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標(biāo)題: 藥敏實(shí)驗(yàn)的病原菌如何培養(yǎng)？ [打印本頁(yè)]

作者: wangyanzhensuo 時(shí)間: 2007-12-15 15:50
標(biāo)題: 藥敏實(shí)驗(yàn)的病原菌如何培養(yǎng)？
請(qǐng)大家?guī)蛶兔?！我?duì)病原菌的培養(yǎng)不會(huì)！請(qǐng)幫助！:huahua:

作者: ⒉冄⑧號(hào) 時(shí)間: 2009-7-7 14:36
是臨床上做藥敏嗎直接那動(dòng)物細(xì)菌多的地方涂到平皿上就可以了

作者: adidas1052 時(shí)間: 2009-7-31 11:03
用瓊脂培養(yǎng)基平皿培養(yǎng)！

作者: l24029789 時(shí)間: 2009-10-9 18:28
培養(yǎng)基會(huì)做吧? 最簡(jiǎn)單的辦法就是留肝用肝在培養(yǎng)基上涂一層,之后放好藥敏片,放入恒溫箱,過(guò)6小時(shí)→OK

[ts]l24029789 于 2009-10-9 18:30 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

如果你需要培養(yǎng)基的配方可以留言

作者: anfu123 時(shí)間: 2009-11-4 09:40
啥方？可以分享分享嗎？

作者: 風(fēng)1119 時(shí)間: 2009-11-17 17:59
體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)
一、抑菌試驗(yàn)
試驗(yàn)方法主要有定性測(cè)定的紙片瓊脂擴(kuò)散法（disk agar diffusion tesk, Kirby-bauer tesk）、定量測(cè)定的稀釋法（dilution tist）和E試驗(yàn)法（E-test）。
(一) 紙片瓊脂擴(kuò)散法
1.基本原理
將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種待檢菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后不斷地向紙片周?chē)鷧^(qū)域擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度，在紙片周?chē)志鷿舛确秶鷥?nèi)待檢菌的生長(zhǎng)被抑制，從而產(chǎn)生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映檢測(cè)菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度，并與該藥對(duì)待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
2.試驗(yàn)方法
⑴ 培養(yǎng)基的制備
普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：可去生化試劑店購(gòu)買(mǎi)。做不同細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)可選擇不同的培養(yǎng)基。
⑵ 藥敏片的制備
① 藥敏片的制備
取新華1號(hào)定性濾紙，用打孔機(jī)打成6毫米直徑的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎。經(jīng)15磅15-20分鐘高壓消毒后，放在37℃溫箱或烘箱中數(shù)天，使完全干燥。
② 抗菌藥紙片制作
在上述含有50片紙片的青霉素瓶?jī)?nèi)加入藥液0.25毫升，并翻動(dòng)紙片，使各紙片充分浸透藥液，翻動(dòng)紙片時(shí)不能將紙片搗爛。同時(shí)在瓶口上記錄藥物名稱(chēng)，放37℃溫箱內(nèi)過(guò)夜，干燥后即密蓋，如有條件可真空干燥。切勿受潮，置陰暗干燥處存放，有效期3-6個(gè)月。
⑶ 試驗(yàn)方法
① 于純培養(yǎng)平板上，挑取相同的菌落4～5個(gè)（圖12-1a）。
② 接種于3～5ml水解酪蛋白（Mueller-Hinton,MH）肉湯中，經(jīng)35℃培養(yǎng)6～8h(圖12-1b)。
③ 用無(wú)菌生理鹽水或MH肉湯校正菌液濁液，使其與標(biāo)準(zhǔn)比濁管的濃度相同(圖12-1c）。校正過(guò)的菌液（一般為0.5麥?zhǔn)蠁挝唬┰?5min內(nèi)接種完。
④ 用無(wú)菌棉拭蘸取校正過(guò)的菌液，在試管壁上擠壓幾次，壓去多余的菌液，涂布整個(gè)MH平板表面，反復(fù)數(shù)次，每次旋轉(zhuǎn)平板60°(圖12-1d)，使整個(gè)平板涂均勻。
⑤ 涂布菌液的平板于室溫中干燥3～5min后，用紙片分配器或無(wú)菌鑷子取藥敏紙片，貼于平板表面，并用鑷子輕壓一下紙片，使其貼平。每張紙片的間距不小于24mm，紙片的中心距平板的邊緣不小于15mm，90mm直徑的平板宜貼6張藥敏紙片(圖12-1e)。（6）將貼好紙片的平板置35℃培養(yǎng)18～24h后，用標(biāo)尺量取抑菌圈直徑(圖12-1f)。
3.結(jié)果判斷　
根據(jù)抑菌圈的大?。ú煌股仄湟志Υ笮〉臉?biāo)準(zhǔn)不一致），判斷為敏感（S）、耐藥（R）或中度敏感（I）。某些細(xì)菌可蔓延生長(zhǎng)至某種抗生素的抑菌圈內(nèi)，如磺胺抑菌圈內(nèi)可能有微量的細(xì)菌生長(zhǎng)，可忽略不計(jì)，應(yīng)以外圈為準(zhǔn)。

(a)                                           (b)                         (c)

(d)                               (e)                            (f)
圖12-1　　Kirby-Bauer法試驗(yàn)程序
（a）挑取菌落（b）轉(zhuǎn)種肉湯（c）比濁（d）涂布平板上（e）放置藥敏紙片（f）量取抑菌圈大小
（二）試管稀釋法
即最低（或最?。┮志鷿舛龋╩inimal inhibitory concentration,MIC）的測(cè)定。
1.基本原理　
在肉湯中將抗菌藥物進(jìn)行一系列（對(duì)倍）稀釋后，定量接種待檢菌，35℃培養(yǎng)24h后觀察，抑制待檢菌肉眼可見(jiàn)生長(zhǎng)的最低藥物濃度，即為該藥物對(duì)待檢菌的最低抑菌濃度。
2.試驗(yàn)方法　
取無(wú)菌試管26支，排成兩排。另取3支試管，分別作為肉湯對(duì)照管、待檢菌生長(zhǎng)對(duì)照管和質(zhì)控菌生長(zhǎng)對(duì)照管。每管加入MH肉湯2ml，在第1管加入經(jīng)MH肉湯稀釋的藥物原液（256mg/L）2ml混勻，然后吸取2ml至管2管，混勻后再吸取2ml至第3管。如此連續(xù)對(duì)倍稀釋至第13管，并從第13管中吸取2ml棄去。此時(shí)各管含藥濃度依次為128、64、32、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125mg/L。第1排試管每管加入待檢菌菌液（1×107菌落形成單位（CFU）/ml）0.1ml，第2排試管每管加入標(biāo)準(zhǔn)菌菌液（1×107菌落形單位(CFU)/ml）0.1ml，最終接種菌量約為5×105 CFU/ml。置35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24h。觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。
3.結(jié)果判斷　
藥物最低濃度管無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)者（對(duì)照管細(xì)菌生長(zhǎng)良好），即為待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）。(圖　12-2)

圖12-2  MIC測(cè)定的試驗(yàn)結(jié)果
左起第四管為藥物最低濃度而無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，即待檢菌的MIC。
（三）E試驗(yàn)法
1.基本原理　
該方法結(jié)合擴(kuò)散法和稀釋法的原理和特點(diǎn)，操作簡(jiǎn)便如擴(kuò)散法，但可以同稀釋法一樣直接定量測(cè)出藥物對(duì)待檢菌的MIC。其試條為商品化塑料試條，長(zhǎng)50mm,寬5mm，內(nèi)含干化、穩(wěn)定、濃度由高至低呈指數(shù)梯度分布的某種抗菌藥物?？捎糜诟鞣N常見(jiàn)菌、微需氧菌、分枝桿菌、厭氧菌和真菌等的藥敏試驗(yàn)。酵母菌和霉菌的藥敏試驗(yàn)是一項(xiàng)新的技術(shù)，由于影響因素較多，直接藥敏試驗(yàn)為困難，E試驗(yàn)法由于結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定，受到認(rèn)同。
2.試驗(yàn)方法　
菌液、平板接種等同紙片瓊脂擴(kuò)散法（厭氧菌、隱球菌和其他菌懸液濃度為1個(gè)麥?zhǔn)蠁挝?，其他?xì)菌為0.5個(gè)麥?zhǔn)蠁挝唬?。將E-test試條輕放在接種、干燥后的瓊脂平板上（90mm平板放置1～2條），置一定條件下培養(yǎng)：厭氧菌置厭氧環(huán)境培養(yǎng)48h，微需菌置5%～10%二氧化碳環(huán)境培養(yǎng)24～48h，隱球菌培養(yǎng)48～72h，其他細(xì)菌培養(yǎng)24h。
3.結(jié)果判斷　
培養(yǎng)后圍繞著試條可形成一個(gè)卵圓形的抑菌圈，抑菌圈與試條的橫向相交處的讀數(shù)刻度，即是該抗菌藥物對(duì)待檢菌的MIC。(圖12-3，圖12-4)

圖12-3　　E試驗(yàn)示意圖

圖12-4 E試驗(yàn)法的試驗(yàn)結(jié)果
（a）常見(jiàn)菌的試驗(yàn)結(jié)果（b）苛養(yǎng)菌的試驗(yàn)結(jié)果（c）厭氧菌的試驗(yàn)結(jié)果（d）酵母菌的試驗(yàn)結(jié)果（e）真菌的試驗(yàn)結(jié)果

作者: ghw221 時(shí)間: 2010-1-18 22:59
一般用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)就可以。

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