畜牧人
標(biāo)題: 豬病實驗室常規(guī)診斷技術(shù)之 十三、豬喘氣病間接血凝試驗操作方法 [打印本頁]
作者: nnii521 時間: 2009-6-24 21:20
標(biāo)題: 豬病實驗室常規(guī)診斷技術(shù)之 十三、豬喘氣病間接血凝試驗操作方法
本方法系用肺炎霉形體（M.hyopneumeniae）抗原致敏戊二醛處理的綿羊紅細(xì)胞，凍干后作為抗原，供作間接血凝反應(yīng)檢測豬霉形體肺炎（豬喘氣?。┛贵w之用。
1．凍干的10%抗原致敏紅細(xì)胞，至6~8℃或低溫保存，使用時每支加1/15M，pH7.2磷酸鹽緩沖鹽水（PBS下同）5毫升，即為2%抗原致敏紅細(xì)胞，供作抗原之用。
2．凍干的陽性、陰性豬血清：在4~8℃或低溫保存，使用時每支各加PBS 1毫升（已為2.5倍稀釋），混勻后，供作陽性，陰性豬血清對照之用。
3．凍干的健康兔血清：在4~8℃或低溫保存，使用時，每支（1毫升）啟封后加到50毫升 PBS中即為1%健康兔血清稀釋劑，供作稀釋被檢血清，陰性、陰性對照豬血清及預(yù)濕稀釋棒之用。
4．10%戊二醛化紅細(xì)胞：在4~8℃或低溫保存，使用時，搖勻后取需要量經(jīng)低離心去掉上液，將紅細(xì)胞用PBS稀釋液成2%的懸浮液，作吸收初檢豬血清中的嗜異性因子之用。
5．被檢豬血清的處理：分離出來的豬血清先經(jīng)56℃30分鐘滅活，然后每頭豬血甭取0.2毫升，加0.3毫升2%戊二醛紅細(xì)胞37℃吸收30分鐘，經(jīng)低速離心或自然沉淀后，用稀釋棒小心地蘸取上面的血清（已為2.5倍稀釋）作檢驗抗體之用。
6．微量反應(yīng)板：為72孔“V”型有機玻璃制品（市售品），供作微量間接血凝反應(yīng)之用。
7．微量稀釋棒：備有每支載量為0.025毫升的微量稀釋棒1~2套（每套12支），供作稀釋血清之用（市售品）。
8．微量移液器：供滴加稀釋劑和抗原致敏紅細(xì)胞之用（市售品）。
1．首先用記號筆在微量反應(yīng)板的一邊標(biāo)明被檢血清，陽性、陰性對照豬血清及抗原對照，各占一橫排孔。
2．滴加稀釋劑：用微量移液器每孔加0.025毫升稀釋劑。
3．血清稀釋：使用微量稀釋棒先在稀釋劑中預(yù)濕后，以濾紙吸干，再小心地蘸取被檢豬血清，立于第一孔中，可以同時稀釋11個血清，以又手合掌迅速搓動11根稀釋棒，達(dá)60次，然后11根稀釋棒小心移至第2孔，搓動同樣轉(zhuǎn)速和次數(shù)，再移至第3孔（被檢豬血清可以只測到第3孔，即血清稀釋到1：20），而陽性、陰性對照豬血必須稀釋到第6孔。
4．滴加抗原致敏紅細(xì)胞：用微量移液器吸取搖勻后的2%抗原致敏紅細(xì)胞，每孔加0.025毫升。
5．抗原對照：為0.025毫升稀釋液+0.025毫升2%抗原致敏紅細(xì)胞,只用2孔。
6．振蕩：以上加樣完畢后，置微型振蕩15~30秒，靜置室溫1~2小時觀察記錄結(jié)果。
以呈現(xiàn)（++）血凝反應(yīng)的最高稀釋度作為血清效價終點。血凝反應(yīng)強度表示如下。
++++：紅細(xì)胞在孔底凝成團(tuán)塊，面積較大。
+++：紅細(xì)胞在孔底形成較厚層凝集，卷邊呈鋸齒狀。
++：紅細(xì)胞在孔底形成薄層均勻凝集面積較上二者大，“++”以上的凝集為紅細(xì)胞凝集陽性。
±：紅細(xì)胞沉于孔底，但周圍不光滑或中心空白。
微量反應(yīng)板靜置1~2小時后，正常結(jié)果是陽性對照豬血清效價≥1：10，陰性對照豬血清效價<1：5，抗原對照無自凝現(xiàn)象。
被檢豬血清效價>1：10（即達(dá)到第2孔以上）時即判為陽性；效價<1：5者判為陰性，介于二者之間判為可疑。
由于自然感染豬的感染時間不盡相同，一般豬只感染后第26天。血清抗體效價可達(dá)到陽性反應(yīng)階段。所以，隔離的豬在第一次檢后4周，對于可疑和陰性豬必須復(fù)查一次。如果兩次檢查結(jié)果均為陰性的豬，則判為無豬霉形體肺炎。
作者: dwm8080 時間: 2009-6-24 22:13
基礎(chǔ)知識好，打包壓縮更方便
作者: 姜寧 時間: 2009-6-25 00:36
你可以操作嗎，到時找你檢測，如何？
| 歡迎光臨 畜牧人 (http://ffers.com.cn/) |
Powered by Discuz! X3.5 |