畜牧人

標(biāo)題: 對(duì)纖維素酶測(cè)定問(wèn)題求解！ [打印本頁(yè)]

作者: zzy8604 時(shí)間: 2011-2-23 14:43
標(biāo)題: 對(duì)纖維素酶測(cè)定問(wèn)題求解！
本帖最后由 zzy8604 于 2011-2-23 14:48 編輯

按Steward(1997)方法測(cè)定，以純棉花在瘤胃液中培養(yǎng)48小時(shí)(38 ℃ )的消失率代表瘤胃液中纖維素酶的相對(duì)活力。

在實(shí)驗(yàn)中，我用的是亨氏管保持的厭氧環(huán)境，遇到幾個(gè)問(wèn)題：一、試驗(yàn)中用的金屬濾布是不是用的特殊的金屬？加入重鉻酸鉀后在沸水浴，溶液的顏色發(fā)生了改變。金屬濾布中的鐵和重鉻酸鉀發(fā)生了反應(yīng)，還有一股刺鼻的味道。二、用的金屬濾布是不是要稱重，保持單一的變量？三、配制的硫酸亞鐵銨溶液是不是要進(jìn)行標(biāo)定？在網(wǎng)上查了下，有的是用重鉻酸鉀標(biāo)定，那么用公式中的V1就可以算出來(lái)。按照國(guó)標(biāo)是用的高錳酸鉀來(lái)標(biāo)定。

具體方法見下（也是參考其他人的）：

按Steward (1997)方法測(cè)定，稱取5毫克脫脂棉于試管中，加入Menke培養(yǎng)液1毫升，再加瘤胃液2毫升，混合后在38℃恒溫水浴振蕩器中厭氧培養(yǎng)2天。取出后放在金屬濾布上（200目）過(guò)濾，在依次用水、2mol/L氫氧化鈉、水、2mol/L醋酸、水沖洗。吸干，連同濾布一起移入50毫升錐形瓶中。在錐形瓶中加入0.36mol/L重鉻酸鉀5毫升，沸水浴30分鐘，冷卻后加入15毫升蒸餾水，2滴鄰苯氨基苯甲酸作指示劑，用0.2mol/L硫酸亞鐵銨滴定到終點(diǎn)（由紫紅色變成藍(lán)色），記錄所消耗的毫升數(shù)（V3）.用未被瘤胃液作用的5毫克棉花，按同樣操作做空白對(duì)照。記錄所消耗的毫升數(shù)（V2）.以純棉花在瘤胃液中培養(yǎng)48小時(shí)（38℃）的消失率代表瘤胃液中纖維素酶的相對(duì)活力。

纖維素酶的相對(duì)活力%=（V3-V2）/( V1-V2)×100%

其中，V1為5毫升0.36mol/L重鉻酸鉀所需0.2mol/L硫酸亞鐵銨的滴定毫升數(shù)。

謝謝大家！

作者: 401636839 時(shí)間: 2011-2-23 16:26
用3.5 一二硝基水楊酸法測(cè)Cx 酶活力，纖維素酶水解纖維素，產(chǎn)生纖維二糖、葡萄糖等還原糖，能將3.5 一二硝基水楊酸中的硝基還原成橙黃色的氨基化合物，利用比法色法測(cè)定其還原物的生成量來(lái)表示酶的活力

作者: zzy8604 時(shí)間: 2011-2-23 18:49
本帖最后由 zzy8604 于 2011-2-25 16:38 編輯

那種方法我也知道現(xiàn)在就要用這種方法測(cè)纖維素酶的活性不需要分開來(lái)測(cè) 測(cè)總的就可以了

問(wèn)過(guò)一些老師都沒有回應(yīng)，只有到論壇來(lái)問(wèn)下，還是沒人氣啊 {:3_98:}

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