畜牧人

標題: 快速估測尿酶活性法 [打印本頁]
作者: chengcai790602    時間: 2007-6-24 18:42
標題: 快速估測尿酶活性法
    目的：在有指示劑酚紅存在的條件下，豆粕（餅）中的尿素酶活性可按尿素轉變成氨的方法定性測定。

方法一：
儀器及試劑
1.培養(yǎng)皿
2.稀硫酸（H2SO4）0.2N或更稀些，帶滴管。
3.尿素——酚紅試劑。
      將1.2克酚紅溶解于30ml0.2N的NaOH中，用蒸餾水將之稀釋至約300ml，加入90g尿素并溶解之，用蒸餾水稀釋至2l，加入14ml 1.0N的H2SO4或70ml o.2N的H2SO4，用蒸餾水稀釋至最后體積3l，溶液應具明亮的琥珀色。
    測定步驟
1.在一個150ml的燒杯中倒入少量試劑，注意溶液必須呈明亮的琥珀色。若溶液已轉變?yōu)樯罱奂t色，滴人稀硫酸深液并攪拌之，直至溶液再度呈境拍色。
2.量一場匙粉碎很好的豆餅粉，放置于培養(yǎng)皿中。
3.在樣品上加入兩場匙試劑，輕輕攪拌，將樣品平鋪于培養(yǎng)皿中。若仍有干豆餅斑點，則再加入試劑，直至將豆餅浸濕。
4.放置5分鐘后觀察：
a.沒有任何紅點出現：再任其放置25分鐘，若仍無紅點出現，說明豆餅過熟。
b.少量紅點：少量尿素酶活性，豆餅可用。
c.豆餅表面約有25％為紅點覆蓋：少量尿素酶活性；豆餅可用。
d.豆餅表面約有50％為紅點覆蓋：有尿素酶活性。
e.豆餅表面的75％－100％為紅點覆蓋：尿素酶活性很高，不應接受這種原料，因為豆餅過生。

方法二：
儀器與試劑
1.粉碎裝置（不強烈發(fā)熱）
2.天平：感量1%
3.試管：直徑18mm，長180mm
4.尿素：分析純
5.酚紅：分析純 0.1%乙醇（20%）溶液
測定步驟
將所測試樣研細，稱去0.02g，轉移到試管中，加入0.02g結晶尿素及兩滴酚紅指示劑，加之20——30ml蒸餾水，搖動10s。觀察溶液顏色，并記錄呈粉紅色時間。
尿酶活性結果表示：
1min內呈粉紅色為——活性很強
1~5min內呈粉紅色為——活性強
5~15min內呈粉紅色為——有點活性
15~30min內呈粉紅色為——沒有活性
一般在10min以上不顯粉紅色，尿酶活性合格，30min以上不變色說明加熱過度；10min內顯粉紅色說明加熱不足，1min內呈粉紅色說明過生。
                                               

[ 本帖最后由 chengcai790602 于 2007-6-24 18:43 編輯 ]
作者: 長江之水    時間: 2007-6-24 20:49
這兩個方法都很實用。;1s:
作者: 紅色心情    時間: 2007-6-25 09:53
我們現在用的是第二種方法，感覺還行　
作者: chengcai790602    時間: 2007-6-25 11:32
這些方法只能粗略判定生熟度，一般飼料行業(yè)用比較簡單、實惠，在科研單位就無法用了哦！:deng:
作者: cdliuq    時間: 2007-6-25 11:42
我們也用第二種方法
作者: cendy    時間: 2007-7-14 20:27
兩種方法都有用過，不過還是第二種好判斷，試劑也容易配點



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