畜牧人

標題: 有關(guān)大腸桿菌工業(yè)發(fā)酵 [打印本頁]

作者: mondl 時間: 2009-9-12 09:54
標題: 有關(guān)大腸桿菌工業(yè)發(fā)酵
有誰有大腸桿菌工業(yè)發(fā)酵的資料的

轉(zhuǎn)基因大腸桿菌，通過基因工程手段，設(shè)計一段核苷酸序列移植入大腸桿菌，用于生產(chǎn)所需的目的蛋白。想了解下有誰做過這方面研究的，能不能分享下。

或者發(fā)到我郵箱：mondl@163.com

謝謝了

[ts]mondl 于 2009-9-12 09:55 補充以下內(nèi)容[/ts]

希望知道的朋友幫下忙，或者開貼出售，不過窮人，不要太貴:haoa:

作者: 孤世才子 時間: 2009-9-12 10:09
期待高手回答，，，，，，，，，，

作者: mondl 時間: 2009-9-14 09:41
目的產(chǎn)品用于飼料方面，不是醫(yī)藥、食品，相對要求要松點，望達人不吝賜教

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-9-18 10:58
我們實驗室的課題啊。（微生物技術(shù)國家重點實驗室，國家糖工程技術(shù)研究中心）在國內(nèi)差不多是專長。

你說那一塊啊，是菌株構(gòu)建還是發(fā)酵過程優(yōu)化??？

作者: mondl 時間: 2009-9-19 08:16
發(fā)酵過程優(yōu)化吧

菌種是別人提供的，沒接觸過這個，要寫相關(guān)內(nèi)容不知道如何入手。。。。

提供者是實驗室培養(yǎng)，說實驗室發(fā)酵跟工業(yè)發(fā)酵相差比較大，他對工業(yè)發(fā)酵也不了解

作者: mondl 時間: 2009-9-19 15:26

引用自葉赫娜蘭-孤城發(fā)表于 2009-9-18 10:58的內(nèi)容
我們實驗室的課題啊。（微生物技術(shù)國家重點實驗室，國家糖工程技術(shù)研究中心）在國內(nèi)差不多是專長。

你說那一塊啊，是菌株構(gòu)建還是發(fā)酵過程優(yōu)化??？

現(xiàn)在的轉(zhuǎn)基因菌種是人為移植一段編寫的核苷酸序列段，設(shè)計核苷酸序列在菌體中表現(xiàn)為蛋白質(zhì)（目標小肽不斷重復），在體內(nèi)蛋白酶酶解為目標小肽.
不知道這個發(fā)酵過程怎么控制的好

煩李博士幫幫忙了

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-9-21 08:48
1,菌株構(gòu)建好沒有，目前表達量多少？可以進入優(yōu)化程序了嗎？
2，菌株穩(wěn)定性如何？使用整合到基因組還是質(zhì)粒？
3，誘導機制？
4，用大腸桿菌？是包涵體嗎？如不是，似乎用酵母表達更合理些。
5，這個短肽是什么？

望認真回答一下，我看能幫您些什么。

作者: mondl 時間: 2009-9-21 09:32

引用自葉赫娜蘭-孤城發(fā)表于 2009-9-21 08:48的內(nèi)容
1,菌株構(gòu)建好沒有，目前表達量多少？可以進入優(yōu)化程序了嗎？
2，菌株穩(wěn)定性如何？使用整合到基因組還是質(zhì)粒？
3，誘導機制？
4，用大腸桿菌？是包涵體嗎？如不是，似乎用酵母表達更合理些。
5，這個短肽是什么？

1. 菌株構(gòu)建好了的，目前實驗室表達量是12g/L。目的蛋白占總蛋白的40%左右。
2. 實驗室發(fā)酵菌株穩(wěn)定性達到要求，Gn多聚體核苷酸序列是克隆到pET2a質(zhì)粒上的。
3. 這個不懂。。。。。原文寫下來吧：將pR-12Gn多聚體核苷酸序列克隆到pET32a質(zhì)粒上，獲得原核表達載體pET-12Gn，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3），經(jīng)陽性克隆檢測并測序證明序列正確后，在IPTG誘導下進行蛋白表達。
4. 這個我也不是很清楚，是別人實驗室提供的數(shù)據(jù)。。。。他們貌似選過不少菌種，最后選擇大腸桿菌做母體。（根據(jù)大腸桿菌偏愛合成含特異胰蛋白酶和胃蛋白酶酶切點的Gly-Gln二肽核苷酸序列Gn，并克隆至pRSET A質(zhì)粒中，采用串聯(lián)重復策略獲得pR-12Gn重組質(zhì)粒。）
5. 這個短肽是Gly-Gln二肽，不是直接表達，在菌體獲取聚合蛋白，經(jīng)酶切后獲取小肽。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-9-21 10:08
這個水平（12G）可以轉(zhuǎn)入發(fā)酵了。想做到什么水平呢？

是發(fā)文章的水平還是工業(yè)水平。如是前者，要有代謝流分析和比較時髦點的算法----也就是先做試驗，自己做出明確目標后，把算法湊上----就行了。
如是后者，則要傳統(tǒng)分析結(jié)合代謝流分析，選擇工藝路線等等一步一步往下走。

不管怎樣，要做N批發(fā)酵，必須要有比較先進的發(fā)酵罐。

作者: mondl 時間: 2009-9-21 10:17
這個按照你的經(jīng)驗，理論上用什么類型的發(fā)酵罐跟按照什么樣的發(fā)酵流程比較合理？

主要作用是在于寫文章，但是沒接觸過工業(yè)發(fā)酵，對這方面一竅不通。。。實驗室發(fā)酵跟工業(yè)發(fā)酵相差也比較大，可比性不高。。。。

作者: mondl 時間: 2009-9-21 10:22
這個按照正常要進行N批發(fā)酵是知道的，畢竟每個地方，每個發(fā)酵罐的構(gòu)成會有一定的差異，各地底物之類有一定差異。

若誘導條件在溫度30℃，Amp濃度為50μg/mL，0.1mMIPTG過夜誘導的情況下會怎樣，你看看理論上的數(shù)據(jù)能達到什么程度，有什么建議的？

謝謝了

作者: gaoyuyun 時間: 2009-9-21 12:40
工業(yè)生產(chǎn)和實驗室是不一樣的，一定要注意

作者: mondl 時間: 2009-9-21 14:13
就是因為不一樣，所以才要找資料。。。。

樓上太油菜了，論壇幣911:5s:

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-9-21 18:36
12# mondl 你說的是常規(guī)條件啊。

普通實驗室發(fā)酵罐就可以，要有在線參數(shù)：PH，DO，溫度，并可控。離線檢測葡萄糖，氨基氮，溶磷。

一般的，就可以進行一些時髦的計算了，比如，引入差商，引入擬合法，響應面就可以了，可以做得很漂亮。

要不要代謝流分析呢？如要，還要加尾氣分析儀，稱重設(shè)備。

作者: zhenjieli 時間: 2009-9-21 20:51
不是太懂，感覺應該是很有前途的。

作者: mondl 時間: 2009-9-22 08:39
我也不懂，越看多了就越覺得深奧了:5s:

給孤城兄說的有點：如入人間仙境了，:tiaotiao:

不是說孤城兄說的不好，是說的很到位，只不過我說真的沒涉及過這方面的，還真不知道個中道理:hehes:

作者: mondl 時間: 2009-9-22 08:55
15# 葉赫娜蘭-孤城

不過實驗室發(fā)酵罐跟工業(yè)發(fā)酵罐規(guī)格上差很遠吧，這樣其他可控條件之類的都變化很大吧，況且實驗室的底物之類一般都跟工業(yè)怎樣的有點的差別吧，工業(yè)發(fā)酵的其他可控條件感覺沒沒可能像實驗室那樣控制的那么好，再怎樣嚴格，在中國這個地方還是會出現(xiàn)些不可控的因素

這樣感覺綜合起來總體條件應該也差的比較多了

不過怎樣也好，都是謝謝孤城兄的熱心解答了，幫了不少忙

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-9-22 09:24
暈，我還沒展開講呢。還沒進入正題啊。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-9-22 09:36

引用自mondl 發(fā)表于 2009-9-22 08:55的內(nèi)容
15# 葉赫娜蘭-孤城

不過實驗室發(fā)酵罐跟工業(yè)發(fā)酵罐規(guī)格上差很遠吧，這樣其他可控條件之類的都變化很大吧，況且實驗室的底物之類一般都跟工業(yè)怎樣的有點的差別吧，工業(yè)發(fā)酵的其他可控條件感覺沒沒可能像實驗

工業(yè)發(fā)酵看產(chǎn)品，一般50噸到300噸常見。但藥品有100升的，總體講，在相同參數(shù)下，工業(yè)比實驗室要嚴格得多。造價也貴的多。

你的實驗，用30升最適合，再小一點，攪拌性能就差得太多。參數(shù)會出現(xiàn)噪音干擾性顫抖，而30升，可以對參數(shù)的背景噪音的干擾，做最大程度的忽略，數(shù)據(jù)還能湊著看----當然，越大越好，不過，實驗室水平的小試就不接受了。50升左右或以上也行，有可能要修改下水系統(tǒng)，購置時要小心。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-9-22 09:42
“況且實驗室的底物之類一般都跟工業(yè)怎樣的有點的差別吧”

在解釋這一點。

實驗室底物和工業(yè)上講，如果說差別，不如說是配方思路造成的差別，并不存在底物選擇上的差別----都有很廣的選擇性。當然，選擇標準是有差異的，一句配方思路的差異，實驗室水平要求底物是“單一組分，純（擔不是高純度，就是單一的意思）”。工業(yè)水平要求就多一個，是兩個：1，穩(wěn)定，明確（但不要求一定“單一”），2，質(zhì)量要“好”。

總體說來，工業(yè)要求水平更高些。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-9-22 09:45
“工業(yè)發(fā)酵的其他可控條件感覺沒沒可能像實驗室那樣控制的那么好，再怎樣嚴格，在中國這個地方還是會出現(xiàn)些不可控的因素”

呵呵，正好相反啊。任何時候，工業(yè)自身的特點決定了嚴格是大大高于實驗室的。在典型的發(fā)酵行業(yè)內(nèi)，任何一個成熟的車間，嚴格程度，高于任何一個國內(nèi)的實驗室。（失敗的車間除外）

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-9-22 09:48
補充一點，事故不能說明不嚴格，是規(guī)模和復雜帶來的，可以減少，不可避免的----與幾率有關(guān)----當然，車間會認為事故時可以避免的，可以降到概率為零，這不是錯的。但是，概率為零的事物，不是不會發(fā)生的事物。

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