穿心蓮內(nèi)酯為爵床科植物穿心蓮的有效成分?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，穿心蓮內(nèi)酯具有調(diào)節(jié)血管舒縮[7]、抗血栓及血小板聚集[8]等多種作用，對機體內(nèi)微循環(huán)的調(diào)節(jié)具有重要意義。本試驗旨從大鼠腸黏膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞（RIMMVECs）分泌NO與ET-1的角度，探討SLT-Ⅱe具體的致病機制以及穿心蓮內(nèi)酯抗SLT-Ⅱe損傷RIMMVECs的作用機制。

　　1材料與方法

　　1.1材料

　　DMEM（Gibico）；標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清（Gibico）；SLT-Ⅱe粗提物（揚州大學(xué)微生物實驗室提供）；穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所）；大鼠腸黏膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞（北京農(nóng)學(xué)院實驗室提供）；NO試劑盒（深圳晶美公司）；ET-1試劑盒（上海尚柏生物公司）。

　　1.2方法

　　1.2.1大鼠腸黏膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞傳代培養(yǎng)

　　選取第10代的細(xì)胞進(jìn)行消化, 所得細(xì)胞液用完全培養(yǎng)基稀釋,將細(xì)胞密度調(diào)整到5 ×104 個?mL-1, 充分混勻后接種至96孔的培養(yǎng)板中,每個孔接種0.2 mL，然后置入CO2 培養(yǎng)箱中靜止培養(yǎng)48 h。

　　1.2.2試驗前細(xì)胞計數(shù)

　　培養(yǎng)48h 后，定時消化三孔細(xì)胞作計數(shù)，當(dāng)細(xì)胞數(shù)量增至1×105 個?mL-1 時，用于實驗。

　　1.2.3分組方案

　　各孔細(xì)胞分為空白對照組、SLT-Ⅱe組、SLT-Ⅱe＋穿心蓮內(nèi)酯1組和SLT-Ⅱe＋穿心蓮內(nèi)酯2組?？瞻讓φ战M加DMEM維持培養(yǎng)基，其余三組加含有10 μg?mL-1 SLT-Ⅱe的DMEM維持培養(yǎng)基，2 h后再向SLT-Ⅱe＋穿心蓮內(nèi)酯1組和SLT-Ⅱe＋穿心蓮內(nèi)酯2組分別加入終濃度為5 μg?mL-1、20 μg?mL-1的穿心蓮內(nèi)酯液，置于CO2 培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

　　1.2.4取樣

　　每組分6 h、12 h、18 h三個觀測點，在各時間點取樣測定細(xì)胞上清液中NO和ET-1的含量。

　　1.2.5測定

　　NO的測定用硝酸還原酶法,按照試劑盒說明操作,使用分光光度計于530 nm 處檢測。

　　ET-1的測定用ELISA法，按照試劑盒說明操作，使用酶標(biāo)儀于450 nm 處檢測。

　　1.2.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計

　　采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件處理。

　　試驗結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，試驗組間差異采用t檢驗法。

　　2結(jié)果

　　2.1不同濃度穿心蓮內(nèi)酯抗SLT-Ⅱe對RIMMVECs分泌NO的影響

　　表1　不同濃度穿心蓮內(nèi)酯抗SLT-Ⅱe對RIMMVECs分泌NO的影響（治療組）（±S μmol?L-1）(n＝3)