴格控制消化時間。④如果基層實驗室沒有恒溫平轉(zhuǎn)搖床，也可在45℃恒溫烘箱中進行消化，但消化的最初4h，每0.5h搖動1次；4～8h，每1h搖1次。

我們選取了2個魚粉和1個羽毛粉樣品，對在烘箱和搖床上的測定進行了比較試驗，結(jié)果見表1。從表1結(jié)果可以看出，同一樣品在搖床和烘箱中進行消化測定結(jié)果無顯著差異，烘箱中測定結(jié)果略低于恒溫平轉(zhuǎn)搖床上的測定結(jié)果。
5 結(jié)果及判斷
如果嚴格掌握好以上實驗條件，就可以獲得準確且具有良好重現(xiàn)性的結(jié)果見表2。
一般來講，魚粉的消化率應(yīng)不低于85％，優(yōu)質(zhì)魚粉應(yīng)該在90％以上，而飼用羽毛粉的消化率應(yīng)不低于75％。

參考文獻
1 GB/T17811-1999 動物蛋白質(zhì)飼料消化率的測定.胃蛋白酶法
2 Journal of Association of Official Analytist Chemists, 1971, 54:669

作者: trssjc 時間: 2007-3-3 16:27
不錯的資料，我們正想開展這方面的檢測。

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