畜牧人

標題: 斷乳豬多系統(tǒng)衰竭綜合征 [打印本頁]

作者: kinki0396 時間: 2007-7-19 10:00
標題: 斷乳豬多系統(tǒng)衰竭綜合征
斷乳豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)是一種主要由豬圓環(huán)病毒2型(porcine circcovirus 2,PCV)引起的豬斷乳后多系統(tǒng)進行性衰竭的疾病。1991年，加拿大西部一農(nóng)場首先發(fā)現(xiàn)本病，主要表現(xiàn)以斷乳仔豬漸進性消瘦，體重減輕，呼吸道癥狀及黃疸，組織學病變有間質(zhì)性肺炎，淋巴組織增生，肉芽腫性肝炎和腎炎為特征。隨后，加拿大、美國、英國、日本、韓國等許多國家和地區(qū)也相繼暴發(fā)了本病。該病嚴重影響斷乳豬生長發(fā)育，且致死率很高，因而引起各國的高度重視。各國對本病進行了深入的研究，本文從本病的病原學、流行病學、癥狀、病理變化、診斷等方面的國內(nèi)外的研究進展進行綜述。?

1 病原學?

PMWS的主要病原是豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)。PCV在分類上屬于圓環(huán)病毒科，其共同特征為病毒無囊膜，由單股環(huán)狀的DNA鏈組成。豬圓環(huán)病毒直徑17 nm，呈20面體對稱，病毒衣殼蛋白為1條多肽鏈，分子量為36 kD，DNA長為1.76 kb，病毒沉降系數(shù)為52 S，浮密度為1.37 g/cm?3。病毒對外界環(huán)境抵抗力較強，在酸性環(huán)境及氯仿中可以存活較長時間，在高溫環(huán)境(72℃)也能存活一段時間。據(jù)英國中央獸醫(yī)研究所的數(shù)據(jù)表明，Virkon S消毒劑在1∶250稀釋度時能有效殺滅圓環(huán)病毒。1974年，德國學者Tischer首先從豬腎傳代細胞PK?15中檢出PCV，該病毒可長期持續(xù)污染PK15細胞，但不表現(xiàn)CPE。Allan(1994)報道了在豬和牛單核細胞/巨噬細胞培養(yǎng)中復制了PCV。PCV在原代胎豬腎細胞，恒河猴細胞，BHK?2細胞中不能生長，在接種PCV的PK?15培養(yǎng)細胞物中加入d?氨基葡萄糖，可促進PCV復制，使得感染PCV的細胞數(shù)量可提高30%。感染PCV的PK?15培養(yǎng)細胞內(nèi)含有許多胞漿內(nèi)包涵體，少數(shù)感染細胞內(nèi)含有核內(nèi)包涵體。胞漿內(nèi)包涵體大多數(shù)分布于細胞核周圍，大小不等，圓形或卵圓形，均質(zhì)。胞漿內(nèi)包涵體可分為兩種類型：一種形態(tài)較小，直徑0.1～0.5 nm，無膜包圍，呈顆粒狀，與胞漿的界限不明顯。一些包涵體中有直徑17±2 nm?二十面體的病毒粒子，呈水緊密的聚合，偶爾形成類結(jié)晶狀排列。這種小包涵體可能是病毒裝配和成熟的場所。另一種包涵體形態(tài)較大，直徑0.5～5.0 nm?，數(shù)量多，周圍有膜包圍，電子密度較大。這種大的包涵體是典型的自吞噬作用的結(jié)果。核內(nèi)包涵體無膜包圍，常與網(wǎng)狀核仁或異染色質(zhì)的凝集物有關(guān)，呈圓形，鈴形或顆粒狀，直徑為0.1～1.0 nm。用感染PCV的PK?15細胞接種豬，可以回收病毒，根據(jù)病毒抗原的出現(xiàn)及抗體的產(chǎn)生，表明豬感染了PCV，但沒有發(fā)現(xiàn)臨床癥狀和病變。說明來源于PK?15細胞的PCV是非致病性的。Morozov等(1998)報道了從衣阿華州有PMWS癥狀的豬體內(nèi)分離到PCV，將此PMWS PCV與PK15細胞污染的PCV基因序列進行比較，發(fā)現(xiàn)這兩種不同來源的PCV基因序列存在很大的差異性，DNA全序列同源性為76%，在兩個主要的開放讀碼框(ORF)中，ORF1在兩株P(guān)CV間相對保守一些，核苷酸同源性為83%，氨基酸同源性為86%。ORF2可變性相對較大，核苷酸同源性為67%，氨基酸同源性為65%。用PCR和原位雜交方法還可檢出PMWS PCV在各種感染組織中DNA豐度。結(jié)果還表明，PMWS PCV可感染多種組織和巨噬細胞、淋巴細胞、內(nèi)皮細胞、上皮細胞。Mache(2000)研究表明，兩種病毒的核苷酸序列同源性為70%。為鑒別共同抗原和型特異性抗原，以桿狀病毒或質(zhì)粒為載體，使用免疫細胞轉(zhuǎn)染克隆的圓環(huán)病毒DNA，ORF1編碼與抗原性有關(guān)的蛋白，ORF2編碼的蛋白能被抗PCV2多克隆抗體特異性識別。PEPSCAN分析，部分ORF1，ORF2和ORF3基因重疊片段編碼5個主要的免疫活性識別區(qū)，1個位于ORF1上，4個在ORF2上，然而，只有一些ORF2編碼多肽是與病毒型鑒定有關(guān)的免疫相關(guān)部分。故ORF2編碼的抗原可作為診斷工具。美國Nawagitgul(2000)報道，PCV的2個潛在的開放讀碼框(ORF1和ORF2)有600多個核苷酸，ORF1編碼病毒DNA復制必需的復制相關(guān)蛋白，ORF2編碼與雞傳染性貧血病毒N末端的主要結(jié)構(gòu)蛋白相似的保守性氨基酸序列。在純化的PCV2病毒粒子中鑒定出病毒結(jié)構(gòu)蛋白。將PCV2的ORF2克隆到桿狀病毒的表達載體中，在昆蟲細胞表達基因產(chǎn)物，表達ORF2的基因產(chǎn)物是30 kD的大分子。在電鏡下觀察到重組ORF2蛋白自我裝配形成病毒衣殼粒。實驗性感染PCV的豬早在第3周就可在血清中檢測到ORF2蛋白抗體。各國對PCV和PMWS的一系列研究表明，PCV在豬體內(nèi)長時期演變過程中，產(chǎn)生了有病原性的變異株，后來被稱為PCV2(或PMWS PCV，PCV?like)，相應地將沒有致病性的持續(xù)污染PK15細胞的這種毒株稱為PCV1(或npPCV，PK?15PCV)。?

2 混合感染

PCV2是PMWS的主要病因，但不是惟一的病原。PMWS癥狀的出現(xiàn)需PCV和其他因子共同作用。Krakowka(2000)的實驗表明，豬細小病毒(PPV)在PMWS中是一種重要的致病因子。對悉生菌豬鼻腔單獨接種PCV?1，PCV?2，PPV或混合接種PCV1/PCV2，PCV1/PCV，PCV2/PCV。所有接種單一致病因子的豬，和PCV1/PCV2，PCV1/PPV豬(除1頭外)，都未表現(xiàn)臨床癥狀，但表現(xiàn)一過性病毒血癥。感染后35天，顯微鏡下觀察肝臟、心肌有炎性細胞浸潤。一頭接種PCV1/PP豬在接毒后2周出現(xiàn)PPV病毒血癥、淋巴管炎、肉芽腫性炎癥。接種PCV2/PPV豬都發(fā)生PMWS，表現(xiàn)出PMWS特征性癥狀：沉郁，厭食，黃疸，黏膜下層水腫。剖檢可見淋巴結(jié)縮小，肝臟有斑點，除腦組織外，所有組織都存在廣泛的血管肉芽腫，還可見肝細胞壞死，膽汁顯著瘀積。巨噬細胞和組織細胞中可見嗜堿性胞漿包涵體，在眼、鼻分泌物和糞便中檢出了PCV2抗原。研究表明，PMWS在悉生動物中需要PCV2和其他感染因子，如PPV，才能表現(xiàn)出完整的疾病癥狀。有實驗表明，在PCV/PRRSV或PCV/PPV混合感染時，PCV的復制得到增強，其復制增強機制可能是大單核細胞和巨噬細胞都是這3種病毒共同的靶細胞的緣故。由于PCV侵害機體的免疫機能，使機體對于PRRSV或PPV的抵抗力降低造成混合感染。PCV還可能與豬鏈球菌1型、α?溶血鏈球菌、豬副嗜血桿菌、沙門氏菌、PEDV、肺炎支原體、巴氏桿菌、偽狂犬病病毒混合感染。PCV主要侵害淋巴組織，導致機體的免疫力降低，而容易繼發(fā)感染。?

3 流行病學
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PCV廣泛存在于許多國家豬群中。血清學調(diào)查表明，德國、加拿大、英國、愛爾蘭豬群中PCV抗體陽性率分別達到85%、55%、86%、92%。由于PCV污染細胞不產(chǎn)生細胞病變效應(CPE)，一直未被發(fā)覺，有實驗表明PCV可能流行了許多年。Magar(2000)報道，通過間接免疫熒光試驗對1985年、1989年、1997年從加拿大一屠宰場采集的血清樣品進行PCV1、PCV2抗體檢測。每年都有PCV1、PCV2陽性血樣檢出，且PCV2血清陽性數(shù)大于PCV1陽性數(shù)。PCV2是加拿大豬群中主要PCV流行株。?
不同地區(qū)PCV2流行的基因型略有差異。PCV2基因型因地域不同又有許多小分支，從法國分離的PCV2基因序列與其他地區(qū)分離的PCV2差別最大，形成一個獨立的分支。從臺灣分離的PCV2與加拿大的分離株略有差別，從美國分離的所有PCV2同源性很高。我國對本病的報道很少，郎洪武等用ELISA方法在河北、天津、北京等省市豬場均檢測到PCV2抗體。曹勝波等用PCR方法在河南、江西、湖北、廣東等省檢測到了PCV2，因此PCV2在我國已廣為流行。實驗表明，我國豬群PCV2陽性率21.4%～?33.3%?，我國流行PCV毒株與歐洲毒株同源性高于美洲和臺灣毒株，與法國分離的一個毒株(AF20311)同源性最高。PMWS多發(fā)生于5～16周齡的豬，發(fā)病率3%～?50%。英國養(yǎng)豬協(xié)會(The UK National Pig Association)人員稱，PMWS已成為斷乳仔豬致死率最高的一種疾病。為了控制HCV和FMD，英國屠殺了25萬頭豬，另有30萬頭因PMWS死亡。一些農(nóng)場主報道，其致死率超過40%。豬對PCV具有較強的易感性，可經(jīng)口腔，呼吸道途徑感染。Allan(1996)證實少數(shù)懷孕母豬感染PCV后，在妊娠早期(胎兒產(chǎn)生免疫能力前)可通過胎盤感染胎兒，導致胎兒持續(xù)感染和病毒及抗原的不同分布。用PCV經(jīng)口感染試驗豬后，其他未接種豬的同群感染率達100%，感染豬可從鼻液、糞便中排出病毒。?

4  臨床癥狀
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臨床表現(xiàn)以多系統(tǒng)進行性功能衰竭為特征。表現(xiàn)精神不振，食欲不佳，有的發(fā)熱，被毛粗亂，生長發(fā)育不良，進行性消瘦，有的貧血，皮膚蒼白，肌體衰弱無力，還表現(xiàn)出咳嗽、噴嚏、呼吸困難等呼吸系統(tǒng)癥狀。體表淋巴結(jié)，特別是腹股溝淋巴結(jié)腫大，部分病例可見皮膚，可視黏膜黃疸，下痢及嗜睡。?

5 病理變化?

5.1 剖檢變化

最顯著的病變是全身淋巴結(jié)，特別是腹股溝淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)、氣管與支氣管炎淋巴結(jié)及下頜淋巴結(jié)腫大到2～5倍，有時可達10倍。切面硬度增大，均勻的蒼白色，集合淋巴小結(jié)也腫大。發(fā)生細菌感染，則淋巴結(jié)可見炎癥和化膿病變，使病變復雜化。肺腫脹，有散在，大而隆起橡皮狀硬塊，有黃褐色斑散布于肺表面。嚴重的病例，肺泡出血，部分病例尖葉和心葉萎縮或固質(zhì)化。?脾中度腫大，呈肉變。半數(shù)病例肝臟無明顯異常，其他病豬表現(xiàn)不同程度的虎斑狀外觀，并伴有輕度或中度萎縮，有的病例肝腫大。腎臟水腫、蒼白，被膜下有白色壞死灶，盲腸和結(jié)腸黏膜充血或瘀血。據(jù)報道，有的病例發(fā)生肝、肺、腎腫大，有廣泛的肉芽腫性炎癥。?

5.2組織學變化

淋巴結(jié)的皮質(zhì)及副皮質(zhì)區(qū)顯著擴張，有單核/巨噬細胞、組織細胞浸潤，有時還散布著大量的多核巨細胞。淋巴細胞減少，淋巴結(jié)基質(zhì)常增生或有嗜酸性白細胞浸潤。淋巴濾泡有由組織細胞、類上皮細胞、巨噬細胞、多巨細胞、嗜酸性白細胞、淋巴細胞集聚形成的肉芽腫。肺泡內(nèi)有單核細胞、嗜中性白細胞、嗜酸性白細胞浸潤，肺有多灶性肉芽腫或彌漫性間質(zhì)性肺炎。部分病例支氣管、血管周圍發(fā)生淋巴細胞、組織細胞、多核巨細胞浸潤。肝臟最常見門脈周圍淋巴細胞、組織細胞浸潤，竇狀隙內(nèi)單核炎性細胞聚集，肝細胞壞死。慢性死亡病例，由于黃疸而使肝小葉周圍纖維化，肝細胞壞死、消失，單核細胞彌漫性浸潤。腎臟有多灶性間質(zhì)性腎炎，主要在皮質(zhì)部發(fā)生淋巴細胞、組織細胞浸潤，少數(shù)病例有腎盂炎，急性滲出性腎小球腎炎。心臟多有各種炎性細胞浸潤，輕度或中度的多灶性心肌炎，胃腸肌層有不同程度的肌炎。?

6 診斷?

  本病的臨床癥狀和病理變化有一定特征性，具有一定的診斷價值。但豬圓環(huán)病毒易與其他病毒、細菌混合感染，確診本病需實驗室診斷。常用的診斷方法有電鏡檢查、間接免疫熒光試驗、原位雜交試驗、ELISA、PCR等。原位雜交試驗(ISH)：Nawagitgul(2000)研究制備了能區(qū)分PCV1和PCV2的探針。根據(jù)PCV2的ORF1和ORF2的有義鏈和反義鏈合成核酸探針。在42℃，58℃，ORF1反義鏈探針與感染細胞中PCV1和PCV2都雜交。在58℃時，ORF2反義鏈探針和PCV2核酸雜交，不與PCV?1核酸雜交。ORF1和ORF2有義鏈探針只與PCV2核苷酸結(jié)合。反義鏈探針產(chǎn)生的信號比有義鏈強。研究結(jié)果表明，ORF1反義鏈探針適合檢測兩種類型的PCV(PCV1和PCV2)，ORF2反義鏈探針可區(qū)分PCV1和競爭性酶聯(lián)免疫吸附試驗(c?ELISA?)：Walker(2000)報道以分離的PCV?2細胞培養(yǎng)物作為抗原，以PCV2特異性單克隆抗體作為競爭性反應物，以間接免疫熒光試驗作對照，c?ELISA的敏感性和特異性達到99.58%和97.14%，c?ELISA可用于大規(guī)模豬群的PCV快速診斷。聚合酶鏈式反應(PCR)：根據(jù)PCV DNA的核苷酸序列，設計特異性引物進行PCR反應，可直接檢測組織病料及其細胞培養(yǎng)物中的病毒核酸，是一種快速簡便特異的方法。Ouardani等建立了一種簡便的多重PCR法，可對PCV進行檢測和定型。該方法設計了2套引物，是根據(jù)PCV DNA的2個開放讀碼框的核苷酸序列設計的。第1套引物有2對引物，其中1對引物擴增ORF2上488bp，可檢測PCV1和PCV2，另1對引物只擴增PCV1的ORF1上的?375 bp?；第2套引物也有2對引物，其中1對引物擴增ORF1的646 bp，可檢測PCV1和PCV2，另1對引物只擴增PCV1的ORF2上的425 bp。這2套引物都可以對PCV進行檢測和定型。?

7 防制
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本病沒有有效的治療方法，抗生素對PMWS患豬無效。但抗生素的使用和良好的飼養(yǎng)管理，有助于控制二重感染。目前還沒有疫苗可供應用。PMWS嚴重影響豬的生長發(fā)育，但對其發(fā)病機理、傳染源等問題還不完全清楚，許多問題急待解決。我國是一個養(yǎng)豬大國，且PMWS已在我國廣為流行，應引起我國獸醫(yī)工作者的高度重視，及早開展PMWS的研究和調(diào)查。?

                                                                                                   www.zmyw.com<轉(zhuǎn)貼>

作者: 朱良 時間: 2007-8-15 21:52
理論性的東西太多了。
建議以后多發(fā)一些實用性的。
不過還是謝謝了！

作者: vetxy 時間: 2007-8-20 21:06
我不明白樓主發(fā)的關(guān)于PCV2的文章中都強調(diào)PCR在診斷中的作用。

事實上，常規(guī)PCR在診斷圓環(huán)病毒造成的疾病中基本是沒有意義的。原因我以前曾經(jīng)再三強調(diào)，是因為圓環(huán)病毒廣泛存在于健康與非健康豬群，PCR陽性只能說明有圓環(huán)病毒存在，但是不能表明這個豬的病是否就是圓環(huán)病毒造成的－－因為一個健康的豬也可以帶有圓環(huán)病毒，而帶有圓環(huán)病毒的豬可以完全健康的生長而不一定發(fā)病。

現(xiàn)在北美這邊有好些學者使用定量PCR來診斷圓環(huán)病毒，其中有兩位就在我現(xiàn)在這個學院，我跟他們都有交流并且和其中一位比較熟悉，他們的意見以及現(xiàn)在其他學者的意見是，用定量PCR可以診斷一個群體的豬當中圓環(huán)病毒是否造成群體的疾病是可以的，因為患斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥的豬群確實比健康豬群帶毒量高。但是如果落實到單一個豬，那么他們認為定量PCR也不是一個好的工具，因為豬與豬之間的個體差異比較大，不能定出一條標準線說帶毒高于這個量的就是患圓環(huán)病毒病的豬。最后他們都同意PCR在對圓環(huán)病毒診斷中其實實際作用不大，但是對科研還是有一定價值。

國際上現(xiàn)在為止診斷圓環(huán)病毒造成的斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥的標準是一下三點，缺一不可：
1 典型的臨床癥狀
2 典型的大體病變和病理組織學病變
3 在典型的組織學病變之中，用免疫組織化學或者原位雜交顯示出圓環(huán)病毒的病原

樓主大力宣揚PCR的診斷作用，特別在國內(nèi)，是會造成很大的誤導的。

最后請樓主明白我的發(fā)言是由于跟您觀點不一樣，并沒有針對個人的意思。然而我每次看到這樣的觀點，我還是一定會站出來說話的。

作者: ruth8315 時間: 2007-9-6 19:38
:hehe: :hehe: :hehe: :hehe: :hehe: :hehe: :hehe:

作者: 月光 時間: 2007-9-16 13:57
標題: 回復地毯的帖子
好文章，頂。頂頂頂頂

作者: 吉星高照 時間: 2007-10-2 21:20

原帖由 vetxy 于 2007-8-20 21:06 發(fā)表
我不明白樓主發(fā)的關(guān)于PCV2的文章中都強調(diào)PCR在診斷中的作用。

事實上，常規(guī)PCR在診斷圓環(huán)病毒造成的疾病中基本是沒有意義的。原因我以前曾經(jīng)再三強調(diào)，是因為圓環(huán)病毒廣泛存在于健康與非健康豬群，PCR陽性只能說明 ...

耳目一新，對實驗診斷既要信，又不要迷信

作者: 墨魚 時間: 2007-12-31 15:55
標題: 回復保安的帖子
用你的觀點指導實踐工作才是切實可行的，再次感謝你能挺身而出

作者: 墨魚 時間: 2007-12-31 15:58
標題: 回復 7樓的帖子
有同感，實驗室標本數(shù)有限，不能迷信

作者: 狒狒 時間: 2008-3-14 21:57
理論性的東西太多了，能介紹點使用的信息嗎？

作者: 任輝 時間: 2008-3-17 09:04
好，，，，，，，，，，，，，，，

作者: jsliguang 時間: 2008-4-8 17:15
標題: 還是正式版主知識豐富！
希望以后能多看看你發(fā)表的文章。

作者: wangliguo429 時間: 2008-4-9 16:39
樓主辛苦:xuehu:

作者: 張文豪 時間: 2008-5-8 15:09
很好的資料!很好的資料!很好的資料!
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