畜牧人

標題: 對纖維素酶測定問題求解！ [打印本頁]

作者: zzy8604 時間: 2011-2-23 14:43
標題: 對纖維素酶測定問題求解！
本帖最后由 zzy8604 于 2011-2-23 14:48 編輯

按Steward(1997)方法測定，以純棉花在瘤胃液中培養(yǎng)48小時(38 ℃ )的消失率代表瘤胃液中纖維素酶的相對活力。

在實驗中，我用的是亨氏管保持的厭氧環(huán)境，遇到幾個問題：一、試驗中用的金屬濾布是不是用的特殊的金屬？加入重鉻酸鉀后在沸水浴，溶液的顏色發(fā)生了改變。金屬濾布中的鐵和重鉻酸鉀發(fā)生了反應，還有一股刺鼻的味道。二、用的金屬濾布是不是要稱重，保持單一的變量？三、配制的硫酸亞鐵銨溶液是不是要進行標定？在網(wǎng)上查了下，有的是用重鉻酸鉀標定，那么用公式中的V1就可以算出來。按照國標是用的高錳酸鉀來標定。

具體方法見下（也是參考其他人的）：

按Steward (1997)方法測定，稱取5毫克脫脂棉于試管中，加入Menke培養(yǎng)液1毫升，再加瘤胃液2毫升，混合后在38℃恒溫水浴振蕩器中厭氧培養(yǎng)2天。取出后放在金屬濾布上（200目）過濾，在依次用水、2mol/L氫氧化鈉、水、2mol/L醋酸、水沖洗。吸干，連同濾布一起移入50毫升錐形瓶中。在錐形瓶中加入0.36mol/L重鉻酸鉀5毫升，沸水浴30分鐘，冷卻后加入15毫升蒸餾水，2滴鄰苯氨基苯甲酸作指示劑，用0.2mol/L硫酸亞鐵銨滴定到終點（由紫紅色變成藍色），記錄所消耗的毫升數(shù)（V3）.用未被瘤胃液作用的5毫克棉花，按同樣操作做空白對照。記錄所消耗的毫升數(shù)（V2）.以純棉花在瘤胃液中培養(yǎng)48小時（38℃）的消失率代表瘤胃液中纖維素酶的相對活力。

纖維素酶的相對活力%=（V3-V2）/( V1-V2)×100%

其中，V1為5毫升0.36mol/L重鉻酸鉀所需0.2mol/L硫酸亞鐵銨的滴定毫升數(shù)。

謝謝大家！

作者: 401636839 時間: 2011-2-23 16:26
用3.5 一二硝基水楊酸法測Cx 酶活力，纖維素酶水解纖維素，產(chǎn)生纖維二糖、葡萄糖等還原糖，能將3.5 一二硝基水楊酸中的硝基還原成橙黃色的氨基化合物，利用比法色法測定其還原物的生成量來表示酶的活力

作者: zzy8604 時間: 2011-2-23 18:49
本帖最后由 zzy8604 于 2011-2-25 16:38 編輯

那種方法我也知道現(xiàn)在就要用這種方法測纖維素酶的活性不需要分開來測測總的就可以了

問過一些老師都沒有回應，只有到論壇來問下，還是沒人氣啊 {:3_98:}

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