畜牧人
標(biāo)題: 雞球蟲病(Coccidiosis in Chicken) [打印本頁]
作者: gansao-hua 時間: 2013-12-1 23:31
標(biāo)題: 雞球蟲病(Coccidiosis in Chicken)雞球蟲病 (Coccidiosis in Chicken) 雞球蟲病是雞常見且危害十分嚴(yán)重的寄生蟲病,它造成的經(jīng)濟損失是驚人的。據(jù)統(tǒng)計,美國在1951 ~1960 年因禽球蟲病損失4700 萬美元;英國每年在養(yǎng)雞業(yè)上至少要花費550 萬英鎊(其中大約有一半系用防治球蟲病的藥費)。從世界范圍來看,雞球蟲病每年能造成6000 萬至1.2 億美元的損失。我國雖無精確的統(tǒng)計,但從局部零散的資料來看,每年因雞球蟲病造成的經(jīng)濟損失,數(shù)目也是相當(dāng)可觀的。盡管現(xiàn)代在防治、營養(yǎng)、管理和遺傳學(xué)方面取得了很大的進(jìn)展,雞球蟲病仍然是最普遍的雞病之一。因而,目前用于藥物預(yù)防的費用,在美國已超過9000 萬美元,全世界將超過3 億美元。
(一)、病原
雞球蟲是一種原蟲,分類學(xué)上隸屬于原生動物亞界,頂器門,孢子蟲綱,真球蟲目,艾美耳科,艾美耳屬。世界各國已經(jīng)記載的雞球蟲種類共有13 種之多,即1. 堆型艾美耳球蟲(Eirneria acervulina ),2. 布氏艾美耳球蟲(E.brunetti ),3. 哈氏艾美耳球蟲(E.hagani ),4. 巨型艾美耳球蟲(E.maxima) ,5. 變位艾美耳球蟲(E.mivati) ,6. 和緩艾美耳球蟲(E.mitis ),7. 毒害艾美耳球蟲(E.necatrix) ,8. 早熟艾美耳球蟲( E.praecor) ,9. 柔嫩艾美耳球蟲(E.tenella ),10.E.beachi ,11.E.johnsoni ,12.E.tyzzeri 和13.E.sporadica 。前述1 ~9 種為大多數(shù)學(xué)者所公認(rèn),10 ~13 種的獨立性不少學(xué)者認(rèn)為是可疑的。我國何承德、張朝聘(1959) 報道西安市發(fā)現(xiàn)巨型艾美耳球蟲和和緩艾美耳球蟲;甘肅(1960) 記載蘭州市有柔嫩艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲及和緩艾美耳球蟲;熊大仕、林昆華(1965) 報告北京存在柔嫩艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲、早熟艾美耳球蟲和哈氏艾美耳球蟲6 種;北京農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)系寄生蟲學(xué)教研組(1977) 報道北京地區(qū)除上述6 種外,還有毒害艾美耳球蟲;上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院(1978) 報告上海市危害雞較嚴(yán)重的有柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲和變位艾美耳球蟲4 種;陳淑玉等(1978) 報道華南地區(qū)以柔嫩艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲和巨型艾美耳球蟲最為常見;白啟(1981) 報道廣州地區(qū)雞球蟲有9 個種,即柔嫩艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲、變位艾美耳球蟲、早熟艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、布氏艾美耳球蟲和哈氏艾美耳球蟲,作者還報道蘭州除上述9 種外,還存在等孢屬球蟲;任熙宇等(1990) 報道江蘇省雞球蟲種類有為大多數(shù)學(xué)者所公認(rèn)的9 種。
1989 年史天衛(wèi)等對上海地區(qū)雞球蟲的初步調(diào)查,結(jié)果發(fā)現(xiàn)有以下6 種,即柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、早熟艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲和變位艾美耳球蟲。
王善志(1980) 報道了烏魯本齊地區(qū)雞球蟲種類,作者以飽和食鹽水漂浮法收集雞球蟲卵囊,對未孢子發(fā)育和孢子發(fā)育完成的卵囊進(jìn)行了形態(tài)學(xué)的觀察和量度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)烏魯術(shù)齊地區(qū)雞存在有7 種艾美耳球蟲,即柔嫩艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲、哈氏艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、早熟艾美耳球蟲及堆型艾美耳球蟲。
白啟(1981) 對蘭州地區(qū)雞球蟲蟲種調(diào)查,采用混合卵囊感染法及純種卵囊感染法。用下列5 項指標(biāo)進(jìn)行仔細(xì)觀測: 卵囊特征(包括卵囊形狀、大小及顏色,極體數(shù)目、位置和形狀,孢子囊的形狀及大小,內(nèi)、外殘體的有無);潛隱期(純種確定到小時);卵囊孢子化時間(即卵囊具有感染性的最短時間,純種系在28 ℃±1 ℃溫度下,于2.5% 重鉻酸鉀溶液中培養(yǎng)不同時間,用感染雛雞所測定);寄生部位(刮取死亡和撲殺試驗雞各腸段的粘膜鏡檢);腸管的肉眼病變(把死亡和撲殺試驗雛雞與未感染對照雛雞進(jìn)行剖檢對比)。
通過混合卯囊感染試驗,共鑒定出球蟲2 屬10 個種: 堆型艾美耳球蟲、布氏艾美耳球蟲、哈氏艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、變位艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、早熟艾美耳球蟲、柔嫩艾美耳球蟲和Isospora sp. 。
世界上大多數(shù)學(xué)者新公認(rèn)的艾美耳屬的9 個種,除哈氏及毒害2 個種外,其他7 個種均分離出了單一種,對每一個種都作了反復(fù)感染試驗和上述5 項指標(biāo)的仔細(xì)觀測。等孢屬Isospora 一個種的分離和傳遞試驗尚未成功,僅作了形態(tài)學(xué)方面的觀測。
王世鈞等(1980 )報道了齊齊哈爾市郊區(qū)和富??h城區(qū)雞球蟲種類有早熟艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、柔嫩艾美耳球蟲和等孢屬球蟲未定種(IsospOra sp. )。
左仰賢等(1986) 對云南省不同地理條件的8 個地、州的8 個縣、市的雞進(jìn)行了調(diào)查,結(jié)果發(fā)現(xiàn)有9 種球蟲: 即柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、變位艾美耳球蟲、布氏艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲、早熟艾美耳球蟲和雞等孢球蟲Isospora gallinac )。雞等孢球蟲,調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)有1.6% 的感染率。雖然Levine (1973) ,Pelferdy (1974) 等懷疑此種不是雞的真寄生蟲. 而是麻雀等野鳥的拉氏等孢球蟲,我們經(jīng)過與I.laeazei 卵囊初步測量比較觀察,認(rèn)為兩者卵囊是有差別的。
張寶祥等(1986) 從陜西省8 個縣(市)采集了400 份糞樣,在實驗室對每種均進(jìn)行單卵囊感染分離出純種卵囊,經(jīng)形態(tài)學(xué)、孢子化時間、潛隱期、寄生部位和病理學(xué)觀察等幾項指標(biāo)測定后,認(rèn)定陜西省的家雞共有2 屬8 種球蟲,它們是: 柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、變位艾美耳球蟲、早熟艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲和拉氏等孢子球蟲(Isospora lacazei )。
楊春生(1986) 報道了銀川地區(qū)雞球蟲蟲種有以下7 種: 柔嫩艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲、早熟艾美耳球蟲和等孢屬球蟲(Isospora sp. )。
陳剛等(1990) 報道了于1989 年3 ~5 月,用糞檢法對西寧地區(qū)成年雞進(jìn)行了球蟲種類的調(diào)查,共查到艾美耳屬球蟲6 種,即柔嫩艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲、早熟艾美耳球蟲和布氏艾美耳球蟲,一種艾美耳屬未定種及一個等孢屬卵囊。
根據(jù)現(xiàn)有蟲種調(diào)查資料的初步匯總,9 種雞的艾美耳屬球蟲在我國均存在,其中6 種分布較廣,蟲種和分布情況如下。
1. 堆型艾美耳球蟲分布于北京、烏魯木齊、蘭州、廣州、山東、廣西、昆明、陜西、福州、銀川、上海、云南。
2. 布氏艾美耳球蟲分布于蘭州、廣州、廣西、云南。
3. 哈氏艾美耳球蟲分布于北京、烏魯木齊、蘭州、廣州、山東。
4. 巨型艾黃耳球蟲分布于北京、山西、烏魯木齊、蘭州、廣州、黑龍江、山東、廣西、昆明、陜西、福州、云南、銀川、上海。
5. 和緩艾美耳球蟲分布于山西、北京、烏魯木齊、蘭州、廣州、黑龍江、山東、廣西、昆明、陜西、福州、云南、銀川。
6. 變位艾美耳球蟲分布于蘭州、廣州、廣西、陜西、云南、上海。
7. 毒害艾美耳球蟲分布于北京、烏魯木齊、蘭州、廣州、黑龍江、山東、廣西、昆明、陜西、云南、銀川、上海。
8. 早熟艾美耳球蟲分布于北京、烏魯木齊、蘭州、廣州、黑龍江、廣西、昆明、陜西、云南、銀川、上海。
9. 柔嫩艾美耳球蟲分布于北京、烏魯木齊、蘭州、廣州、江蘇、黑龍江、山東、廣西、昆明、陜西、福州、云南、銀川、上海。
另外,在蘭州、廣州、齊齊哈爾、陜西、云南、銀川等地的雞糞中查出等孢屬球蟲,少數(shù)作者定名為拉氏等孢球蟲(Isospora lacazei ),到目前還沒有可靠證據(jù)能證明其為雞的寄生性球蟲(黃兵,1990 年)。
由于現(xiàn)代交通的發(fā)展和國際間來往的頻繁,尤其是雞及其產(chǎn)品作為重要的家畜品種和貿(mào)易對象,這就會使任何一種雞球蟲都可能成為世界性的。現(xiàn)把我國發(fā)現(xiàn)的9 種球蟲的形態(tài)特點分述如下。
1. 堆型艾美耳球蟲Eimeria acervulina Tyzzer ,1929
寄生部位: 通常寄生于于十二指腸和空腸的上皮細(xì)胞內(nèi),個別情況下可延及小腸后部。
形態(tài): 卵囊中等大小,卵圓形,其量度最大的為22.5um ×16.75um ,最小的為15um ×12.5um ,平均大小為18.8um ×14.5um 。卵囊無色。卵囊壁呈淡綠黃色,厚度為1.0um 。卵囊窄端的內(nèi)膜變薄,比周圍部分稍低陷,與之相應(yīng)的外膜亦下陷,構(gòu)成淺碟狀。初排出的卵囊,原生質(zhì)團為圓形,邊緣平整。卵囊內(nèi)空隙較小。原生質(zhì)團分裂為4 個圓形細(xì)胞的時間,最早和大多數(shù)為15h 左右,最晚為18h 。極體出現(xiàn)在原生質(zhì)團分裂為4 個圓形細(xì)胞時,位于卵囊的窄端,多為圓形,少數(shù)為淺碟狀;多為1 個(占75% 左右),少數(shù)為2 個,并列配置,析光性強。孢子形成最早時間為19.5h. 最晚和大多數(shù)是24h 。孢了囊的大小為7.5 ~10.5um ×4.5 ~5.0um ,平均為9.7um ×5.0um 。無內(nèi)外殘體。潛隱期為4 天。
2. 布氏艾美耳球蟲E.brunetti Levine ,1942
寄生部位: 小腸后段和直腸的上皮細(xì)胞內(nèi)。
形態(tài): 較大型的卵囊,僅次于巨型艾美耳球蟲,卵圓形,量度最大的為28um ×21um ,最小的為17.5um ×15.75um ,平均大小為22.6um ×18.5um 。卵囊壁光滑,無卵膜孔,有一極體。孢子囊呈長卵圓形,有斯氏體,并有內(nèi)殘體,無外殘體(白啟1981 )。完成孢子發(fā)育的最早時間為19h 。
3. 哈氏艾美耳球蟲E.hagani Levine ,1938
寄生部位: 小腸前段上皮細(xì)胞內(nèi)。
形態(tài): 卵囊中等大小,呈寬卵圓形,大小為15.5 ~20um ×14.5 ~18.5um ,平均為17.68um ×15.78um 。無色,卵囊壁呈淡黃綠色,厚l.0um 。原生質(zhì)團呈圓形,邊緣平整。卵囊內(nèi)空隙比堆型艾美耳球蟲的小。但比和緩艾美耳球蟲的大。原生質(zhì)團分裂為4 個細(xì)胞的時間最早為14.5h ,最晚為17.5h 。細(xì)胞初為圓形,邊緣平整。有一個圓形極體,位于孢于囊之間或卵囊側(cè)面,少數(shù)位于卵囊窄端偏下方,其出現(xiàn)時間大多數(shù)卵囊是在其中的圓形細(xì)胞變?yōu)闄E圓形時,少數(shù)出現(xiàn)在原生質(zhì)團分裂為4 個圓形細(xì)胞時。孢子形成的最早時間為23.5h ,最晚和多數(shù)是在27h. ,孢子囊的量度為7.5 ~10.5un ×5urn ,平均為9.1um ×5um 。潛隱期為6 天。
4. 巨型艾美耳球蟲E.maxima Tyzzer ,1929
寄生部位: 小腸中段上皮細(xì)胞內(nèi)。
形態(tài): 大型卵囊,寬卵圓形,一端圓鈍,一端較窄。其量度最大的達(dá)40um ×33um ,最小的為21.75um ×17.5um ,平均為30.76um ×23.9um ,常見的為30um ×22.5um 。卵囊呈黃褐色,卵囊壁淡黃色,厚度為0.75um 。初排出的卵囊,其原生質(zhì)團為圓形,邊緣整齊。卵囊內(nèi)空隙大,卵囊窄端的慮膜變薄,比周圍稍低陷,與之相對應(yīng)的外膜亦稍下陷,呈淺碟狀。原生質(zhì)團分裂為4 個細(xì)胞的時間,最早為23.5h. ,最晚為32.5h ,細(xì)胞初為圓形,周緣平滑,極體出現(xiàn)在原生質(zhì)團分裂為4 個細(xì)胞時,折光性強,呈圓形,位于卵囊窄端,大多數(shù)為1 個(約占50% ),2 個的較少,3 個的最少;出現(xiàn)2 個或3 個極體時,其排列不規(guī)律。孢子發(fā)育完成的時間最早為28.5h ,最晚為48.5h ,多數(shù)在48h 左右。孢子囊的量度最大為17.5um ×7.5um ,最小的11.75um ×5.75um ,平均為15.6um ×7.0urn 。未見有內(nèi)外殘體。卵囊經(jīng)15.5h 培養(yǎng)和原生質(zhì)團分裂為4 個細(xì)胞之前,卵囊內(nèi)外膜呈現(xiàn)波浪狀皺曲,外膜尤明顯;初期在鈍端較明顯,逐漸向窄端發(fā)展。潛隱期為6 天。
5. 變位艾美耳球蟲E.mivati Edgar et Siebold ,1964
寄生部位: 小腸前段和中段的上皮細(xì)胞內(nèi)。
形態(tài): 為小型卵囊,大多呈卵圓形,也有呈橢圓形的。少數(shù)卵囊窄端囊壁變薄,變薄部位的邊緣稍稍隆起,中間凹陷若缺口。量度最大為19.25um ×14.87um ,最小為10.5um ×9.62um ,平均為14.33um ×11.75um 。極體1 ~2 個,偶見有3 個的,排列在卵囊窄端的邊緣。少數(shù)卵囊內(nèi)有1 個不規(guī)則的或呈圓形的外殘體,偶爾也有2 個的。孢子囊為長橢圓形。有斯氏體,并且有1 個不太清晰的內(nèi)殘體。完成孢子發(fā)育的時間最早為11.5h 。潛隱期為93h 。
6. 和緩艾美耳球蟲E.mitis Tyzzer.1929
寄生部位: 小腸前半部上皮細(xì)胞內(nèi)。
形態(tài): 為小型卵囊,近圓形,量度最大的為19.5um ×17.0um ,最小的為12. 75um ×12.5um ,平均大小為15.34um ×14.3um 。卵囊無色,卵囊壁淡綠黃色,厚度為1.0um ,少數(shù)卵囊壁較厚,可達(dá)1.25um 。初排出的卵囊,其原生質(zhì)團成球形,邊緣平滑,充滿卵囊內(nèi),幾乎不留空隙。原生質(zhì)團分裂為4 個細(xì)胞的時間,最早為15h 左右,最晚和大多數(shù)為18.5h 。細(xì)胞初為圓形,周邊平整。極體出現(xiàn)在原生質(zhì)團分裂為4 個圓形細(xì)胞時,由于4 個細(xì)胞幾乎填滿卵囊內(nèi),極體常不易發(fā)現(xiàn)。極體為1 個,折光性強,多為圓形,少數(shù)呈淺碟狀,位于卵囊的一端。孢子發(fā)育完成的最早時間為23.5h ,最晚為26h. 大多數(shù)是在24 ~24.5h 。孢子囊量度最大的為10um ×5um ,最小的為7um ×5um ,平均為8.72urn ×5um 。無內(nèi)外殘體。潛隱期為5 天。
7. 毒害艾美耳珠蟲E.necatrix Johnson ,1930
寄生部位: 裂殖生殖主要在卵黃蒂前后的小腸段上皮細(xì)胞內(nèi),配子生殖則在盲腸上皮細(xì)胞內(nèi)。
形態(tài): 卵囊為中等大小,卵圓形+ 量度最大的為21.0um ×17.5um ,最小的為14.0um ×10.25um ,平均天小為16.59um ×13.5um 。卵囊壁光滑,卵囊內(nèi)空隙小。極體1 個,少數(shù)有2 個的。孢子囊為長卵圓形,有一斯氏體。無內(nèi)外殘體。完成抱子發(fā)育的時間約18h 。潛隱期為6 天。
8. 早熟艾美耳球蟲E.praecox Johnsn ,1930
寄生部位: 小腸前1/3 部分上皮細(xì)胞內(nèi)。
形態(tài): 卵囊較大,大多數(shù)為橢圓形,其次為卵圓形。少數(shù)近圓形,量度最大為25um ×18.25um ,最小為20um ×17. 5um ,平均21.75um ×17.73um 。卵囊無色,卵囊壁淡綠黃色,厚度為1.0um 。厚生質(zhì)團圓形,邊緣平整。卵囊內(nèi)的空隙小,但比E.mitis 如球蟲的稍大。厚生質(zhì)團分裂為4 個細(xì)胞的時間,最早為17.5h ,最晚為23.5h ,多數(shù)在17. 5h 左右。4 個細(xì)胞初為圓形,周緣光滑。極體1 個,圓形,折光性強,出現(xiàn)在厚生質(zhì)團分裂為4 個圓形細(xì)胞時,大多位于孢子囊之間,少數(shù)在卵囊一端偏下方。完成孢子發(fā)育的時間,最早為23.5h ,最晚為38.5h ,大多數(shù)在27h 左右。孢子囊的大小為10 ~15um ×5.25 ~7.5um ,平均為11.8um ×6.4um 。無內(nèi)外殘體。潛隱期為4 天。
9 柔嫩艾美耳球蟲E.tenella (Railliet et Lucet ,1891 )Fantham ,1909
寄生部位: 盲腸及其附近腸道上皮細(xì)胞內(nèi)。
形態(tài): 卵囊較大,多數(shù)為寬卵圓形,一端稍窄,步數(shù)呈橢圓形,其量度最大為25un ×20um ,最小為20um ×15um ,平均大小為22.62um ×18.05um 。卵囊原生質(zhì)團呈淡褐色,卵囊壁為潰黃綠色,厚度為1.0um 。初排出的卵囊,原生質(zhì)團膜邊緣凹凸不平,卵囊內(nèi)空隙較大。原生質(zhì)團分裂為4 個細(xì)胞的昂早時間為15h ,最晚為19.5h ,大多數(shù)為18.5h 。細(xì)胞初為多邊形,邊緣不平整。極體出現(xiàn)在原生質(zhì)團分裂為4 個多邊形細(xì)胞時,位于卵囊的窄端,一般呈圓形,少數(shù)為淺碟狀,多為1 個,少數(shù)為2 個,3 個的最少。出現(xiàn)2 個極體時,其在卵囊內(nèi)呈并列方式排列;3 個時則成三角形排列。極體折光性強。完成孢子發(fā)育的時間,最早為19.5h ,最晚為30.5h ,大多數(shù)在27h 。孢子囊的量度,最大選12.75um ×6.75um ,最小的為7.5um ×upm ,平均為11.47urn ×6.23um 。無內(nèi)外殘體。潛隱期為7 天。
國外有些學(xué)者對哈氏艾美耳球蟲和變位艾美耳球蟲的獨立性有懷疑。我國未見有對該兩種球蟲作深入研究的報道。
(二)、病原生物學(xué)特性
我國對致病力強的幾種雞球蟲(如柔嫩艾美耳球空、毒害艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲和巨型艾美耳球蟲)的生物學(xué)特性做了一些較深入的研究工作,如在雞胚培養(yǎng),細(xì)胞培養(yǎng),早熟蟲株的選育,超徽結(jié)構(gòu)等;同時,在雞球蟲病防治方面進(jìn)行了不少的工作;在雞球蟲病免疫和蟲苗的研制和應(yīng)用方面,近幾年來也取得一些成績。
柔嫩艾美耳球蟲
韓志華等進(jìn)行了柔嫩艾美耳球蟲(Eimeria tenella )細(xì)胞培養(yǎng)的觀察。作者在雞腎細(xì)胞內(nèi)培養(yǎng)結(jié)果發(fā)現(xiàn): 子孢了接種后第2 天已全部鉆進(jìn)細(xì)胞呈現(xiàn)出輕微收縮運動,表面折光透明。第3 ~4 天,被侵害的細(xì)胞部分明顯膨脹。第5 天觀察到第1 代裂殖體,排列成菜花狀,并釋放大量裂殖子,裂殖子呈放射狀排列。第6 天出現(xiàn)第2 代裂殖體。第7 天已形成大小配子體。第9 天見到卵圓形的卵囊。3 次試驗結(jié)果相同。子孢子發(fā)育成卵囊后,腎細(xì)胞開始衰老變形,部分細(xì)胞脫落,有些形成空泡。
細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)育成的卵囊,孢子化后接種1 日齡來航雞。接種后第6 天,雛雞排血便。第7 天進(jìn)行糞檢,發(fā)現(xiàn)柔嫩艾羹耳球蟲卵囊。
另外作者還指出,經(jīng)41 ℃培養(yǎng)9 天的孢子化卵囊不能感染雛雞。
呂文順等(1984) ,用體外脫囊的球蟲子孢子5 ×l04 ~10 ×l04 個接種9 ~11 日齡雞胚的尿囊腔中,進(jìn)行柔嫩艾美耳球蟲在雞胚培養(yǎng)中內(nèi)生性發(fā)育史的研究。觀察結(jié)果表明,球蟲在絨毛尿囊膜(CAM) 細(xì)胞內(nèi)完成了無性世代和有性世代兩個發(fā)育階段,出現(xiàn)第1 、2 、3 代裂殖體和大配子體和小配子體以及卵囊,像在雞腸黏膜上皮細(xì)胞內(nèi)一樣完成全部內(nèi)生發(fā)育史。成熟的卵囊最早出現(xiàn)于144h ,然后逐漸增多,到192h 不僅在CAM 上可見到密集的大量卵囊,在尿囊液和尿酸鹽沉淀物中也可以獲得集聚成堆的卵囊。培養(yǎng)獲得的卵囊在形態(tài)學(xué)上完全符合柔嫩艾美耳球蟲的特征。卵囊經(jīng)孢子發(fā)育完成后仍具有感染雛雞的能力,并可經(jīng)雞胚連續(xù)傳代。
李泳等(1985) 用電子顯微鏡觀察了柔嫩艾美耳球蟲配子生殖的全過程,描述了雄配予體和雌配子體生殖過程超微結(jié)構(gòu)的變化。雄配子體經(jīng)過核分裂,細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)陷切割細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞核遷移,支鏈淀粉粒形成,鞭毛體突起,配子軀干和鞭毛形成,最后雄配子成熟,離開雄配子體殘余。雌配子體經(jīng)過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)折疊,形成大量的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)池,產(chǎn)生壁形成體Ⅰ和Ⅱ,雌配子從不規(guī)則的橢圓形發(fā)展到卵圓形,受精后,卵囊壁形成,壁形成體消失。
張振嵐等(1990) 對柔嫩艾美耳球蟲內(nèi)生階段超微結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行了研究。觀察結(jié)果,發(fā)現(xiàn)裂殖生殖過程是裂殖子或滋養(yǎng)體的核經(jīng)多次分裂后彤戚多核體或稱新生裂殖體。新形成的核被有雙層膜,每個核具有一個明顯的核仁。初生裂殖體從切面上看,有許多由單個限制膜構(gòu)成的裂縫或裂隙,似乎把多核體分成許多塊;有些裂隙或裂縫與裂殖體表面的限制膜相連,似乎由表面的限制膜內(nèi)陷而形成。在這些裂隙處和在多核體的表面一樣也可形成囊狀突起,并逐漸延長而形成裂殖子。新生裂殖子脫離母體時,其后端形成一電子密度增強的環(huán),謂之后極環(huán)。成熟的裂殖子的形態(tài)有細(xì)條形到矮胖形,日不同代之間無明顯差異。它們均被有一層由外膜和內(nèi)膜復(fù)合體構(gòu)成的表皮,以及類錐體、極環(huán)、微線粒、棒狀體和膜下微管構(gòu)成的頂端復(fù)合體。配子生殖過程是小配子細(xì)胞較大配子細(xì)胞小,被一層限制性單位膜,細(xì)胞核經(jīng)多次分裂后形成多核體與裂殖生殖過程中形成的多核體的區(qū)別在于這些新形成的核均定位于配予細(xì)胞的周邊,無核仁,有多個染色質(zhì)團塊,核質(zhì)在邊緣區(qū)域較濃,隨后染色質(zhì)向外側(cè)集結(jié),周邊核延長并向表面隆起而形成小配子的“芽體”。在核不斷向外延伸過程中,可能有一線粒體也伴隨外移,因在成熟的小配子前部有一個長橢圓形而內(nèi)多嵴的線粒體緊靠著核。一個成熟的小配子主要由一個長條形而電子致密的核和一個長橢圓形的線粒體構(gòu)成。在其前端或頂器附著有3 根鞭毛,而胞質(zhì)含量很少。初生大配子細(xì)胞有一個大的核和一個呈顆粒狀的濃染的核仁,被有一層限制性單位膜,胞漿內(nèi)有大量內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體,但很少或幾乎沒有脂肪顆粒和多糖顆粒,這兩種成分在隨后的發(fā)育中逐漸增多起來。大配子細(xì)胞進(jìn)一步發(fā)育,胞漿中出現(xiàn)許多成囊顆粒Ⅱ(WFB Ⅱ) ,高倍鏡下,這些顆粒呈明暗交替的條帶狀結(jié)構(gòu)。每個WFB Ⅱ顆粒均位于一圍膜泡內(nèi),散布在胞漿基質(zhì)中,據(jù)此很容易與新生裂殖體及小配子細(xì)胞相區(qū)別。隨著大配子細(xì)胞進(jìn)一步發(fā)育,除大量卵圓形的多糖顆粒增加外,另一特征就是在胞漿的邊緣區(qū)域出現(xiàn)多個圓形致密而均勻的,但大小不等的成囊顆粒I (WFBI) ,它的出現(xiàn)標(biāo)志大配子的成熟。當(dāng)合子的外層限制膜分離開來,形成一環(huán)繞的胚膜,其本身又被覆一層新的限制膜時,標(biāo)志卵囊形成的開始。WFB Ⅰ顆粒物質(zhì)可能被輸送到膜I 和胰Ⅱ之間的區(qū)域內(nèi),隨著此外層的逐漸形成胞漿內(nèi)WFB Ⅰ逐漸減少或消失,原先所在的部位有時留下空泡。在外層形成的同時,可觀察到合子的限制膜又經(jīng)多次復(fù)制而形成膜Ⅲ、膜Ⅳ和本身的限制膜Ⅴ。WFB Ⅱ顆粒物質(zhì)就可能被輸送到膜Ⅲ和膜Ⅳ之間的區(qū)域內(nèi)。WFB Ⅰ和WFB Ⅱ分別構(gòu)成卵囊壁的內(nèi)外層最初在形態(tài)上呈現(xiàn)不均勻狀態(tài),且厚度上也不一致,后經(jīng)進(jìn)一步融合、濃縮而構(gòu)成電子致密度高的外層和電子致密度稍低的內(nèi)層。
翁亞彪等(1992) 進(jìn)行了柔嫩艾美耳球蟲配子形成階段的超微結(jié)構(gòu)的觀察,結(jié)果發(fā)現(xiàn),小配子體的發(fā)育是在盲腸上皮細(xì)胞核上方進(jìn)行。發(fā)育早期,核經(jīng)多次分裂成數(shù)個小核,小核無核仁,染色質(zhì)邊聚,并移至小配子體邊緣,延長并向帶蟲空泡突起,成為小配子的核。同時,中心粒變?yōu)榛w,鞭毛從基體發(fā)出。小配子具有3 根鞭毛。大配子體的發(fā)育則是在盲腸上皮細(xì)胞核的下方進(jìn)行。早期大配子呈圓形或橢圓形,外被限制膜,膜周圍有許多細(xì)絲狀的微絨毛物。這些微絨毛狀物橫切面呈小點狀,縱切面呈絲狀,并與大配子相連。大配子內(nèi)有兩種成囊顆粒,成囊顆粒Ⅰ質(zhì)地均勻致密,強嗜餓酸性;成囊顆粒Ⅱ由細(xì)絲狀物盤曲、折疊而成。成熟的大配子內(nèi)含多量的多糖顆粒、一些小管、酯類包含體和半透明空泡,核位于中央。
朱彥鵬、華蘭英(1991) 報道了柔嫩艾美耳球蟲的早熟培育及其免疫原性試驗。作者從我國河北省的柔嫩艾美耳球蟲蟲株中發(fā)現(xiàn)了132 ~144h 成熟的早熟蟲株,隨后進(jìn)行了早熟蟲株的培養(yǎng),并對其致病力和免疫原性作了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn): (1 )在整個早熟培育過程中,感染2500 ~30000 個卵囊的雞均來呈現(xiàn)柔嫩艾美耳球蟲病的任何臨診癥狀,剖檢時除個別雞的盲腸特膜上出現(xiàn)極輕微的粘膜肥厚和偶見小點出血外,未發(fā)現(xiàn)其他病理變化。(2) 分別接種第22 代和第23 代早熟培育蟲株卵囊2 ×104 個的試驗雞,接種后既未出現(xiàn)任何臨診癥狀,亦未發(fā)生死亡。而分別接種原始蟲株卵囊5 ×103 和l ×l04 個的試驗雞,在接種后第5 和第6 天分別死亡2 只和4 只。剖檢見盲腸病變記分均達(dá)到4 分。說明早熟培育的蟲株的致病力遠(yuǎn)比原始蟲株低。(3) 早熟培育的蟲株免疫接種的雞,于接種后的第17 天,口服攻擊感染原始蟲株的孢子化卵囊5 ×104 個,根據(jù)免疫接種后和攻擊感染后試驗雞的死亡和盲腸病變記分來評價,證明早熟培育蟲株已完全喪失了免疫原性。作者認(rèn)為采用旱熟培育達(dá)到使球蟲株的潛隱期逐漸縮短或使其致病力減弱的目的并非十分困難,但為保持早熟蟲株原來的免疫原性卻不是很容易的,尚需進(jìn)行更深入的研究。
翁亞彪等(1992) 應(yīng)用單卵囊分離技術(shù)獲得純種柔嫩艾美耳球蟲純種(廣州株)卵囊,進(jìn)行柔嫩艾美耳球蟲早熟蟲株的選育。試驗結(jié)果表明,對該蟲株進(jìn)行8 代的早熟選育,獲得了一個潛隱期為120h 的早熟蟲株。以此早熟蟲株感染雛雞,感染量為每只10 萬個孢子化卵囊,臨診上不出現(xiàn)癥狀和病變;感染量提高到20 萬個時,也僅見盲腸粘膜有少量出血點。這表明該早熟蟲株的致病力已明顯降低。每只雛雞經(jīng)口免疫接種該蟲株5000 個孢子化卵囊,7 天后用8 萬個原代孢子化卵囊攻擊,免疫雞不發(fā)病,剖檢見盲腸不呈現(xiàn)病變。說明該早熟蟲株具有良好的免疫原性。
謝明權(quán)等(1992) 用12 種脫囊液進(jìn)行廠柔嫩艾美耳球蟲子孢子脫囊比較試驗,脫囊溫度均為40 ℃。結(jié)果說明:0.25% 胰酶加0.75% ,膽鹽脫囊45 ~60min ,子孢子脫囊率達(dá)85% ~97% ;0.25% 胰酶加5% 雞膽汁脫囊75 ~90rnin ,脫囊率達(dá)65% ~95% ;0.25% 胰酶加5% 豬膽汁,脫囊75 ~90rmn ,脫囊率為91% ~96% ;0.25% 胰酶加5% 豬膽汁,脫囊90min 至105min ,脫囊率達(dá)51% ~75% ,0.25% 胰酶加10% 豬肝汁,脫囊90min ,脫囊率達(dá)89% ~97% 。其余的脫囊液如0.25% 胰酶加5% OP-10 ;0.25% 胰酶加5% 十二烷基苯磺酸鈉;0.25% 胰酶加10% 十二烷基苯磺酸鈉;0.25% 胰酶加10% 土耳其紅油等7 種均無脫囊效果。經(jīng)上述5 種脫囊液脫囊的子孢子接種,雞腎原代單層上皮細(xì)胞,接種后24h 用甲醇固定,子孢子染色法快速染色,再在高倍鏡下(400 倍)計算各組子孢子穿入細(xì)胞的數(shù)量,結(jié)果平均每個視野數(shù)分別為34.65 、33.62 、32.65 、33.32 和34.1 條,無顯著差異。證明上述5 種脫囊液脫囊的子飽子具有很好的活性。上述結(jié)果還說明,在子孢子脫囊液中,胰酶是不可缺少的成分。胰酶加膽鹽,脫囊力量強。豬膽汁和雞膽汁與胰酶合用也有很好的脫囊效果,但消化時間需延長,而且高濃度的豬、雞膽汁(10%) 優(yōu)于低濃度的豬、雞膽汁(5% )。pH 低(6.7) 的脫囊液優(yōu)于pH 高的脫囊液。
陳淑玉等(1980) 報道了一個簡便易行的雞球蟲的單卵囊分離和感染法及其在種的鑒定上的應(yīng)用。文章詳細(xì)介紹了球蟲單卵囊的分離方法,即用干凈的滴管,吸取在2% 重鉻酸鉀溶液中已培養(yǎng)4 ~7 天的孢子化卵囊1 小滴于載玻片上,并加l 滴生理鹽水稀釋,使在低倍鏡下觀察時,一個視野中只有1 ~2 個卵囊,以便于分離。然后在顯微鏡下,右手持玻璃毛細(xì)吸管,當(dāng)毛細(xì)噴管的尖端正對視野中一個卵囊時,將吸管向卵囊伸過去。由于毛細(xì)管現(xiàn)象,卵囊隨水分上升到毛細(xì)管內(nèi)。隨后把毛細(xì)吸管中的液體,吹落到鋪有瓊脂薄膜的載玻片上,置顯微鏡下觀察,確認(rèn)是1 個卵囊時,單卵囊分離即告完畢。用細(xì)的解剖針在含有單卵囊的小液滴玻片上的瓊脂薄膜周圍劃出,以小液滴為中心,將前后左右的瓊脂薄膜折疊覆蓋起來,喂給1 日齡雞。感染后的雛雞隔離飼養(yǎng),并于感染后第3 天開始每天檢查糞便,觀察結(jié)果。試驗感染14 只雛雞,結(jié)果有9 只雛雞于感染后5 ~8 天,在糞檢中找到卵囊,成功率為64.3% 。
對所分離出的單一種,進(jìn)行了重復(fù)感染試驗,觀測了卵囊特征、潛隱期、孢子化時間、臨診癥狀和病理變化,就可用于球蟲種類的鑒定。
殷佩云等(1980) 也報道了球蟲單卵囊分離技術(shù)。其操作方法與陳淑玉等(1980) 基本相似,也取得好的結(jié)果。
白啟(1980) 報道雞艾美耳球蟲單一種分離方法的探討。文中提出雞球蟲種的鑒定需分離感單一種,再結(jié)合其他的幾項生物學(xué)特性方能準(zhǔn)確可靠。這幾項生物學(xué)特性包括(l) 潛隱期(preparent perid);(2) 孢子化時間;(3) 寄生部位、特殊病變及其形態(tài)特征。
近年來,有許多試驗證明艾美耳屬的幾種雞球蟲可以體外培養(yǎng),把人工脫囊的球蟲子孢子接種于雞胚尿囊腔中或雞腎細(xì)胞培養(yǎng)物上,能夠完成整個內(nèi)生性發(fā)育。這種方法已廣泛應(yīng)用于抗球蟲藥物的評價、免疫學(xué)和球蟲發(fā)育形態(tài)的研究等方面。
趙開元等(1985) 報道了柔嫩艾美耳球蟲子孢子體外脫囊試驗及其對雞胚感染力的觀察。作者用離心洗凈的柔嫩艾美耳球蟲卵囊用4% 的次氯酸鈉液殺菌30min ,然后,加少許PBS 液,倒入玻璃乳缽中輕輕研磨。經(jīng)研磨20min ,卵囊破碎率可達(dá)88.8% ~90% ,30min 可達(dá)90% ~96% 以上。
游離出來的孢子囊用1% 胰酶加5% 雞膽汁溶液,在40 ℃水溶中孵育2h ,子孢予脫囊率可達(dá)92.6% 。鑒于雞膽汁產(chǎn)量小,曾用牛、羊膽汁進(jìn)行試驗,結(jié)果證明,子孢子脫囊率分別達(dá)70.6% 和65.4% ,還不如雞膽汁效果。
用1% 胰酶加5% 雞膽汁脫囊的子孢子對雞有感染力。將子孢子接種于雞胚尿囊腔中,在40 ℃下孵化7 天,子孢子在絨毛尿囊膜細(xì)胞中完成了全部內(nèi)生性發(fā)育,最后形成第2 代卵囊。經(jīng)檢查,卵囊形成后不僅局限在絨毛尿囊膜細(xì)胞內(nèi),也可游離到尿囊液中。
張勤等(1980) 應(yīng)用柔嫩艾美耳球蟲(保定株)進(jìn)行了雞胚傳代致弱培育的研究。其研究內(nèi)容包括(1) 雞胚內(nèi)的發(fā)育;(2) 雞胚傳代株的建立和第35 代雞胚傳代株的致病力;(3) 免疫原性的測定。結(jié)果表明柔嫩艾美耳球蟲(保定株)經(jīng)雞胚傳38 代后,又通過小雞繁殖了一次,接著連續(xù)通過雞胚傳到47 代。在傳代過程中觀察了柔嫩艾美耳球蟲在雞胚內(nèi)發(fā)育的各階段,隨著傳代次數(shù)的增加,柔嫩艾美耳球蟲在雞胚內(nèi)的卵囊產(chǎn)量和回收卵囊的孢子形成率隨傳代經(jīng)過逐漸增高,終于顯示出對雞胚的良好“適應(yīng)”。
在雞胚內(nèi)傳了35 代的柔嫩艾美耳球蟲雞胚傳代株跟未經(jīng)傳代的原始蟲株比較,傳代株對雞胚和小雞的致病力,尤其是對小雞的致病力顯著地降低了。投給104 個雞胚傳代株卵囊的小雞經(jīng)3 周后以6 ×104 個未經(jīng)傳代的原始蟲株攻擊,顯示出有高度的保護(hù)作用。
自Long (1965) 首次完成用脫囊的柔嫩艾羹耳球蟲子孢子,感染雞胚成功之后,國內(nèi)外的學(xué)者相繼用他的方法或略加改進(jìn),成功地進(jìn)行了多種雞艾美耳球蟲的雞胚培養(yǎng)。但Long 的方法獲得的子孢子懸浮液中,糞渣等雜質(zhì)較多,雖然對雞胚的感染影響不大,但不適于進(jìn)行球蟲免疫學(xué)、組織培養(yǎng)和生化分析。因此提純有活力的球蟲子孢子,是進(jìn)行上述試驗研究的基礎(chǔ)。
田廣孚、田增義(1989) 進(jìn)行了柔嫩艾美耳球蟲子孢子的提純試驗。作者崩DEAE 纖維素(DF52) 柱層析柔嫩艾美耳球蟲子孢子的粗提懸浮液,纖維素柱高5cm ,直徑2cm ,pH8.0 甘氨酸緩沖液作為洗脫液。流速為4ml/min ,每個集份10ml ,16 集份以后再未觀察到子抱子。子孢子回收率為62.94% 。純化后的子孢子懸浮液雜質(zhì)極少,達(dá)到了純化的目的。顯微鏡下可看到純化后的子孢子蠕動。
蔣建林等(1994) 用改進(jìn)的DEAE-Cellulose 52 柱層法純化柔嫩艾美耳球蟲子孢子。纖維素柱高5cm ,管的直徑1.6cm ,洗脫液為pH8.0 Tris-Hel 等滲緩沖液,流速為1ml/min ,得到了極純的子孢子,且子孢子運動性好,回收率在63% 以上。作者認(rèn)為子孢子之所以能用DEAE-Cellulose 52 來純化,是因為子孢子的運動和電荷差異擺脫了DE-52 的離子交換吸附,并且體積小,能通過纖維素形成的篩網(wǎng),而卵囊、卵囊壁、孢子囊、孢子囊壁及其他一些有機物卻被纖維素網(wǎng)擋住和離子交換吸附上去了,于是只有子孢子被洗脫下來。
翁亞彪等(1992) 通過經(jīng)口感染的方法,使每只雞感染10 萬個柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊,然后觀察感染雞的血細(xì)胞的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)感染雞的紅細(xì)胞數(shù)于感染后第4 天開始降低,第5 天降到147.35 萬/mm3 (感染前為296.09 萬/mm3 ),笫6 天后逐漸回升,第10 天時恢復(fù)到感染前的水平。凝血細(xì)胞數(shù)在感染前為2.60 萬/mm3 ,感染后第5 、6 天有所減少,分別為2.06 萬/mm3 和2.19 萬/mm3 。白細(xì)胞總數(shù)感染前為3.38 萬/mm3 ,感染后第4 天開始升高,第8 天高達(dá)4.05 萬/mm3 ,第10 天后逐日回降。在白細(xì)胞分類中,異嗜性白細(xì)胞的比例感染前為24.6% ,感染后第5 天增至31.7% ;而淋巴細(xì)胞感染前為64.4%. 感染后第5 天則下降到54.5% ;嗜酸性白細(xì)胞感染前為0.2% ,感染后第4 天開始增加,第10 天時增至7.7% ;嗜堿性白細(xì)胞為l.5% ,單核細(xì)胞為5.9% ,感染前后沒有明顯的變化。
瀕死雞的紅細(xì)胞數(shù)為82 萬/mm3 ,與感染前相比,降低了72.3% ,表明柔嫩艾美耳球蟲病雞的致死原因主要是失血過多。瀕死期白細(xì)胞總數(shù)為3.85 萬/mm3 ,顯著高于存活雞的2.75 萬/mm3 ,這與在許多疾病中,動物在瀨死時白細(xì)胞數(shù)通常下降的現(xiàn)象有所不同。
謝明權(quán)等(1993) 用純化的孢子化的柔嫩艾美耳球蟲卵囊(威斯康星株)和裂殖子,經(jīng)用C-50 超聲波粉碎機處理后,進(jìn)行了水解氨基酸和游離氨基酸的測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)柔嫩艾美耳球蟲卵囊有6 種游離氨基酸(天門冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、賴氨酸和異亮氨酸),其中以異亮氨酸含量較高,為0.072 ;檢出l5 種水解氨基酸,其中異亮氨酸含量較高,為0.688 。柔嫩艾美耳球蟲第2 代裂殖子檢出11 種游離氨基酸,其中精氨酸含量最高,為0.13 ;檢出17 種水解氨基酸,其中以谷氨酸含量較高為1.397 。
謝明權(quán)等(1992) 在“不同血清在細(xì)胞培養(yǎng)中對球蟲子孢子的活力及發(fā)育相關(guān)試驗”一文中指出: 采用雞血清、小牛血清、兔血清及豬血清作球蟲細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基成分,然后比較這4 種血清(各有2 種濃度:5% 和10% )對柔嫩艾美耳球蟲的子孢子活力及其在細(xì)胞中發(fā)育的作用。檢測指標(biāo)為(a) 接種后l 、4 、8 、12 、24h ,細(xì)胞內(nèi)子孢子數(shù)量差異。(b) 第Ⅰ代成熟裂殖子數(shù)量變化。(c) 第Ⅱ代成熟裂殖體數(shù)量變化。結(jié)果表明:(1) 雞血清培養(yǎng)蒸在113 種指標(biāo)上均高于另外3 種血清,而豬血清培養(yǎng)基均低于別的血清;(2) 含5% 血清與10% 血清培養(yǎng)基在這3 個指標(biāo)上無顯著差異;(3) 予孢子在接種后4h ,穿透細(xì)胞的數(shù)目達(dá)到高峰,此后有所下降。作者認(rèn)為采用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)作抗球蟲藥篩選,可首先選用雞血清作培養(yǎng)基成分。
段嘉樹、張秀云(1992) 報道了次氯酸鈉處理對柔搬艾美耳球蟲卵囊活力的影響,用10% 和20% 的次氯酸鈉溶液對收集的新鮮柔嫩艾美耳球蟲卵囊液,分別處理10min 和20min. 然后用常規(guī)方法徹底清洗后放在2.5% 重鉻酸鉀溶液中,置29 ℃溫度下培養(yǎng)48h ,觀察卵囊孢子發(fā)育率。以生物統(tǒng)計結(jié)果表明各處理組間無顯著差異。
有人對柔嫩艾美耳球蟲的致病力進(jìn)行過研究,如黃兵等(1994) 從現(xiàn)場采集分離獲得的純種柔嫩艾美耳球蟲,孢子化后,分別以每只雞感染1 萬、5 萬、10 萬和20 萬個的不同劑量,人工感染10 ~13 日齡的伊莎公雞,感染后7 天結(jié)束試驗,最后以平均增重、死亡率和病變記分作致病力的判定指標(biāo)。試驗結(jié)果顯示柔嫩艾美耳球蟲致病力很強,感染10 萬個孢子化卵囊的死亡率為50% ;感染20 萬個的死亡率達(dá)75% ;感染5 萬個孢子化卵囊的平均增重極顯著低于不感染對照組(P <0.01) 。4 個不同感染劑量的腸道病變記分為2.75 ~3.92 。
汪明等(1994) 也報道了柔嫩艾美耳球蟲致病力的試驗。作者采用單卵囊分離技術(shù)從雞場的混合卵囊中提純出柔嫩艾美耳球蟲。卵囊孢子化后,按每只5 萬、7.5 萬、10.5 萬和20 萬個的不同感染量人工感染14 日齡的AA 肉雞。結(jié)果致死率分別為10% 、20% 、40% 和50% 。試驗說明柔嫩艾美耳球蟲是致病力很強的一種球蟲。
有人研究抗球蟲藥對柔嫩艾美耳球蟲的影響,如張振嵐等(1991) 報道了尾卡巴嗪l.25 ×10-4 能引起柔嫩艾美耳球蟲裂殖生殖階段的滋養(yǎng)體或初生裂殖體及裂殖子的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等膜結(jié)構(gòu)系統(tǒng)和核異常變化。1.68 ×10-4 磺胺喹 惡啉對裂殖生殖階段的影響主要表現(xiàn)為核膜的增生復(fù)制等一系列核的異常變化;對配子生殖階段的影響表現(xiàn)為Ⅰ型和Ⅱ型卵囊壁形成顆粒 (WFB Ⅰ,WFB Ⅱ) 的異常變化。8 ×10-5 鹽霉素對上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(IEL) 中的子孢子及黏膜中成熟裂殖子的影響表現(xiàn)為表皮的分離或破裂及胞漿內(nèi)微線粒和多糖顆粒等的輪廓模糊。
謝明權(quán)等(1994) 應(yīng)用3 種聚醚類抗生素和7 種化學(xué)合成的抗球蟲劑作用于柔嫩艾美耳球蟲的裂殖子30min ,然后用Hank's 平衡鹽溶液洗去藥物再接種10 ~11 日齡的雞胚。2.5 天后收集雞胚中的卵囊,以卵囊生成數(shù)判斷藥物的效果。結(jié)果證明,除氨丙啉外,其余的抗球蟲劑對裂殖子是有效的。各種藥物的最低濃度,拉沙菌素、鹽霉素、莫能霉素、殺球靈 (Diclazuril) 、常山酮為10ug/ml ;氯苯胍、乙羥喹酯(Decoquinate )為l00ug/ml ;氯吡醇(Clopidol) 為500ug/ml 和尼卡巴嗪為1000ug/ml 可以降低裂殖子的活力,但不明顯。當(dāng)拉沙菌素、鹽霉素、莫能霉素、殺球靈、常山酮、氯苯胍的劑量分別提高到350 、150 、120 、200 、500 和700ug/ml 時,可以殺死裂殖子。作者還進(jìn)行了藥物作用方式的比較,一種是如前述的藥物直接作用于裂殖子,然后接種于雞胚;另一種是先將子孢子接種于雞胚后3 天,當(dāng)柔嫩艾美耳球蟲第2 代裂殖體發(fā)育時,從尿囊腔注入藥物。結(jié)果發(fā)現(xiàn)10ug/ml 的常山酮對上述兩種方法均有很好的抗球蟲效果。10ug/ml 的殺球靈或100ug/ml 的氯苯胍直接作用于裂殖子時,顯示出很好的效果,但在第二種方法中則未顯示抗球蟲效力。尼卡巴嗪在以上兩種投藥方法均無效。作者提出雞胚是球蟲進(jìn)行體外培養(yǎng)的模型,然而有些藥物需在雞體內(nèi)轉(zhuǎn)化后方能發(fā)揮作用,故雞胚模型作為篩選抗球蟲藥是有一定價值的,但真正確定藥物劑量和最終確定棄留,最好在雞體中作鑒別。
球蟲的抗藥性是生產(chǎn)中的課題,國內(nèi)外不少的寄生蟲學(xué)者都很注意。我國對這問題近年來也有些研究資料。
秦澤云等(1992) 應(yīng)用國內(nèi)不同地區(qū)分離到的柔嫩艾美耳球蟲進(jìn)行了對氯苯胍和克球粉的抗藥性檢測。每只2 周齡雛雞感染6 ×104 個孢子化卵囊,以美國默克公司的抗球蟲指數(shù)(ACI) 作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。ACI 大干160 ,判為無抗藥性;介于160 和120 之間的,判為有部分抗藥性;小于120 的則判為具有抗藥性。結(jié)果表明,克球粉1.25 ×10-4 對3 株柔嫩艾美耳球史的抗球蟲指數(shù)分別為182 、141 和l83 ,說明克球多對其中一株柔嫩艾美耳球蟲已具有部分抗藥性。氯苯胍6.6 ×l0-5 對3 株柔嫩艾美耳球蟲的抗球蟲指數(shù)分別為120 、68 和193 ,這表明其中2 株已對氯苯胍產(chǎn)生抗藥性,比推薦用量3.3 ×l0-5 高出一倍已無抗球蟲作用。試驗結(jié)果說明國內(nèi)存在球蟲抗藥性問題,有必要作進(jìn)一步調(diào)查。
孔繁瑤等(1994) 對我國12 個省、區(qū)的15 株柔嫩艾美耳球蟲對5 種抗球蟲藥的抗藥性進(jìn)行了調(diào)查研究. ,文中提出“最適抗球蟲活性百分率( POAA) 、病變記分減少率(RLS) 和相對盲腸卵囊產(chǎn)量(ROP)3 項參數(shù)指標(biāo)為綜合判定球蟲對藥物的抗藥性(或敏感性),具體判定標(biāo)準(zhǔn)為,+: 輕度抗藥;++: 中度抗藥;+++: 嚴(yán)重抗藥;-: 敏感。(1) POAA= (感染用藥組GSR- 感染不用藥對照組CSR )/ (不感染不用藥對照組GSR- 感染不用藥對照組CSR )×100% 。GSR= 籠末重/ 籠初重。POAA ≤50%: 有抗藥性;>50%: 無抗藥性。(2) RLS= (感染不用藥對照組平均病變記分- 感染用藥組平均病變記分)/ (感染不用藥對照組平均病變記分)×100% 。RLS ≥50%: 無抗藥性;<50%: 有抗藥性。(3)ROP= 感染用藥組平均卵囊百萬數(shù)/ 感染不用藥組平均卵囊百萬數(shù)×100% 。ROP ≥15%: 有抗藥性;<15%: 無抗藥性。
作者通過15 株柔嫩艾美耳球蟲對5 種抗球蟲藥的敏感性檢測,首次實驗證實柔嫩艾美耳球蟲的抗藥性在我國12 個省、區(qū)普遍存在。試驗提出的結(jié)論是:(1) 實驗證實柔嫩艾美耳球蟲對莫能霉素、氨丙啉、克球粉和氯苯胍(均用推薦劑量)的抗藥性在我國l2 個省、區(qū)普遍存在。(2) 不用地區(qū)蟲株的抗藥譜不同,抗性程度亦不同。多數(shù)蟲株對2 種或2 種以上的抗球蟲藥有復(fù)合抗藥性。(3)8 株柔嫩艾美耳球蟲對殺球靈(Diclazuril )均無抗藥性。(4) 研究制訂了比較適用的檢測球蟲抗藥性的判定方法和標(biāo)準(zhǔn),即以POAA 、RLS 和ROP 3 項參數(shù)指標(biāo)綜合判定球蟲對藥物的抗藥性(或敏感性)。
作者在討論中提到,對于現(xiàn)場雞球蟲的抗藥性,幣同研究者所采用的抗藥性劃定指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)不盡相同。國外采用的判定標(biāo)準(zhǔn)包括(1) 卵囊產(chǎn)量: 用藥組的每克糞便的卵囊數(shù)≥50000 ,判為有抗藥性;或用藥組的卵囊總數(shù)大于或等于感染不用藥對照組的5% ,判為有抗藥性;或當(dāng)使用2 倍推薦量藥物時仍有卵囊產(chǎn)生者判為有抗藥性。(2) 病變評分: 用藥組的病變計分比感染不用藥對照組減少不足50% 者為有抗藥性。(3) 增重: 用藥組增重低于不感染不用藥對照組增重的75% ,劃為有抗藥性;或用藥組增重不顯著高于感染不用藥對照組為有抗藥性,高于感染不用藥對照組但低于不感染不用藥對照組為有部分抗藥性。(4) 最適抗球蟲活性百分率小于或等于50% ,判為有抗藥性。(5) 糞便評分: 用藥組平均糞便計分大于或等于感染不用藥對照組50% ,判為有抗藥性。(6) 抗球蟲指數(shù): 如果抗球蟲指數(shù)小于120 ,判為有抗藥性;介于121 ~159 之間,判為有部分抗藥性。
由于藥物在實用條件下不可能完全排除卵囊產(chǎn)生,且目前還沒有一種藥物(除殺球靈外)在養(yǎng)禽場按規(guī)定濃度使用時能完全阻止卵囊產(chǎn)生,所以,若以卵囊產(chǎn)量為標(biāo)準(zhǔn)判定球蟲的抗藥性,很可能產(chǎn)生抗藥性蟲株比率增高的后果。試驗觀察,某些蟲株在用藥情況下雖仍有一定量的卵囊產(chǎn)生,但不影響增重,且有少量蟲體的存在還會有益于雞免疫力的產(chǎn)生,所以,如固有卵囊排放而判為有抗藥性并否定藥物效用似亦欠妥;但另一方面,如用藥后雖增重正常,但有大量卵囊產(chǎn)生,則存在著病原散播、污染環(huán)境的潛在威脅,故增重與卵囊產(chǎn)量二者應(yīng)作為兩個藥效指標(biāo)綜合評定。有鑒于此,作者建議以最適抗球蟲活性百分率、相對卵囊產(chǎn)量和病變記分減少率3 項指標(biāo)綜合判定球蟲的抗藥性,并擬制了判定標(biāo)準(zhǔn)。
李淥等(1986) 報道了蒽環(huán)類抗生素80334 對柔嫩艾美耳球蟲作用后裂殖體階段超微結(jié)構(gòu)的觀察。作者觀察到用藥后,藥物對球蟲裂殖體起作用,導(dǎo)致裂殖體的自身裂解。同時,在后期大量的白細(xì)胞位于盲腸的固有膜層,寄生有蟲體的宿主細(xì)胞破裂死亡,巨噬細(xì)胞向蟲體逼近并吞噬。證明80334 對球蟲有很好的防治效果。對照組,觀察到的是密集的,正在發(fā)育過程中的裂殖體,大而清晰,巨噬細(xì)胞沒機會同裂殖體接觸,所以就沒有上述情況出現(xiàn)。
曾明華、沈詠舟(1991) 對疑似對氨丙啉和氯甲吡啶酚產(chǎn)生耐藥性的柔嫩艾美耳球蟲蟲株(安徽株)進(jìn)行了研究。試驗研究用的敏感蟲株是由上海農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所球蟲病組提供,試驗用藥物氨丙啉(上海紅衛(wèi)獸藥廠),氯甲吡啶酚(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)藥理組提供),以球蟲引起的死亡率、病變記分、盲腸內(nèi)容物中的卵囊數(shù)、增重率、飼料利用率和抗球蟲指數(shù)為藥效判定指標(biāo)。試驗結(jié)果可見,在使用推薦劑量的藥物時,接種柔嫩艾美耳球蟲敏感株和疑似耐藥株,其上述各項指標(biāo)均有顯著差異,從而說明作者從雞場分離的柔嫩美耳球蟲株對氨丙啉和氯甲吡啶酚都產(chǎn)生了耐藥性。從實際情況來看,該雞場應(yīng)用該兩種抗球蟲藥已有5 年以上,由于球蟲長期接觸這些低濃度藥物而產(chǎn)生了耐藥性。所以盡管在飼料中添加上述抗球蟲藥,仍然會因球蟲病而造成大批雛雞發(fā)病和死產(chǎn)。
(三)、流行情況
世界上幾乎每一個國家都有雞球蟲病發(fā)生,可以說,只要有雞,就有球蟲存在( 鄒瑩,1988) 。雞球蟲在我國的分布情況,也證實了這一點。我國從南到北,從東到西均有雞球蟲存在,每年都有球蟲病爆發(fā)的報道,只有程度上的不同。造成經(jīng)濟損失的大小隨各地獸醫(yī)技術(shù)力量的不同而不同,可惜我國無全面精確的統(tǒng)計。
我國公開報道的文獻(xiàn),雞球蟲病幾乎皆集中在柔嫩艾美耳球蟲病和毒害艾美耳球蟲病。誠然這兩種艾美耳球蟲病確是雞的9 種艾美耳球蟲中致病力最強的,常引起顯著的臨診癥狀,并導(dǎo)致大批雞只發(fā)生死亡,易為人們所認(rèn)識和重視。巨型艾美耳球蟲病和堆型艾美耳球蟲病臨診表現(xiàn)較輕微,死亡率不如上述兩種球蟲病高,在生產(chǎn)中容易被忽視。據(jù)調(diào)查,我國華北地區(qū)雛雞爆發(fā)柔嫩艾美耳球蟲病大多是在3 ~6 周齡,少數(shù)是在2 周齡或95 日齡(張守發(fā)等,1990 )。毒害艾美耳球蟲病發(fā)生在6 周齡以上的雞。曾在北京地區(qū)發(fā)現(xiàn)110 日齡的大中雛發(fā)生毒害艾美耳球蟲病,死亡率高達(dá)10% ~15% 。
球蟲病的發(fā)生季節(jié),一般在每年的4 ~9 月,而以6 ~7 月最為嚴(yán)重。我國地域跨度大,球蟲病的發(fā)生季節(jié),南北方會有所不同。密閉式大規(guī)模集約化雞舍,則長年都可發(fā)生。但在溫度高、濕度大的季節(jié)發(fā)病較厲害。
雞球蟲的感染率有人作過調(diào)查,如左仰賢等(1986) 對云南的312 只雞進(jìn)行球蟲調(diào)查時,發(fā)現(xiàn)有252 只雞感染球蟲,總的感染率為80.8% ,其中20 ~60 日齡雞感染率為84.1% ,90 ~120 日齡雞感染率為83.9% ,1 ~1.5 年的雞感染率為57.6% 。
張寶祥等(1986) 報道,陜西省400 份雞糞樣檢查結(jié)果,發(fā)現(xiàn)感染率為74.75% ,感染強度平均為37600 個卵囊/1g 糞便,范圍在100 ~1440000 個/1g 糞便。調(diào)查還發(fā)現(xiàn)2 月齡以下的雛雞感染率和感染強度均比成年雞要高得多。從上可見,雞球蟲在我國的雞群中的感染率是很高的。
(四)、防治
迄今為止。國內(nèi)外對雞球蟲病的防治主要是依靠藥物。使用的藥物有化學(xué)合成的和抗生素兩大類,從1936 年首次出現(xiàn)專用抗球蟲藥以來,已報道的抗球蟲藥達(dá)40 余種(鄒瑩,1988 ),現(xiàn)今廣泛使用的不下20 種左右。我國養(yǎng)雞生產(chǎn)上使用的抗球蟲藥品種,包括進(jìn)口和國產(chǎn)的,估計也有10 余種,介紹如下。
張勤等(1986) 進(jìn)行了速丹(Stenorol) 對雞的柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲和堆型艾美耳球蟲混合感染的抗球蟲效力籠飼試驗和田間試驗。以可愛丹和氯苯胍做了比較?;\飼試驗結(jié)果表明: 于人工感染前2 天日糧中投給3 ×10-6 的速丹,直到感染后l4 天結(jié)束,完全防止了由球蟲病引起的死亡,同飼喂1.25 ×10-4 可愛丹和3 ×10-5 氯苯胍的組和感染不給藥組比較,不論是增重和飼料利用率的提高,還是腸道病變程度的減輕都是明顯的,唯有感染后第5 ~11 天期間的卵囊排出總數(shù)高于可愛丹和氯苯胍組。
2000 只白來航雛雞進(jìn)行田間試驗的結(jié)果是在4 ~8 周期喂3 ×10-6 速丹的組比可愛丹和氯苯胍組救果更好。
張勤等(1986) 報道了速丹和鹽霉素對籠飼肉雞混合球蟲感染的療效對比試驗。結(jié)果表明,速丹的抗球蟲效果比鹽霉素好。3 ×l0-6 和6 ×10-6 的速丹完全有效地防止了4 種球蟲(Eimeria tenella 、E.necatrix 、E.acervulina 和E.maxima )混合感染引起的死亡,3 ×10-6 在提高增重和飼料利用率方面優(yōu)于6 ×10-6 ,但在消除卵囊產(chǎn)生和控制病變發(fā)生上不如6 ×10-6 。鹽霉素(5 ×10-5 和1 ×10-4 )都沒有完全控制球蟲病引起的死亡。5 ×10-5 不論是對增重和飼料利用率的提高,還是病變記分和卵囊產(chǎn)量的降低都不如1 ×10-4 。l ×10-4 的鹽霉素的增重和飼料利用率水平和3 ×10-6 速丹組的接近,說明1 ×10-4 的鹽霉素是防治雞球蟲病的最有效的劑量。
孫浴東等(1986) 用常山酮(4 ×10-6) 、可愛丹(0.05%) 和氯苯胍(3.3 ×10-5) 對自然感染的雞球蟲病進(jìn)行了療效試驗。藥物混入飼料中喂服,連喂1 個月。試驗結(jié)果表明:3 個喂藥組雞的藥前球蟲感染率分別為50% 、60% 和40% ,用藥后下降到0 ,其療效均顯著。而不喂藥組球蟲感染率保持在80% 。常山酮、可愛丹、氯苯胍組平均增重分別為735g 、630g 、705g ,而不喂藥組平均增重為540g 。以上3 種抗球蟲藥防治雞球蟲病的效果顯著。以常山酮效果最好,可愛丹、氯苯胍次之。
孫浴東等(1986) 報道了常山酮、可愛丹、沙氏三球粉(Unistat )3 種抗球蟲藥對柔嫩艾美耳球蟲病的預(yù)防效果的對比試驗。結(jié)果表明: 連續(xù)喂服8 天含5 ×10-6 常山酮的15 只雞,僅在感染后第4 天發(fā)現(xiàn)3 堆血糞。試驗雞精神、食欲、增重均正常。感染后第9 天剖檢7 只雞,腸道均無病變,腸內(nèi)容物和排出的糞便中均查不到卵囊。余下的8 只雞,放養(yǎng)于污染的環(huán)境中,仍連續(xù)喂藥22 天后剖檢,腸道均無病變,糞便中查不到卵囊。可愛丹與常山酮的療效對比試驗的結(jié)果大體相似,唯在感染后第4 天發(fā)現(xiàn)血便比常山酮多1 倍,并有1 只雞的糞便中有少量球蟲的卵囊。沙氏三球粉組中,少數(shù)雞既有臨診癥狀,又有較重的病變,體重略有降低,并有個別雞死亡,僅有一定的預(yù)防效果。
史天衛(wèi)等(1985 )對國產(chǎn)尼卡巴嗪防治雞球蟲病進(jìn)行了二批籠飼試驗,以抗球蟲指數(shù)(相對增重率+ 存活率)- (病變值+ 卵囊值)作為療效標(biāo)準(zhǔn),結(jié)果表明,國產(chǎn)尼卡巴嗪屬高效抗球蟲藥物。其抗球蟲指數(shù)分別為191.25 和190.56 。從試驗結(jié)果看,該藥物l.25:10-4 的劑量不但不影響雞只增重,還能促進(jìn)生長。作者曾以1.5 ×10-4 的劑量作試驗,發(fā)現(xiàn)雞只增重更明顯,其抗球蟲指數(shù)超過200 ,達(dá)到210.47 。但文中指出,根據(jù)對該藥物進(jìn)行安全試驗結(jié)果看,加大劑量亦會出現(xiàn)體重下降,1.25 ×l0-4 足以對付球蟲病對雞的危害。
林盂初等(1986) 對江蘇省江都合成獸藥廠生產(chǎn)的數(shù)種抗球蟲藥。進(jìn)行抗柔嫩艾美耳球蟲的效果試驗。試驗證明,所試藥物中具有十分滿意效果的藥物依次為: 強效氨丙啉預(yù)混劑(0.5g/kg 飼料),常山酮預(yù)混劑(0.5mg/kg 飼料),強效氨丙啉預(yù)混劑(0.5g/kg 飼料)?;前粪?/font>惡啉 5 份+ DVD 1 份(0.12g/kg 飼料)4 種。單用磺胺喹 惡啉 (0.12g/kg 飼料) 不易控制雛雞盲腸球蟲病。
史天衛(wèi)等(1986) 報道了國產(chǎn)尼卡巴嚷(Nicarbazin )防治雞球蟲病的田間試驗與對雞的安全試驗研究。作者通過10967 只雞的田間試驗證明,在飼料中添加1. 25 ×10-4 的尼卡巴嗪,存活率比可愛丹、球蟲寧、痢特靈、鹽霉素組增加1.19% ;相對增重每只增加達(dá)100g 左右。飼料利用率尼卡巴嗪組與可愛丹、球蟲寧、痢特靈、鹽霉素組差異不明顯。
飼料中尼卡巴嚷,以含量分別為1.25 ×10-4 ,2.5 ×l0-4 ,6. 25 ×10-4 ,1.25 ×10-3 任雞自由采食60 天,臨診上未發(fā)現(xiàn)各組雞有中毒癥狀。各組雞只進(jìn)行組織切片觀察,未發(fā)現(xiàn)肌胃、腸、腎有任何明顯的中毒性病變。1.25 ×10-3 組,有腸絨毛斷裂,腸腔內(nèi)有漿液性滲出物,集合管上皮也見脫落。
史天衛(wèi)等(1986) 進(jìn)行了球蟲酯(Ethopabate )防治雞球蟲病的舍飼試驗、藥物比較試驗、對雞的安全試驗。舍飼試驗表明: 氨丙啉(1.25 ×10-4 )加球蟲酯(4 ×10-6) 的抗球蟲結(jié)果與可愛丹(2.5 ×l0-4) 相近似或略強一些。藥物比較試驗,以抗球蟲指數(shù)(Anticoccidial Index ,ACI) 作為判定標(biāo)準(zhǔn),結(jié)果以氨丙啉+ 球蟲酯(1.25 ×10-4+4 ×10-6) 為最高,達(dá)239 。球蟲寧的ACI 僅為105.33 。安全試驗結(jié)果是1 ×10-4 ,2 ×10-4 的球蟲酯對雞是安全的,4 ×10-4 ,雞的體重有所減輕。組織切片觀察,肌胃、肝、脾、肺、腎、腺胃、腸、腦、腔上囊,均未發(fā)現(xiàn)各組器官有任何中毒性病變,只有輕度出血,淋巴細(xì)胞漫潤。
殷佩云等(1986) 報道了鹽霉素對球蟲病的療效。5 ×10-5 、7 ×10-5 、9 ×10-5 的鹽霉素混于飼料中皆有預(yù)防雞球蟲?。ㄈ崮郯蓝蛳x、堆型艾美耳球蟲和巨型艾美耳球蟲)的效果,能控制或降低死亡率,減輕或不產(chǎn)生病變,使排出的卵囊數(shù)目減少,并有促進(jìn)增重和提高飼料轉(zhuǎn)化率的作用。其中以7 ×10-5 效果最好,其次為9 ×10-5 和5 ×10-5 。
試驗結(jié)果證明使用低劑量的鹽霉素知5 ×10-5 ,其增重數(shù)值與不感染不給藥組幾乎相等,相當(dāng)于不感染不給藥組的92% 或99% 。反之,高劑量時則影響增重,如使用9 ××10-5 ,則相當(dāng)于不感染不給藥組的82% 或89% 。所以使用鹽霉素劑量不能高于9 ×10-5 。
林昆華等(1990) 進(jìn)行了鹽霉素預(yù)防肉雞球蟲病的田間試驗。試驗雞為羅曼肉雞,第一組給予5 ×10-5 鹽霉素,第二組投予7 ×10-5 鹽霉素。兩組雞均從1 日齡開始到51 日齡止,連續(xù)投藥。各組試驗雞均于0 、14 、28 、42 和56 日齡時各抽樣(100 只)稱重;l4 、28 、42 和56 日齡各進(jìn)行糞檢卵囊一次。試驗過程中死亡的雞均進(jìn)行剖檢,以確定死因。試驗所得數(shù)據(jù),以統(tǒng)計學(xué)方法處理。試驗結(jié)果是:
1.5 ×10-5 或7 ×10-5 組的試驗雞均未見因球蟲病死亡的,亦未見因藥物中毒死亡的。
2. 每只雞的平均增重和料肉比,不論是5 ×10-5 或是7 ×10-5 組,在1 ~6 周齡時,無顯著差異。7 ~8 周齡時,7 ×10-5 組比5 ×10-5 組試驗雞每只平均增重和料肉比差異顯著。
3.14 、28 和42 日齡3 次糞檢結(jié)果,兩組對比無明顯差異,但在56 日齡糞檢時,5 ×10-5 組每克糞便卵囊數(shù)卻比7 ×10-5 組明顯增多,且有10% 的糞樣有不同程度帶血。
殷佩云等(1986) 進(jìn)行了莫能霉素對人工引發(fā)的雞球蟲病的療效觀察。試驗以鹽霉素和氨丙啉作對比。結(jié)果證明: 莫能霉素接1 ×10-4 ,1.1 ×10-4 ,11 ×10-4 ,2 ×10-4 混于飼料中給予,皆有預(yù)防雞混合型球蟲病的效果。其中以1.1 ×10-4 效果最好。從相對增重率和飼料轉(zhuǎn)化率結(jié)果來看,莫能霉素的適宜劑量為l ×10-4 ~1.1 ×10-4 。
林昆華等(1990) 報道了國產(chǎn)莫能霉素預(yù)防肉雞球蟲病的田間試驗。試驗以克球粉(1.25 ×10-4) 為對比,莫能霉素劑量為1.1 ×10-4 。試驗雞從17 ~51 日齡連續(xù)投藥。克球粉組雞在4 周齡時,由于某些原因停藥7 天,導(dǎo)致發(fā)生了急性球蟲病,經(jīng)治療,死亡86 只。
試驗結(jié)果以統(tǒng)計學(xué)方法處理。得出的結(jié)果:
1.4 周齡前兩組雞在增重上無顯著差異,5 ~6 周齡時差異極顯著,7 ~8 同齡時其差異又趨不顯著。56 天試驗期間,莫能霉素組比克球粉組增重率高13% 。
2. 整個試驗期間,兩組的料肉比值間差異極顯著。
3. 21 ~49 日齡檢查,克球粉組試驗雞的糞便性狀有變化的堆數(shù)比莫能霉素組高。
殷佩云等(1986) 報道了國產(chǎn)球痢靈(Zoalene) 中試產(chǎn)品對雞球蟲病的療效試驗,試驗分預(yù)防和治療兩項,無論預(yù)防或治療試驗,試驗雞(除不感染不給藥組外)皆采用人工感染卵囊的方法。
試驗結(jié)果證明1.25 ×10-4 ,1.5 ×10-4 和2 ×10-4 的球痢靈混于飼料中喂服,對單一感染柔嫩艾美耳球蟲卵囊l ×105 個或感染混合卵囊3 ×l05 個引起的雞球蟲病均有良好的預(yù)防作用,但l.5 ×10-4 和2 ×10-4 對增重有些影響,因此生產(chǎn)上應(yīng)用以l.25 ×10-4 為適宜劑量。
試驗結(jié)果還證明,球痢靈的服藥時間以在感染卵囊前或感染當(dāng)天為宜。隨著服藥時間的推后,其發(fā)病程度、相對增重率和排出卵囊數(shù)量即隨之加重、降低和增多,所以在生產(chǎn)中球痢靈用于雞球蟲病的預(yù)防為最好。
楊振中等(1986) 報道了國產(chǎn)尼卡巴嗪對雞球蟲病的防治研究。作者以1 ×10-4 ~4 ×10-4 劑量分批進(jìn)行籠飼試驗,結(jié)果表明l.25 ×10-4 的劑量對盲腸球蟲和小腸球蟲都有效。田間試驗以克球粉為對照。結(jié)果是以1.25 ×10-4 連續(xù)投服50 天,雞群因球蟲病死亡6 只,為試驗雞的0.3% ,平均增重為1400g 。對照組因球蟲病死亡21 只,死亡率為2.3% ,平均增重為1175 克。
作者還以小鼠、雞對國產(chǎn)尼卡巴嗪進(jìn)行了急性和慢性毒性試驗。試驗結(jié)果說明: 小鼠的急性毒性試驗,每公斤體重2400mg 、4800mg 是安全的;雞的急性毒性試驗,每公斤體重2400mg 、3000mg 、4800mg ,9600mg 也是安全的。雞的慢性毒性試驗,藥的劑量為2 ×10-4 、4 ×10-4 、8 ×10-4 ,連續(xù)投服40 天,無中毒死亡,生長發(fā)育與不給藥對照雞相似。至于肉雞體內(nèi)尼卡巴嚓的殘留測定,采用紫外分光方法測定結(jié)果,除了腹脂在停藥0 天和1 天有殘留外,停藥2 天后各組織內(nèi)的殘留量已全部消失。
據(jù)現(xiàn)有抗雞球蟲藥研究的資料表明,各種抗球蟲藥,均有在球蟲生活史的特定時期發(fā)揮最大作用的活性峰期。樊生超(1990) 用雞胚感染球蟲子孢子作為實驗?zāi)P?,探討了其用于測定抗球蟲藥活性峰期的可能性。作者將孵化至10 日齡的雞胚、蛋殼用碘酊消毒后,給每一雞胚無菌注入2000 個柔嫩艾美耳球蟲的子孢子和青霉素、鏈霉素各2000 單位于尿囊腔內(nèi),然后分別在感染的當(dāng)天,第2 天,第3 天和第4 天注入抗球蟲藥,放入40 ℃溫度孵化箱內(nèi)培養(yǎng)。在感染后第8 天。將不同注藥時間的各組雞胚逐只剖檢,回收并計卵囊數(shù),以感染不給藥組的卵囊產(chǎn)量為100% ,最后根據(jù)不同注藥時間的雞胚卵囊抑制率來判定藥物作用的活性蜂期。作者共測試了8 種抗球蟲藥。結(jié)果如下: 氯甲吡啶酚和丁氧喹啉的作用峰期在球蟲生活史的第1 天,卵囊抑制率分別為100% 和99.97% ;奠能霉素和鹽霉素的活性峰期為第2 天,卵囊抑制率分別為100% 和99.97% ;氨丙啉和四環(huán)素的峰期是第3 天,卵囊抑制率均為100% ;尼卡巴嗪和磺胺二甲基嘧啶的活性峰期在第4 天,其卵囊抑制率分別為99.98% 和98.68% 。試驗結(jié)果與Reid (1975) 報道的用其他方法測得的結(jié)果基本一致,證明了本方法的可用性。
是薛患等(1990) 進(jìn)行了水溶性氨丙啉治療雞柔嫩艾美耳球蟲病的籠飼試驗。試驗以抗球蟲指數(shù)為判定藥效標(biāo)準(zhǔn)。試驗結(jié)果表明20% 水溶性氨丙啉的抗球蟲指數(shù)為188. 01 ,達(dá)到高效水平。從試驗組和對照組飲水量測定,沒有明顯的差別,說明水溶性氨丙啉溶于水后不產(chǎn)生異味。
蔣金書等(1991) 報道了殺球靈(Diclazuril ,商品名Clinacox ,刻利禽)對雞球蟲病的防治效果?;\飼試驗結(jié)果表明: 殺球靈l ×10-6 混于飼料,連續(xù)喂服,可完全有效地控制雞盲腸球蟲病和堆型艾美耳球蟲病的發(fā)生和死亡。5 批試驗的抗球蟲指數(shù)為195.7~207.9 ,比同時試驗的對照藥物莫能霉素(1.2 ×10-4) ,氨丙啉(l.25 ×10-4) ,腐霉素(1.8 ×10-4) ,拉抄洛菌素(1 ×10-4) ,拉那菌素(8 ×10-5) ,尼卡巴囔(1.25 ×10-4) 的效果好。
平養(yǎng)肉雞的田間試驗表明: 以1 ×10-6 的殺球靈混入飼料中,連續(xù)服用,可完全控制雞球蟲病的發(fā)生。其飼料報酬、病變記分和糞便中的卵囊數(shù),均較對照藥物克球粉(1.25 ×10-4) 的效果好。
黃兵等(1990) 用殺球靈在兩個雞場進(jìn)行了防治雞球蟲病的田間試驗。試驗組用殺球靈1 ×10-6 ,對照組兩組,一組用克球粉(2.5 ×10-4) ,二組用尼卡巴嗪(1.3 ×10-4) 。試驗組和對照組雞均從1 日齡開始投藥,隨到56 日齡試驗結(jié)束。以雞只體重、死亡率、腸道病變記分、每克糞便的卵囊數(shù)和料肉比作為效果判定指標(biāo)。結(jié)果為:1. 系球靈組平均體重超過克球粉組;死亡率和料肉比則分別低于克球粉組0.6% 和0.278 ;腸道病變記分和每克糞便卵囊數(shù)皆明顯低于克球粉組。2. 殺球靈組平均體重比尼卡巴嗪組高;死亡率比尼卡巴嗪組高1.231% ;腸道均未發(fā)現(xiàn)球蟲引起的病變;殺球靈組糞檢未查到卵囊,尼卡巴唪組有少量卵囊。兩藥組的料肉比幾乎無差異。試驗結(jié)果證明殺球靈防治雞球蟲病的效果接近或超過所用對照藥物的水平。
俞海等(1991) 就殺球靈對雞柔嫩艾美耳球蟲的殺滅作用,作用峰期及停藥后持續(xù)時間作了試驗觀察。以1 ×10-6 濃度混入飼科,于感染前2 天和感染當(dāng)天開始給藥組,臨診和盲腸病變檢查未發(fā)現(xiàn)異常,盲腸組織學(xué)檢查也未發(fā)現(xiàn)任何發(fā)育階段的球蟲。感染后l 天開始喂藥組,盲腸組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)變性和發(fā)育不良的裂殖體,可認(rèn)為殺球靈抗球蟲作用峰期在子孢子和第一代裂殖體早期階段,對其呈殺滅作用。試驗雞在給藥期和停藥后始終未檢出卵囊,說明其殺滅作用極強。本藥持效時間短,停藥l 天明顯減弱,停藥2 天即基本消失,提示此藥在用藥期間不可間斷。
陳淑玉等(1992) 對殺球靈進(jìn)行了抗雞球蟲病的籠飼試驗和圍欄試驗?;\飼試驗結(jié)果表明: 殺球靈組對每只雞感染5 萬個柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊的保護(hù)率為100% ,而感染不給藥組死亡率達(dá)45% ;與不感染不給藥組相比,殺球靈組感染后第7 天的相對增重率為95% ,而感染不給藥組相對增重率僅68.7% ;殺球靈組感染后第7 天的盲腸病變值和卵囊值均為零,感染不給藥組盲腸病變值為34.5 ,卵囊值為20 。殺球靈組的抗球蟲指數(shù)為195.6 ,表明有顯著抗球蟲效力。圍欄試驗結(jié)果表明: 當(dāng)采用每只雞混合感染孢子化卵囊(柔嫩艾美耳球蟲5 萬個,堆型艾美耳球蟲10 萬個和巨型艾美耳球蟲5 萬個)時,殺球靈組的平均增重和飼料報酬明顯高于速丹組和感染不給藥組;殺球靈組在感染后第7 天和第14 天的病變記分為零,而速丹組分別為4 和1.0 ,感染不給藥組為4 和1.3 ;殺球靈組的死亡率為零,速丹組為40.83W ,感染不給藥組為62.08% ;殺球靈組在整個飼養(yǎng)期間都無卵囊排出,而速丹組和感染不給藥組在感染后的第7 天均有大量卵囊排出,第14 天仍有不少卵囊排出。以上結(jié)果表明,殺球靈防治雞球蟲病效果理想,值得推廣。
劉毅等(1990) 報道了湖南省化工研究所研制的阿克洛胺(Aklomide) 對柔嫩艾美耳球蟲病的防治效果。試驗雞每只感染柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊3 萬個(除不感染不給藥組外),感染卵囊前2 天在飼料中拌入0.1% ,0.05% ,0.025% 的阿克洛胺,以氯苯胍組(3.3 ×10-5) 作藥物對照。試驗以平均只增重、血糞記分、病變記分、飼抖報酬等作療效判定指標(biāo)。結(jié)果表明: 不感染不給藥組的平均只增重為86 克,飼料報酬為3.95 。0.05% 和0.l% 的阿克洛胺組無血糞,盲腸無肉眼可見球蟲病變,平均其增重分別為70.9 和82.9 ,飼料報酬分別為5.4 及4.02 ,比0.025% 組及氯苯胍組為優(yōu)。作者認(rèn)為該藥以0.05% 濃度加入飼料中對于防治雞柔嫩艾美耳球蟲病有良效。
張勤等(1990) 報道了菌必滅對雞的試驗性盲腸球蟲病的治療效果。菌必滅為磺胺二甲基嘧啶制劑,配制成濃度為0.15% 的溶液,飲水給藥,連飲7 天。結(jié)果證明從感染前l 天開始給藥直到感染后72h 開始給藥,都能有效地消除血糞排出和防止球蟲病引起的死亡。
孫浴東等(1990) 報道了鹽霉素、康樂安對內(nèi)用仔雞防治球蟲病的試驗。飼喂時間49 天,7 日齡開始投藥,上市前5 天停藥。從成活率、飼料轉(zhuǎn)化率、增重及屠宰測定看,鹽霉素組比康樂安組要好。
孫寶貴蕁(1990) 報道了二甲硫胺與其他抗球蟲藥對人工感染柔嫩艾美耳球蟲病的療效對比試驗。作者采用人工感染卵囊的方法,試驗雞于感染前l 天投藥。試驗結(jié)果證明,二甲硫胺6.2 ×10-5 ,氯苯胍3.3 ×10-5 ,氨丙啉l ××10-4 ,對5 萬個柔嫩艾美耳球蟲卵囊攻擊的雛雞,都有明顯的保護(hù)作用,3 種藥物組雞的增重率均比不感染不給藥組為高,說明這3 種藥物不僅能預(yù)防雞球蟲病,并有增重效果。試驗結(jié)果說明呋喃唑酮2 ×10-4 、復(fù)方敵苗凈2 ×10-4 拌飼,不能使感染雛雞得到完全保護(hù)。隨明這兩種藥物長期應(yīng)用,產(chǎn)生了抗藥性蟲株。
孫寶貴、何新民(1990) 應(yīng)用二甲硫胺6.2 ×10-5 進(jìn)行對自然感染雞球蟲病的預(yù)防試驗。以氯苯胍3.3 ×10-5 作藥物對照,另設(shè)不用藥對照組。藥效判定按死亡率、增重、卵囊數(shù)3 項指標(biāo)進(jìn)行考核。試驗結(jié)果證明,6.2 ×10-5 二甲硫胺拌飼,完全可以控制生產(chǎn)現(xiàn)場雞球蟲病的發(fā)生,而且安全。
童村等(1984) 報道了蒽環(huán)類抗生素防治雞球蟲病的初步研究。文中介紹80334 菌種是從我國湖北省襄樊地區(qū)的土壤中分離獲得的一株鏈霉素菌,它產(chǎn)生紅色蒽環(huán)類抗生素80334 (相似于1- 羥基阿克拉霉素)。經(jīng)初步試驗表明: 抗生素80334 對柔嫩艾美耳球蟲具有明顯的防治作用。
史天衛(wèi)等(1984) 進(jìn)行了蒽環(huán)類抗生素防治雞柔嫩艾美耳球蟲的籠飼試驗。試驗“鹽霉素(7.5 ×10-5) 為藥對組。試驗結(jié)果表明,80334 菌絲體組的臨診血便、死亡率與鹽霉素組無顯著差異。盲腸病變80334 菌絲體組略好于鹽霉素組,增重80334 菌絲體組則比鹽霉素組差。為了彌補80334 菌絲體減重的缺點,作者在試驗組里又增加了其他抗生素(青霉素與潔霉素),將以上兩種抗生素混合于80334 菌絲體中進(jìn)行藥物對比試驗。試驗結(jié)果表明,其臨診血便、死亡率、盲腸病變記分均與以前未加青霉素、潔霉素的試驗結(jié)果相同,但其增重則超過了鹽霉素組15.2% ~19.45% 。
李揚等(1986) 以常山酮、可愛丹和上海獸藥廠生產(chǎn)的強效氨丙啉對雛雞柔嫩艾美耳球蟲病進(jìn)行了藥效對比試驗。藥效以抗球蟲指數(shù)為判定標(biāo)準(zhǔn)。試驗結(jié)果,常山酮的抗球蟲指數(shù)為205.59 ,可愛丹為169.6 ,強效氨丙啉為160.14 (每公斤飼料0.5g 藥飼)。作者文中提到另一試驗中,每公斤飼料加1g 強效氨丙啉藥飼,則有十分滿意的抗球蟲效果。
楊振中等(1980) 對國產(chǎn)氨丙啉進(jìn)行了抗柔嫩艾美耳球蟲病的舍飼試驗。試驗用21 日齡來航雛雞,分國產(chǎn)氨丙啉1 ×10-4 組和不用藥對照組兩個組,每組100 只雞,每組雞群都掛有一鐵絲籠,籠內(nèi)飼養(yǎng)3 只雞,每只經(jīng)人工感染4 萬個柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊的“種子雞”,感染卵囊后第5 天掛入,連續(xù)掛籠25 天?!胺N子雞”籠下雞舍地面木屑上每天噴灑適量的水,以保持有利于卵囊發(fā)育的濕度?!胺N子雞”掛入后的第10 、15 、20 、25 、30 天每次分別剖檢5-10 只雞,作病變觀察和卵囊檢查,試驗開始和結(jié)束時以群體稱重各一次。
通過試驗表明:1. 氨丙啉1 ×10-4 混入飼料內(nèi)進(jìn)行1 個月的喂雞試驗,因球蟲病引起死亡的為1% ,不用藥對照組因球蟲病致死為10% ,兩組相比差異顯著。2. 解剖雞的盲腸病變與卵囊檢出相符合;氨丙啉組剖檢40 只雞中觀察到有輕微病變,又在盲腸內(nèi)容物中查到卵囊的僅1 例,占2.5% 。對照組剖檢的40 只雞中盲腸病變嚴(yán)重的有38 例(同時都查到多量的球蟲卵囊),占抽殺剖檢雞的85% 。兩組相比差異非常顯著。3. 試驗結(jié)束時兩組的實際增重數(shù)值也有明顯的差別。不用藥對照組平均增重142.5 克作為100% ,氨丙啉組平均增重165 克,為對照組增重116.2% 。
呂文順等(1981) 對進(jìn)口的強力氨丙啉作了抗球蟲病效力和毒性試驗。強力氨丙啉分6.3 ×10-5 、1.25 ×10-4 、2.5 ×10-4 、,5 ×10-4 、和l ×10-3 (以Amprolium 計算)5 個組,以氯苯胍3 ×10-5 、和6 ×10-5 為對照組。藥物均勻混于飼料中喂服,人工感染球蟲卵囊前2 日投喂,直到試驗結(jié)束。除不感染不給藥組外,各組雞均經(jīng)口感染孢子化的混合種球蟲卵囊(柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲、布氏艾美耳球蟲、變位艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲和早熟艾美耳球蟲)10 萬個。試驗結(jié)果: 感染不給藥組于人工感染卵囊后第5 天全部發(fā)病,死亡8/10 ,剖檢證實皆死于盲腸球蟲和小腸球蟲病。強力氨丙啉6.3 ×10-5 、組保護(hù)5/5 ,1.25 ×10-4 、組保護(hù)10/10 ,2.5 ×10-4 、、5 ×10-4 、1 ×10-3 組各保護(hù)5/5 ,氯苯胍3 ×10-5 、和6 ×10-5 組保護(hù)10/10 。各試驗組感染后第5 ~7 天的增重率,強力氨丙啉6.3 ×10-5 組為68.1% ,1.25 ×10-4 組平均為96.8% ,2.5 ×10-4 組為113.6% ,5 ×10-4 和1 ×10-3 組為102.2% ;氯苯胍3 ×10-5 、6 ×10-5 組平均為97.8% 。試驗證明,強力氨丙啉是一種較好的抗雞球蟲病藥物,1.25 ×10-4 以上濃度拌料飼喂,可抗大量艾美耳球蟲混合種卵囊的感染,防止球蟲病的發(fā)生。本藥安全幅度大,1 ×10-3 連續(xù)飼喂16 天,2.5 ×10-4 連續(xù)喂18 日齡小雞40 天未見有毒性反應(yīng)。
張毅強等(1980) 報道了國產(chǎn)氯苯胍 對雛雞球蟲病的療效和毒性試驗。試驗結(jié)果表明:l. 國產(chǎn)氯苯胍對人工感染引發(fā)的雛雞球蟲病以3.3 ×10-5 的劑量混飼、飲服和混飼加飲服3 個治療組的防病率分別為92% 、100% 和95.5% ;保護(hù)率分別為96% 、100% 和100% ,證明國產(chǎn)氯苯胍對雞球蟲有滿意的抑制作用,其中飲服效果更為滿意。增重方面,試驗結(jié)束后3 個治療組每雛平均增重率分別為24.1% 、24.1% 和14.5% ,與不感染不給藥組(增重率為31.9% )相比稍差,但與感染不給藥組(增重率為5.3% )相比就好多了。2. 自然感染試驗中,以3.3 ×10-5 劑量混飼,防病率為92% ,保護(hù)率為96% ,增重率為31.6% ,與對照組(發(fā)病率81.1% ,死亡率24.3% ,減重率5.9% )相比,效果顯著。這證明國產(chǎn)氯苯胍對雞球蟲病有很高的預(yù)防作用。3. 毒性試驗以治療量的4 倍、6 倍、8 倍和10 倍的劑量連續(xù)服用10 天,各組受試雞在整個試驗期間食欲正常,耐受良好,除發(fā)現(xiàn)3.3 ×10-4 組在試驗后期體重降低外。其余各組雞生長發(fā)育良好,未發(fā)病任何中毒和死亡現(xiàn)象,與不用藥對照組相比無差別。證明國產(chǎn)氯苯胍毒性較小安全范圍較大,接3.3 ×10-4 劑量混飼防治雞球蟲病是安全的。
張紹昌(1988) 進(jìn)行了磷酸伯氨喹對籠養(yǎng)雞柔嫩艾美耳球蟲病的療效試驗。試驗以氯苯胍為對照藥物。結(jié)果在發(fā)病率、死亡率、病變記分方面與氯苯胍組無差異,而相對增重率、飼料利用率均優(yōu)于氯苯胍組,接近不感染不給藥組,但排出球蟲卵囊數(shù)較高。
吳薛忠等(1994) 用我國研制成功的代號為 AC- Ⅰ的抗球蟲藥,作了防治雞柔嫩艾美耳球蟲病的籠飼試驗,試驗共進(jìn)行了4 批。一、二批的試驗單用AC- Ⅰ感染卵囊前24h 開始服藥,直至感染后第7 天結(jié)束,每只雞人工感染5 萬個柔嫩艾美耳球蟲卵囊(除白對照組雞外),療效評定以抗球蟲指數(shù)(ACI) 為標(biāo)準(zhǔn)。試驗結(jié)果顯示1 、2 批AC- Ⅰ的抗球蟲指數(shù)為191.6 和196 67 ,而感染不用藥組為113.6 和140. 91 。第3 、4 批試驗,以同患產(chǎn)品Diclazuril 進(jìn)行對比,結(jié)果AC- Ⅰ的抗球蟲指數(shù)為194.36 和194.25 ,Diclazuril 的抗球蟲指數(shù)為193 .88 和194. 12 ,感染不用藥組僅為77.54 和58.07 。結(jié)果表明我國合成的AC- Ⅰ性能穩(wěn)定,效果可靠,與國外同類產(chǎn)品Diclazuril 的抗球蟲水平完全一致。
吳薛忠等(1994) 報道了我國自行研制的抗球蟲新藥- 海南霉素預(yù)混劑(商品名為雞球素)對柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲和變位艾美耳球蟲籠飼試驗研究。海南霉素用了兩種劑量,一為5 ×10-6 另一為7.5 ×10-6 ,以鹽霉素6 ×10-5 作藥物對照。感染卵囊前l 天開始服藥,喂至感染后7 ~8 天試驗結(jié)束。療效評定以抗球蟲指數(shù)(ACI) 為標(biāo)準(zhǔn)。試驗結(jié)果見表4-! 。
表4-1 海南霉素療效評定結(jié)果
整個試驗結(jié)果表明海南霉素對雞的主要5 種球蟲都有明顯的抗球蟲效果,是一種值得推廣的高效低量的抗球蟲藥物。
聶奎等(1994) 報道丁海南霉素對雞球蟲病治療和預(yù)防效果。作者對發(fā)病雞群施用海南霉素7.5 ×10-6 拌料喂服,用藥后第1 天雞死亡率下降,第3 天后停止死亡。用藥后共死7 只(藥前3 天已死亡38 只)。對飼喂在同一雞場的l200 只伊莎雛雞(10 日齡)及200 只雅康雛雞(7 日齡)給予海南霉素5 ×10-6 ,拌飼喂服,結(jié)果無一死亡,存活率100% 。
聶奎等(1994) 用海南霉素進(jìn)行預(yù)防柔嫩艾美耳球蟲病的療效試驗。l5 日齡無球蟲雞每只人工感染柔嫩艾美耳球蟲孢于化卵囊10 萬個,給予5 ×10-6 的海南霉素拌飼,有很好的預(yù)防效果,其存活率為100% ,血便記分0.44 ,病變記分1.13 ,抗球蟲指數(shù)為172.75 。與感染不給藥組抗球蟲指數(shù)相比,差異極顯著(P <0.01) 。作者將海南霉素與氯苯胍聯(lián)合使用,顯示出很好的相加作用,病變記分0.38 ,血便記分0.13 ,比海南霉素單用為低;抗球蟲指數(shù)為180.25 ,比海南霉素單用時為高。而氯苯胍因長期單一使用和不合理使用,柔嫩艾美耳球蟲對它已產(chǎn)生耐藥性,單用氯苯胍死亡率高達(dá)62.5% ,血便記分l.59 。病變記分3.63 ,抗球蟲指數(shù)僅達(dá)28.25 。
黃兵等(1994) 在人工感染柔嫩艾美耳球蟲卵囊下,對殺球靈、常山酮、氯羥吡啶、馬杜拉霉素和鹽霉素5 種抗球蟲藥,進(jìn)行了3 批防治雞柔嫩艾美耳球蟲病的療效對比試驗。療效評定以抗球蟲指數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)。試驗結(jié)果顯示上述5 種抗球蟲藥的抗球蟲指數(shù)分別為,殺球靈195.52 ,195.29 和192.74 ;常山酮為200.60 、199.04 和187.45 ;氯羥吡啶為179. 64 ,174.42 和167.93 ;馬杜拉霉素為194.23 ,194.23 和198.89 ;鹽霉素為167.32 ,170.95 和164.82 。用之為對照的感染不給藥組的抗球蟲指數(shù)分126.50 ,130.97 和93.31 。殺球靈、常山酮和馬杜拉霉素的抗柔嫩艾美耳球蟲效果非常好,抗球蟲指數(shù)超過190 ;氯羥吡啶和鹽霉素的效果次之,其抗球蟲指數(shù)在160 ~180 之間。
吳兆敏(1990) 報道了短小棒狀桿菌菌苗(CPV) 預(yù)防雛雞柔嫩艾美耳球蟲病的研究。作者通過對不同時期(4 ,7 ,15 天)小雞血清中溶菌酶含量的測定,顯示出CPV 對小雞腹腔巨噬細(xì)胞有明顯的激活作用。通過試驗組,腹腔注射40 億CPV/ 只,血清溶菌酶的含量平均為18. 00 ±0.43 。對照組腹腔注射同量的生理鹽水,血清溶菌酶的含量平均為10.20 ±0.11 。溶菌酶含量的顯著增高尤以注射CPV 后第4 天最為明顯。到2 周仍維持在一定水平上。試驗設(shè)兩組,每組20 只雞,同時口服接種柔嫩艾美耳球蟲卵囊(1.5 萬/ 只)。試驗組于接種后1 天腹腔注射40 億CPV/ 只,7 天后計算死亡率。對照組不注射CPV 。試驗結(jié)果對照組死亡率達(dá)80% ,并伴有大量血便,而試驗組無一死亡,也未見血便。在初次感染后2 周,每只雞用15 萬柔嫩艾美耳球蟲卵囊攻擊,試驗結(jié)果說明試驗雞對再感染具有100% 保護(hù)率,而健康對照組雞95% 死亡,僅有5% 雖未死亡,但大量排血便,奄奄一息。說明CPV 對小雞腹腔巨噬細(xì)胞有明顯激活作用,從而增強了小雞對柔嫩艾美耳球蟲病的抵抗能力。這一結(jié)果與Eng-Hong-Lee 等研究的Carragenan 有破壞和殺傷雞腹腔巨噬細(xì)胞的功能,以致使球蟲感染大大增強的報道是一致的。
陳國慶等(1992) 進(jìn)行了不同飼料營養(yǎng)成分抗球蟲效力對比試驗。試驗選用塔特姆(Tatum) 品種商品代同一批雛雞50 只,雌雄各半,發(fā)育良好,初生重均在0.041 ~0.042kg 。按雌雄各半,隨機將50 只雛雞分為5 個組,即對照l 組,對照2 組,試驗1 ,2 、3 組,每組10 只,均飼養(yǎng)在經(jīng)消毒處理后的鐵絲籠中。試驗1 組喂飼魚粉蛋白型飼料配方組合的日糧,試驗2 組喂飼植物蛋白型(大豆餅)飼料配方組合的日糧,試驗3 組喂飼酵母蛋白型飼料配方組合的日糧。試驗1 、2 、3 組的飼料中,按等量遞加法加入同一種代號為E 的高效添加劑(內(nèi)含超標(biāo)多維,礦微及限制性氨基酸,促進(jìn)生長的藥物和抗球蟲藥物)。飼養(yǎng)管理及免疫程序按肉用仔雞生產(chǎn)常規(guī)進(jìn)行。
雛雞喂至14 日齡時,除對照1 組外,其余各組雞每只均經(jīng)口感染10 萬個柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊。試驗結(jié)果: 對照1 組,對照2 組,試驗1 、2 、3 組相對增重率分別為100 ,43.3 ,108 ,79.4 ,82.3 ;存活率分別為100 ,50 ,100 ,100 ,90 ;病變值分別為0 ,3.9 ,1 ,5.5 ,5.0 ;卵囊值分別為0 ,4 ,0 ,5 ,5 ;抗球蟲指數(shù)分別為200 ,85.4 ,207.6 ,168.9 ,162.3 。由此可見同一種具有高效抗球蟲藥添加到不同飼料營養(yǎng)成分所組成的肉用仔雞日糧中,通過喂飼之后,肉雞所獲得的抗球蟲效力是不同的。
林昆華等(1993) 對國產(chǎn)馬杜拉霉素的純結(jié)晶體、馬杜拉霉素菌絲體、馬杜拉霉素粗提液進(jìn)行了預(yù)防肉用仔雞球蟲病的療效試驗,共進(jìn)行兩個試驗,試驗一,每只雛雞人工感染柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊7 萬個,試驗二的感染卵囊量提高高10 萬個。試驗以進(jìn)口的同類產(chǎn)品“加福”為藥物對照。療效評定以抗球蟲指數(shù)(ACI) 為標(biāo)準(zhǔn)。服藥組雞于人工感染卵囊前2 天開始喂藥,直到試驗結(jié)束,即感染卵囊后第8 天。
試驗一3 批雞試驗結(jié)果表明,國產(chǎn)馬杜拉霉素純結(jié)晶體5 ×10-6 。和馬杜拉霉素菌絲體5 ×10-6 的抗柔嫩艾美耳球蟲的效力可與“加福”相媲美。馬杜拉霉素純結(jié)晶體的ACI 分別為199.5 、197.1 和199.8 ,馬杜拉霉素純結(jié)晶體的ACI 分別為198.2 、199.2 和199.6 ,加福ACI 分別由199.4 、195.1 和197.0 ,均屬高效抗球蟲藥物。馬杜拉霉素粗提液5 ×10-6 混飼,所得抗球蟲指數(shù)分別為189.2 、191.2 和189.2 ,不如馬杜拉霉素純結(jié)晶體和菌絲體,相對增重率較低。
試驗二試驗結(jié)果顯示,國產(chǎn)馬杜拉霉素純結(jié)晶體和菌絲體1% 預(yù)混劑,按5 ×10-6 劑量混飼,對人工感染10 萬個/ 只柔嫩艾美耳球蟲卵囊的雛雞,可有效地防止球蟲病的發(fā)生,盲腸不產(chǎn)生病變,糞便中不出現(xiàn)卵囊,對增重?zé)o不良影響,抗球蟲指數(shù)達(dá)到或超過美國氰胺公司生產(chǎn)的加福。馬杜拉霉素粗提液1% 預(yù)餛劑,按5 ×10-6 飼,可預(yù)防雞柔嫩艾美耳球蟲病的發(fā)生,但盲腸出現(xiàn)輕微病變,糞便中出現(xiàn)少量卵囊,適口性稍差,對增重有一定影響。
林昆華等(1994) 報道,在籠飼試驗中,曾應(yīng)用國產(chǎn)馬杜拉霉素(商品名抗球王)和加福各3 ×10-6 、4 ×10-6 、7 ×10-6 、9 ×10-6 和1.5 ×10-5 的劑量進(jìn)行試驗,取得滿意的結(jié)果,唯9 ×10-6 和1.54 ×10-5 的結(jié)果與美國氰胺公司報告的材料不一致,可能是籠飼試驗用藥時間短的緣故。為了解釋這一問題,作者做了不同劑量的國產(chǎn)馬杜拉霉素在肉雞生產(chǎn)全程應(yīng)用的試驗。試驗結(jié)果顯示,以雞增重率、相對增重率(以推薦劑量5 ×10-6 作基礎(chǔ)算)有隨藥物濃度的增高,呈下降趨勢。與5 ×10-6 組相比,使用9 ×10-6 劑量的相對增重率要損失12 個百分點??骨蛲?font face="Times New Roman">1.5 ×10-5 組、加福1.5 ×10-5 組的增重率和相對增重率與5 ×10-6 、7 ×10-6 、9 ×10-6 組相比,差異甚大,但抗球王組比加福組顯得要好些。從臨診表現(xiàn)來看,抗球王5 ×10-6 、7 ×10-6 、9 ×10-6 組雞只均顯示正常;抗球王1.5 ×10-5 和加福l.5 ×10-5 組雞只的精神、食欲均明顯較差。生長緩饅,羽毛無光澤,較零亂,加福1.5 ×10-5 組比抗球土1.5 ×10-5 組顯得更為嚴(yán)重,但沒有發(fā)生死亡。
汪明等(1994) 進(jìn)行了國產(chǎn)馬杜拉霉素(抗球王)結(jié)晶體5 ×10-6 、菌絲體(5 ×10-6) 預(yù)防肉雞球蟲病的田間試驗。試驗以加福(5 ×10-6) 為對照。試驗結(jié)果是:1.1 ~43 日齡7 次抽樣稱重的數(shù)據(jù)顯示,在投藥期間,馬杜拉霉素結(jié)晶體組平均增重1480g 、菌絲休組為1475g ,加福組為1521g ,加福組略高于結(jié)晶體和菌絲體組,統(tǒng)計分析表明,3 組之間無顯著差異。2. 糞便卵囊檢查結(jié)果,3 組在1 、14 、38 和45 日齡,每克糞便卵囊數(shù)均為0 ,說明馬杜拉霉素結(jié)晶體、菌絲體和加福都有好的抗球蟲效果。3. 在整個試驗期間,試驗組和對照組均未發(fā)現(xiàn)毒副反應(yīng),也未發(fā)現(xiàn)因球蟲病死亡的雞只。
林昆華等(1994) 對德國拜耳藥廠生產(chǎn)的新抗球蟲藥百球清(Baycox ,為Toltrazuril2.5% 溶液)進(jìn)行了抗球蟲效果的驗證試驗。試驗以加福(美國氰胺公司生產(chǎn)的馬杜拉霉素1% 預(yù)混劑)為對照藥物。百球清2.5 ×10-5 飲服,于人工感染柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊后第3 、4 兩天給藥,馬杜拉霉素5 ×10-6 混飼,于人工感染柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊前2 天開始服藥,直至試驗結(jié)束。卵囊感染量為每只8 萬個。療效判定以抗球蟲指數(shù)(ACI) 為標(biāo)準(zhǔn)。試驗結(jié)果: 百球清組3 批試驗所得ACI 分別為188.9 、197.3 和196.7 ;馬杜拉霉素組的ACI 分別為175.7 、193.1 和195.7 ;感染不給藥組分別為80.4 、111.1 和91.5 。
謝明權(quán)等(1989) 進(jìn)行了球安(Avatec) 防治雞球蟲病的試驗。球安有效成分為拉薩洛菌素( Lasalocid) 。以抗球蟲指數(shù)(ACI) 為療效判定標(biāo)準(zhǔn)。試驗結(jié)果表明:7.5 ×10-5 球安效果達(dá)優(yōu)秀水平,5 批試驗的ACI 分別為236.5 ,186.9 ,196.6 ,195.1 和198.9 而感染不給藥組的ACI 分別為108.8 ,23.2 ,107 ,5 ,531 和58 。
田間試驗,對照組球蟲病死亡率達(dá)46.53% ~55.84% ,而球安組則無一例因雞球蟲病死亡的。
黃兵等(1991) 對加福(Cygro 馬杜拉霉素)用3 批共150 只21 日齡伊莎公雞人工感染柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊8 萬個,進(jìn)行了抗球蟲的籠飼試驗,以鹽霉素(6 ×10-5) 和克球多(Clopidol ,1.25 ×10-4 )為藥物對照,以抗球蟲指數(shù)(ACI) 為療效判定標(biāo)準(zhǔn),3 批試驗結(jié)果: 加福的抗球蟲指數(shù)分別為193.51 、190.05 和199.23 ;鹽霉素的抗球蟲指數(shù)分別為168.74 、168.24 和179.43 ;克球多的抗球蟲指數(shù)分別為176.84 、183.05 和171.26 。證明加福能有效預(yù)防柔嫩艾美耳球蟲病,其效果優(yōu)于鹽霉素和克球多。
史天衛(wèi)等(1992) 進(jìn)行的田間試驗結(jié)果說明,5 ×10-6 的馬杜拉霉素混飼,可預(yù)防雞球蟲病,對雞增重、育成率,飼料利用率無不良影響。試驗結(jié)果比呋喃唑酮預(yù)防雞球蟲病的效果更好。
謝明權(quán)等(1987) 用速丹(3 ×10-6) ,球凈(Necoxine ,1.25 ×10-4) ,球安( Avatec ,7.5 ×10-5 ,優(yōu)素精(Salinomycin ,5 ×10-5 ),加強安保樂(1.55 ×10-4) ,欲可胖(Coban ,l ×l0-4) ,球痢靈(1.25 ×10-4) ,敵球素(Doccox ,3 ×l0-5) ,氯苯胍(3.3 ×10-5)9 種抗球蟲藥對廣東省惠陽和湛江兩地的柔嫩艾美耳球蟲病進(jìn)行了實驗室和叫間的預(yù)防試驗。藥物療效以抗球蟲指數(shù)( ACI) 為考核標(biāo)準(zhǔn)。實驗室試驗結(jié)果: 速丹、球凈,球安3 種藥物對惠陽、湛江兩地的柔嫩艾美耳球蟲效果均非常好,抗球蟲指數(shù)均達(dá)到優(yōu)秀水平(180 以上)。加強安保樂對湛江的柔嫩艾美耳球蟲效果很好,ACI 達(dá)優(yōu)秀水平,但對惠陽蟲株效果較差,其ACI 僅為151 。優(yōu)素精對惠陽的柔嫩艾美耳球蟲很敏感,ACI 達(dá)196.78 ,但對湛江蟲株則效果較差,其ACI 僅這133.3 。其他3 種藥物(欲可胖、球痢靈、氯苯胍)則對惠陽、湛江兩地的柔嫩艾美耳球蟲效果均差。
田間試驗結(jié)果,從增重和飼料報酬比較,各組雞全期平均日增重以球痢靈、速丹、敵球素、球安為優(yōu),而球凈則增重較少,但經(jīng)方差分析,僅球痢靈組與球凈組有顯著差異,其他均顯差異不顯著。從料肉比結(jié)果看,速丹、敵球素、球痢靈、球安較其他組為低,而球凈較高。各組在排血便、球蟲病死亡和糞檢卵囊數(shù)結(jié)果,速丹、球凈、敵球素、球安組在整個試驗期間均無發(fā)現(xiàn)球蟲病。從糞便卵囊數(shù)看,速丹、球凈、敵球素、優(yōu)素精、氯苯胍組數(shù)較低。
作者認(rèn)為,廣東省面臨港、澳,引入新一代球蟲藥時間較長,目前為止,國際上常用的球蟲藥,除極少數(shù)以外,如加福,大部分已在省內(nèi)部分飼料廠和雞場進(jìn)行了不同程度的驗證或使用。生產(chǎn)單位對球蟲藥性能及使用方法不十分了解,故往往出現(xiàn)盲目用藥現(xiàn)象。有些雞場長期使用一種可愛丹或優(yōu)素精,盡管使用初期效果好,但不久便產(chǎn)生抗藥性,療效迅速下降。在試驗中,球痢靈、氯苯胍等的療效差是由于這個原因引起。克服抗藥性產(chǎn)生的主要方法是選擇幾種較好抗球蟲藥進(jìn)行交互使用,但適合大面積使用而抗球蟲效果優(yōu)秀的藥物種類并不多,故在交互使用時,可在球蟲病低發(fā)季節(jié)使用抗球蟲效果較差的藥物,這樣既可防止球蟲病嚴(yán)重暴發(fā),又可延長球蟲藥使用的壽命。
為了全面控制雞球蟲病,國外一直在探索雞球蟲病的免疫問題,近十幾年來進(jìn)行了大量研究工作,取得不少成果。我國對雞球蟲病的免疫研究,起步較晚,但也獲得一些可喜的成績。
王宗儀等(1986) 進(jìn)行了雞柔嫩艾美耳球蟲計劃感染免疫的研究。作者以雞柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊有計劃地感染21 日齡來航雛雞,有3 組每雞分別以500 、5000 、50000 個卵囊一次經(jīng)口感染;另一組每雞以500 、5000 、50000 個卵囊每隔10 天依次感染。上述3 組雞均于感染10 天后以50000 個同種孢子化卵囊經(jīng)口進(jìn)行攻擊,依次感染組于第3 次感染后的第10 天再以50000 個柔嫩艾美耳球蟲孢予化卵囊進(jìn)行攻擊,最后于感染后或攻擊后觀察血便和體重變化,每克糞便卵囊數(shù)和盲腸病變記分為免疫效果的評判內(nèi)容。結(jié)果表現(xiàn)了初次投服的卵囊數(shù)量越多,耐過的雛雞所獲得的免疫力就越大些,但初次以較大劑量卵囊投服,對機體有不良影晌,甚至可造成死亡。而通過依次增加卵囊的數(shù)量反復(fù)輕微感染雛雞對機體的正常生理狀態(tài)幾乎無不良影響,并且獲得的免疫力也較牢固。
田廣孚(1986) 報道了用柔嫩艾美耳球蟲子孢子接種雞胚對雛雞進(jìn)行免疫的探索。作者用孵化11 天的雞胚,每胚接種2000 個子孢子。接種后第7 天解剖3 只活雞胚,均在尿囊膜上發(fā)現(xiàn)裂殖體、大小配子、合子或未成熟卵囊,證明接種成功。接種的雞胚和未接種的雞胚兩者孵化率比較沒有顯著差異。對接種子孢子后孵出的2 周齡雛雞,每只用80000 個柔嫩艾美耳球蟲孢子化的卵囊攻擊,與對照雞比較,其死亡率、盲腸病變、體重、排出的卵囊數(shù)和卵囊孢子化率均無顯著差異,而只有血便堆數(shù)接種的雞比對照雞的排出量多。分析試驗結(jié)果,認(rèn)為用2000 個子孢子接種雞胚孵出雛雞,對80000 個孢子化卵囊的一次性攻擊,和對照雞比較來看出具有免疫力。
吳兆敏等(1990 )應(yīng)用化學(xué)誘變劑N-metheyl-N-nitroso-guanidine (簡稱NTC )處理雞柔嫩艾姜耳球蟲卵囊,以5ug/ml 、10ug/ml 、20ug/ml 、40ug/ml 、80ug/ml 、100ug/ml 濃度。處理30min 、60 min 、120min 、240min ,處理溫度為4 ℃,37 ℃兩種。處理過的柔嫩艾美耳球蟲卵囊反復(fù)漂洗3 次以上。然后口服接種2 周齡小雞(5000 個卵囊/ 只) ,1 周后再口服接種相同劑量的卵囊。在初次感染后3 周,用10 萬個柔嫩艾美耳球蟲卵囊/ 只口服攻擊小雞,觀察其保護(hù)效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn),NTG 處理濃度在5ug/ml ,4 ℃,120min 或者5ug/ml ,37 ℃,30rnin 的兩組均具有100% 的保護(hù)力,而相應(yīng)對照雛雞僅有10% 保護(hù)力。但NTG 20ug/ml 濃度處理30min ,37 ℃,卵囊已開始出現(xiàn)破損,溶解。隨著處理濃度的增高,卵囊破壞數(shù)也增高。與此同時,作者對二次口服免疫接種后雛雞盲腸病變作了觀察,發(fā)現(xiàn)免疫組盲腸30% 未見病變,65% 有輕度病變、5% 病變略為明顯;而對照組雞盲腸95% 嚴(yán)重病變,大量出血,僅5% 病變較輕。說明NTG 對雞柔嫩艾美耳球蟲有明顯的致弱效果,但仍保持其抗原性水變,具有對攻擊感染極好的保護(hù)力。
陳明勇、蔣金書(1990) 通過利用雞柔嫩艾美耳球蟲卵囊及子孢子可溶性抗原,成功地建立了酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELSA) ,確定了試驗最適條件,并用于幾種不同的免疫方法免疫雞血清抗體的檢測。結(jié)果表明,卵囊和子孢子可溶性抗原的最適工作濃度分別為33ug/ml 和28ug/ml ;兩種抗原在最適包被濃度工作時檢測雞柔嫩艾美耳球蟲血清抗體,效價幾乎一致(陽性血清為1:640 ~1:5120 )。運用卵囊抗原檢測3 種免疫方法免疫雞血清抗體,一次免疫呈現(xiàn)很高的抗體水平(1:160 ~1:2560) ,二次免疫可以出現(xiàn)再次反應(yīng)(1:1280 ~1:5120) ,而涓滴免疫血清抗體效價很低(1:80) ,試驗對照組(即藥物預(yù)防對照和紅對照組)只有極弱陽性反應(yīng)(1:10 ~1:20) ,不免疫不攻擊組呈陰性。試驗表明,酶聯(lián)免疫吸附試驗方法操作簡便,靈敏度高,所需抗原量少,適合于雞球蟲血清抗體水平的檢測。
陳明勇等(1990) 研究了分別使用一次、二次和涓滴免疫方法對柔嫩艾美耳球蟲卵囊活苗免疫白來航雛雞的保護(hù)性,以兩種抗球蟲藥作為對照,對死亡率、病變、增重、飼料報酬、卵囊排出量、免疫器官重量及白細(xì)胞數(shù)等指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測。結(jié)果表明涓滴免疫和一次免疫獲得了完全的保護(hù)性,二者的免疫保護(hù)性效果幾乎一致,均好于一次免疫。一次免疫只能給予一定程度的保護(hù)。免疫劑量,免疫宿主日齡及免疫間隔時間等相關(guān)因素均對宿主免疫保護(hù)性呈現(xiàn)不同程度的影響。
各項監(jiān)測指標(biāo)比較,所有免疫組較感染對照組呈現(xiàn)顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.05 或0.01) ;涓滴免疫、—二次免疫及1250 、2500 、3750 、5000 個/ 只一次免疫劑量組多項指標(biāo)均優(yōu)于l.25 ×10 -4 克球多( Clopidol) 和莫能霉素藥物預(yù)防組,而100 、500 個/ 只一次免疫組的保護(hù)效果優(yōu)于克球多藥物預(yù)防組,接近于莫能霉素藥物預(yù)防組。
試驗證明,二次免疫和涓滴免疫方法一樣均能刺激機體產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答,對大劑量卵囊的攻擊產(chǎn)生完全的保護(hù)作用;對于一次免疫,只要取得合適的相關(guān)因素,還是可以給予相當(dāng)程度乃至完全的免疫保護(hù)。
段嘉樹等(1990) 采用一次多量卵曩(5000 個)或初生后1 周內(nèi)每日小量卵囊(總量為210 個)的所謂涓滴方法對1 日齡或7 日齡雛雞進(jìn)行免疫。14 日齡以10 萬個柔嫩艾美耳球蟲卵囊(毒株)攻擊,然后根據(jù)增重與盲腸病變判斷免疫效果。
試驗結(jié)果表明:1 日齡和7 日齡一次毒株卵囊免疫組產(chǎn)生有效的保護(hù)作用;1 日齡一次致弱株免疫組和毒株涓滴免疫組可產(chǎn)生部分保護(hù)作用。7 日齡一次致弱株免疫組和致弱株涓滴免疫組未產(chǎn)生保護(hù)作用。
林孟初等(1986) 報道15 日齡雛雞以11500 個柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊感染后,不論是自然康復(fù)的或以強效氨丙啉藥飼康復(fù)的鴉,于35 日齡時對372000 個同種卵囊的再感染均有良好的保護(hù)力。藥飼康復(fù)雞的增重率略低于自然康復(fù)雞,而排血糞堆數(shù)和排卵囊數(shù)則略高,但兩組間差異不顯著。
黃希寶等(1990) 報道了對柔嫩艾美耳球蟲幾個不同發(fā)育階段的抗原性分析及球蟲接種免疫反應(yīng)比較。作者通過SDS-PAGE 分析比較了柔嫩艾美耳球蟲生活史中成熟卵囊、未成熟卵囊和裂殖子的可溶性抗原的抗原圖譜,進(jìn)而作硝酸纖維素膜轉(zhuǎn)移電泳鑒定其免疫原性。同時用Dot-ELISA 方法檢測了3 種可溶性抗原的存在并對雞球蟲的免疫抗體進(jìn)行了研究。從電泳圖譜和分子量對數(shù)及遷移率圖看出,其中有12 條蛋白帶為共同抗原,但未成熟卵囊的蛋白帶最多,至少有20 條。硝酸纖維素膜轉(zhuǎn)移后,檢測到蛋白帶中一條分子量為42000D 的有效抗原,這是一條主帶,并且是共同抗原條帶,經(jīng)Dot-ELISA 檢測3 種可溶性抗原均具有與雞抗球蟲抗體反應(yīng)的抗原存在,其抗原性強弱的順序是: 成熟卵囊>裂殖子>未成熟卵囊。用ELISA 方法對雞球蟲免疫抗體的研究證實:(1) 在一定范圍內(nèi)的感染強度,對雞死亡率有明顯影響,而對抗體散價消長無明顯差異。(2) 在最初1 、2 周感染后可引起抗體效價急劇上升,到4 周后達(dá)高峰,以后即使用高劑量同種球蟲卵囊攻擊,抗體效價也趨于穩(wěn)定,有時略有下降,但都已具備對再感染的高度保護(hù)力。(3) 重鉻酸鉀保存卵囊的理想時間是不超過3 個月,但其抗原性在一年內(nèi)不受影響。
谷胱甘肽(Glutaihion ,GSH) ,它廣泛存在于生物細(xì)胞內(nèi),是由γ- 谷氨酸、半胱氨酸和甘氨組成的三肽分子。近年來國外學(xué)者應(yīng)用選擇性升高或降低體內(nèi)谷胱甘肽水平的方法,對GSH 的功能有了進(jìn)一步的認(rèn)識,除傳統(tǒng)所認(rèn)為的抗氧化作用外,GSH 還具有抗毒、抗痛、抗衰老、抗癌作用,參與DNA 的合成,影響酶的活性,在提高細(xì)胞防衛(wèi)功能方面,其作用更為明顯。正由于GSH 的功能廣泛多樣,近年來引起各國學(xué)者極大興趣。金衛(wèi)東等(1990) 進(jìn)行了谷胱甘肽水平與雞球蟲免疫的相關(guān)性研究。試驗用28 ~48 日齡,50 ~70 日齡尼克公雛,共140 只,隨機分組,給予不同的處理。分別用馬拉酸二乙酯(Dithylmaleale ,DEM) 及Buthionine Sufoximine(BSO) 來選擇性降低血漿中谷胱甘肽水平,用蛋氨酸添加劑維持谷胱甘肽水平。對比了試驗組和對照組因GSH 水平的不同,在感染雞球蟲后,對死亡率、增重效率、細(xì)胞免疫、體液免疫、抗球蟲藥效等方面產(chǎn)生的影響。采用酶催化法監(jiān)測血漿中谷胱甘肽的水平,應(yīng)用火箭免疫電泳技術(shù),ANAE 染色法檢測抗體IgG 水平和T 細(xì)胞百分率的變化。試驗結(jié)果表明:1. 本試驗對細(xì)胞免疫和體液免疫進(jìn)行了檢測,對雞球蟲感染的全過程進(jìn)行了分析,認(rèn)為IgG 抗體與球蟲免疫關(guān)系不大,而細(xì)胞免疫在抗雞球蟲感染中起主導(dǎo)作用。2. 雞感染球蟲時,谷胱甘肽水平的降低,會減弱細(xì)胞免疫的效果,二者呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r=0.93 左右,而且呈直線回歸,說明谷胱甘肽能提高機體的細(xì)胞免疫力,抵抗球蟲感染。3. 球蟲感染的最初4 天,谷胱甘肽消耗最多,此期是影響病情發(fā)展的敏感階段,也是決定免疫保護(hù)作用強弱的關(guān)鍵階段,因此,在球蟲感染之前預(yù)防用藥方能起到更好的保護(hù)作用。4. 含硫氨基酸,在機體感染球蟲時,能轉(zhuǎn)化為半胱氨酸來維持GSH 的正常水平,它們在減少死亡和促進(jìn)增重兩方面均有較好的效果,因此,在球蟲易感染期應(yīng)增加飼料中含硫氨基酸數(shù)量,蛋氨酸添加劑效果較好。5.GSH 能影響呋哺唑酮藥物的抗球蟲作用。GSH 在正常水平時,呋喃唑酮才有較好的抗球蟲效果。
黃兵等(1994) 進(jìn)行柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲和變位艾美耳球蟲交叉免疫試驗。每個蟲種設(shè)3 個免疫組和1 個不免疫組,各蟲種免疫劑量均為1 萬個。28 日齡進(jìn)行攻擊,每個蟲種的3 個免疫組各攻擊1 個蟲種,3 個不免疫組也各攻擊1 個蟲種,作為免疫攻擊組的對照。柔嫩艾美耳球蟲和毒害艾美耳球蟲的攻擊劑量為1000 個,變位艾美耳球蟲為1 萬個。攻擊后第4 天起,每日收集各組糞便,用McMaster's 計數(shù)法計算每克糞便卵囊數(shù)和每日每只雞排卵囊總量,至攻擊后第11 天結(jié)束試驗,以卵囊相對減少率(保護(hù)率)作為試驗指標(biāo)。結(jié)果顯示: 柔嫩艾美耳球蟲免疫組抗同種攻擊的保護(hù)率為92.25% ,抗毒害艾美耳球蟲攻擊的保護(hù)率為30.24% ,與變位艾美耳球蟲攻擊不存在交叉保護(hù)。毒害艾差耳球蟲免疫組抗同種攻擊的保護(hù)率為86.16% ,與變位艾美耳球蟲和柔嫩艾美耳球蟲攻擊的交叉保護(hù)率分別為30.37% 和63.42% 。變位艾美耳球蟲免疫組對同種攻擊的保護(hù)率達(dá)99.98% ,對柔嫩艾美耳球蟲攻擊無交叉保護(hù),對毒害艾美耳球蟲攻擊的保護(hù)率為43.28% 。文中還討論了毒害艾美耳球蟲與柔嫩艾美耳球蟲和變位柔嫩艾美耳球蟲存在一些相互交叉保護(hù)的原因。
韓謙等(1994) 報道了北京農(nóng)業(yè)大學(xué)研制的球蟲活苗的實驗室免疫效果研究。試驗設(shè)4 組,即不免疫不給藥組,活苗免疫組(雞10 日齡時飲水免疫). 藥物對照組(飼料中添加5 ×10-6 馬杜拉霉素),以上3 組雞于52 日齡時,用柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲和堆型艾美耳球蟲,按每只20 萬的劑量攻擊,另設(shè)一對照組(飼料中添加5 ×10-6 馬杜拉霉素,不攻擊),攻擊后第8 天剖殺全部試驗雞只,計算各組抗球蟲指數(shù),判定免疫效果。試驗結(jié)果表明: 球蟲活苗免疫組的雞只可完全抵抗20 萬個上進(jìn)4 種球蟲混合卵囊的攻擊,保護(hù)率為100% ,未出現(xiàn)臨診癥狀,腸道病變值低于1 分,增重率與藥物對照組和不免疫不給藥組無明顯差異,抗球蟲指數(shù)達(dá)186 。本試驗還對墊料中球蟲卵囊數(shù)量進(jìn)行了監(jiān)測,活苗免疫組在免疫后第2 周達(dá)到高峰,每克糞便中卵囊數(shù)為20000 個,第3 周降至5000 ,以后保持平穩(wěn)下降。試驗證明,北京農(nóng)業(yè)大學(xué)研制的球蟲活蟲苗接種是成功的,使用是安全的,可以進(jìn)行田間擴大試驗。
孫維東等(1992) 介紹了吉林省獸醫(yī)研究所從國外引進(jìn)多種球蟲混合蟲苗技術(shù),試制了一批弱毒蟲苗,經(jīng)實驗室初步觀察,效果良好。該弱毒蟲苗含7 種雞球蟲卵囊,定量裝入一個特制顆粒中,混入飼料內(nèi)投給雛雞,保護(hù)率達(dá)85% ~100% 。輕度污染的雞場應(yīng)用,劑量為每日每只雞l 粒,連喂7 天,可控制球蟲病的發(fā)生;嚴(yán)重污染的雞場應(yīng)用,劑量為每日每只雞1 粒,連續(xù)投料2 周,預(yù)防效果可達(dá)100% 。該蟲苗于4 ℃環(huán)境中可保持半年。
陳金偉等(1992) 報道了雞柔嫩艾美耳球蟲雞胚致弱蟲苗飲水免疫、灌服免疫和拌料免疫方法的比較試驗。試驗結(jié)果表明,球蟲蟲苗飲水免疫方法免疫預(yù)防球蟲病效果好,使用方便,省時省力,適用于各養(yǎng)雞場。
楊振中等(1985) 報道了自上海市某雞場分離到的柔嫩艾美耳球蟲株,經(jīng)雞胚傳代培育,然后對培育株進(jìn)行了安全性和免疫原性測定以及野外免疫試驗。安全性測定用雞胚傳代到74 代和77 代的蟲株,免疫原性測定用的蟲株是84 ~100 代的。試驗結(jié)果:1. 雛雞安全性測定除74 代有1 只雛雞(1/20) 由球蟲引起死亡外,其余均無臨診血便和盲腸病變,盲腸內(nèi)容物進(jìn)行球蟲卵囊檢查,其指數(shù)平均都在7.5 左右,而強毒對照組的球蟲病死亡數(shù)為2/10 ,臨診上都有大量血便,剖檢見盲腸腫大有血芯或血便,卵囊指數(shù)都高達(dá)16 ,由此可見74 代和77 代基本是安全的。2.84 代蟲株一次免疫接種卵囊數(shù)量為4.5 萬后,以強毒株卵囊攻擊后雞只未出現(xiàn)死亡,血便記分為0 ,盲腸病變記分為0.2 ,平均卵囊數(shù)為3.5 ;而強毒株死亡了10% ,血便記分為3 ,盲腸病變記分為3.5 ,平均卵囊教為14.3 。作者在另一試驗中,測定了84 代蟲株用3 次免疫(卵囊數(shù)量為1500/ 次)后。強毒株(4.5 萬的數(shù)量)攻擊,結(jié)果死亡1/20 ,血便記分為0 ,盲腸病變記分為0.1 ,平均卵囊數(shù)為5.0 。為了世一步確證蟲株的免疫性,作者對雞胚傳代傳了86 ~100 代的蟲株各批次蟲苗進(jìn)行了重復(fù)試驗。免疫雞于免疫結(jié)束后的l4 天以強毒株(4.5 萬)攻擊,分7 、14 、21 天3 次剖撿,均取得很好的結(jié)果。3. 蟲苗在野外現(xiàn)場試用,雛雞從7 日齡(隔天1 次,3 次免疫)開始免疫,直到肉雞上市。保護(hù)率高達(dá)99% ,從糞便抽樣檢查球蟲卵囊的結(jié)果來看,免疫效果顯著。
1986 年楊振中等對雞柔嫩艾美耳球蟲(上海株)致弱苗的保存期和免疫期進(jìn)行了試驗。保存期測試選用了85 、86 、89 、95 代次蟲苗,在4 ℃普通冰箱內(nèi)分別保存36 ~360 天,分別以l500 劑量對雛雞隔日1 次,于11 日齡內(nèi)3 次口服免疫,進(jìn)行5 批測試,免疫后經(jīng)14 天再行強毒卵囊4.5 萬攻擊(毒害等5 種小腸球蟲9.5 萬攻擊),結(jié)果未發(fā)生死亡,亦無病變,具良好的免疫力。免疫期測試,選用91 代、95 代次蟲苗,1000 或1500 致弱卵囊,分6 批對70 只雛雞進(jìn)行免疫接種,免疫31 、75 、105 、133 、150 、215 天后,每雞以5 萬~10 萬強毒卵囊一次攻擊,除第一組非球蟲死亡1 只外,其余各組都存活,臨診無血便,剖檢無病變,盲腸內(nèi)容物也未查到球蟲卵囊。根據(jù)測試結(jié)果,均具有堅強的保護(hù)力。
作者指出,通過雞胚培養(yǎng)傳代致弱的柔嫩艾美耳球蟲弱毒蟲苗,保存在4 ℃普通冰箱內(nèi)1 年,仍具有堅強的免疫力。經(jīng)6 批免疫期測試,免疫有效時間可達(dá)7 個月。因此,該蟲苗適用于肉雞和產(chǎn)蛋雞的免疫預(yù)防。
楊振中等(1987) 對柔嫩艾美珥球蟲(上海株)致弱蟲苗的最小免疫量和免疫力產(chǎn)生期進(jìn)行了測定。測定結(jié)果表明: 柔嫩艾美耳球蟲(上海株)弱毒蟲苗最小的免疫量為800 個卵囊,以70000 個強毒卵囊攻擊沒有出現(xiàn)病雞。蟲苗劑量加大到5000 個也證明是安全的。不經(jīng)免疫的對照組,以相同劑量的強毒卵囊攻擊時,雛雞全部發(fā)病。因此,選用1000 個致弱卵囊為免疫劑量是適當(dāng)?shù)?。試驗結(jié)果證明,雛雞免疫后第7 天已產(chǎn)生免疫力,第14 天,免疫雞經(jīng)5 萬個強毒攻擊,除1 只雞盲腸有輕微病變外,其余免疫雞的盲腸均正常。免疫后第21 天和28 天,用同樣劑量強毒卵囊攻擊,免疫雞都能得到保護(hù)。由此也可說明,經(jīng)致弱后的柔嫩艾美耳球蟲(上海株)的免疫力是穩(wěn)定的。
彭德旺、楊廷桂(1990) 報道了3 群自然暴發(fā)雞球蟲病的850 其雞用速丹3 ×10-6 的濃度混飼進(jìn)行現(xiàn)場治療試驗。以臨診癥狀、死亡情況、血糞堆數(shù)和卵囊數(shù)的變化判定療效。試驗結(jié)果,投藥后第2 天血糞和卵囊明顯減少;第3 天血糞消失,雞群狀況好轉(zhuǎn),食欲開始恢復(fù),第4 天糞中仍有少量卵囊。3 群雞除死亡8 只外,余均得到保護(hù)。治愈率為89.65% ~100% 。
赫怡、張學(xué)斌(1986) 應(yīng)用河北省畜牧獸醫(yī)研究所的雞胚傳代致弱的柔嫩艾美耳球蟲株( P158) 進(jìn)行了免疫試驗。供試驗1 日齡雛雞400 只,分成兩組,一為免疫組,另一為對照組。試驗雞飼于無球蟲污染的舍內(nèi)。免疫組雞于14 日齡每只飲水接種3000 個P158 卵囊。接種后l 周和3 周,每組隨機抽取l5 只雞剖檢,均未發(fā)現(xiàn)盲腸球蟲病病變。又從各組捕取12 只雞,分別飼養(yǎng)于單籠中,每只雞以20 萬個柔嫩艾美耳球蟲強毒株卵囊進(jìn)行攻擊,于攻擊后1 周內(nèi)觀察發(fā)病和死亡情況,至攻擊后第7 天將未死亡的試驗雞進(jìn)行剖檢,按盲腸病變程度記分,免疫組與對照組比較。結(jié)果免疫組死亡率為8.33% ,病變記分為22 分;對照組死亡率為41.67% ,病變記分36 分。接種后3 周抽樣攻擊,免疫組死亡率為0 ,病變記分為27 ;對照組死亡率為8 ,33% ,病變記分為29 分。接種后5 周進(jìn)行攻擊,免疫組和對照組均無死亡,病變記分免疫組為10 分,對照組為l5 分。
沈瑞洲等(1988) 報道了3 種復(fù)方藥物對雛雞柔嫩艾美耳球蟲病的療效。供試雛雞每只人工接種柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊5 萬個。3 種復(fù)方藥物為:1. 氨丙啉+ 磺胺喹 惡啉(各 1.8 ×10-4 ),飲服,連用7 天;2. 三甲氧芐胺嘧啶+ 磺胺喹 惡啉 (1:3.25) 2.5 ×10-4 ,混飼,連用7 天;3. 乙胺嘧啶十磺胺喹 惡啉( 1:5 )2 ×10-4 ,混飼,連用7 天。以抗球蟲指數(shù)的高低作為判定療效標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果表明3 種復(fù)方藥物均可完全控制因球蟲病引起的死亡。增重方面,前兩個組與不感染不給藥組相比差異不顯著,后一組療教雖高,但對增重有明顯的抑制作用。
林昆華等(1991) 進(jìn)行了后備種雞球蟲病的預(yù)防試驗。供試雞共4 組,每組300 只雞。第1 組l 從4 ~20 周齡,連續(xù)投服1.25 ×10-4 氨丙啉;第2 組雞4 ~12 周齡時,連續(xù)投服1. 25 ×10-4 氨丙啉,13 ~14 周齡,氨丙啉劑量減為8 ×10-5 ,15 ~16 周齡藥量減至6 ×10-5 ,17 周齡停藥;第3 組雞4 ~10 周齡,連續(xù)投服1.25 ×10-4 尼卡巴嗪,11 ~20 周齡改投1.25 ×10 -4 克球粉;第4 組雞不給藥。以球蟲病控制情況和體重為療效判定標(biāo)準(zhǔn)。各試驗組,20 周齡試驗結(jié)束后,各隨機抽取5 只,分別飼于籠內(nèi),隔3 日后,每只雞人工感染7 萬個柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊。觀察停藥后有無抗球蟲的免疫力。試驗結(jié)果表明:1. 雞從4 ~20 周齡,連續(xù)或從4 ~12 周齡,13 ~14 周齡,15 ~16 周齡逐漸減量投服氨丙啉,均可有效地預(yù)防種雞群在育成期暴發(fā)球蟲病,且對雞不產(chǎn)生不良影響。停藥后,雞具有抗球蟲感染的免疫力。2. 尼卡巴嗪和克球粉“穿梭”用藥,有很好的抗球蟲感染的作用,可防止種雞群在育成期暴發(fā)球蟲病,對雞無不良影響。停藥后,雞具有抗球蟲攻擊的足夠強的免疫力。
劉群、韓謙(1994) 報道了自行研制的球蟲苗飲用佐劑的效果。在相同條件下,自制飲用佐劑對卵囊的漂浮效果相當(dāng)于甚至優(yōu)于美國產(chǎn)球蟲苗穩(wěn)定劑。在田間試驗時,將飲用佐劑用于5000 只種雞的球蟲苗的飲水免疫。免疫后2 周檢查雞舍各處糞便,結(jié)果發(fā)覡每克糞便的卵囊數(shù)均勻,所有雞在產(chǎn)蛋前均未發(fā)生球蟲病。
雞的其他致病力強的球蟲種類的研究,國內(nèi)也有一些報道,下面僅就收集到的作個介紹。
秦建華等(1992) 進(jìn)行了堆型艾美耳球蟲早熟減毒株的選育。作者用早熟選育方法對堆型艾美耳球蟲保定株進(jìn)行了12 代早熟選育,獲得了潛隱期為74h 和62h 兩個早熟株。兩個早熟株不經(jīng)選擇傳遞2 代,仍保持了早熟的特性。早熟株較其親代株繁殖能力下降,致病力降低,但仍然保持了良好的免疫原性。早熟選育改變了蟲體的內(nèi)生性發(fā)育過程,引起了潛隱期的縮短。潛隱期為74h 的蟲株的裂殖生殖為3 代,62h 的蟲株的裂殖生殖為2 代。
熊大仕、林昆華(1965) 報道了堆型艾美耳球蟲和早熟艾美耳球蟲孢子形成過程朗初步觀察。初排出的卵囊,原生質(zhì)團內(nèi)的顆粒是較分散的,培養(yǎng)一定時間后,原生質(zhì)團內(nèi)的顆粒就向中間聚縮,細(xì)胞核開始分裂。細(xì)胞核分裂的同時,原生質(zhì)團的膜發(fā)生橫向和縱向的內(nèi)陷,使原生質(zhì)團出現(xiàn)4 個洼陷。當(dāng)固定一個觀察面觀察時,是橫向比縱向的內(nèi)陷的速度更快。當(dāng)橫向洼陷形成裂縫而到達(dá)原生質(zhì)團的中央部時,則使原生質(zhì)團呈現(xiàn)“四葉狀”. 即4 個小團塊樣。在此基礎(chǔ)上原生質(zhì)團進(jìn)一步分裂成4 個圓形細(xì)胞。圓形細(xì)胞繼而變成橢圓,最后形成孢子囊。與此同時,原生質(zhì)團內(nèi)的顆粒也發(fā)生變化,粗顆粒逐漸融合成更大的顆粒;細(xì)顆粒逐漸減少,以致完全消失。每個孢子囊的尖端頂部均出現(xiàn)一無原生質(zhì)顆粒的空白明亮部分,即為斯氏體(Stiedai body )。4 個孢子囊之間未見有殘體存在。根據(jù)對這兩種球蟲孢子形成的坫果來分析,作者認(rèn)為可能雞的艾美耳屬的各種球蟲孢子形成的過程是相似的。但由于各種球蟲孢子發(fā)育完成所需的時間長短不一,因此在一定時間內(nèi)的發(fā)育進(jìn)度存在著差異。
汪明等(1994) 測定了來自雞場的堆型艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲和巨型艾美耳球蟲的毒力和這3 種混合球蟲的毒力。結(jié)果表明: 接種30 萬、60 萬、90 萬、150 萬堆型艾美耳球蟲卵囊給14 日齡AA 肉雞雛未引起死亡,小腸病變記分分別為1.4 、1.8 、2.3 和2.9 ,增重明顯下降;接種5 萬、10 萬、20 萬、40 萬毒害艾美耳球蟲卵囊給l4 日齡AA 肉雞雛,致死率分別為0 、20% 、50% 和60% ;接種30 萬、60 萬、90 萬、200 萬巨型艾美耳球蟲卵囊給14 日齡AA 肉雞雛,均未引起死亡,小腸病變記分分別為1.5 、2.2 、2.8 和3.2 ,增重明顯下降。混合種卵囊分別按10 萬、20 萬、40 萬、80 萬個接種14 日齡肉雞,致死率分別為0 、10% 、30% 和30% ,小腸和盲腸病變綜合記分分別為1.5 、2.4 、2.9 和3.3 。
黃兵等(1994) 從現(xiàn)場采集分離獲得的毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、變位艾美耳球蟲和堆型艾美耳球蟲純種,采用人工感染方法,分別以每只雞1 萬、5 萬、10 萬和20 萬個孢子化卵囊,感染10 ~13 日齡伊莎公雛,觀察各蟲種不同劑量對雞致病情況。人工感染后7 天結(jié)束試驗,以平均增重、死亡率和腸道病變記分作為試驗指標(biāo)。結(jié)果顯示毒害艾美耳球蟲毒力最強,感染10 萬死亡率為41.67 % ,感染20 萬死亡率為50% 。感染l 萬個毒害艾美耳球蟲的雞平均增重極明顯低于不感染對照組。毒害艾美耳球蟲4 個感染劑量組的腸道病變記分為1.33 ~3.83 。巨型艾美耳球蟲致病力次之,感染20 萬組的死亡率為16.67% ,4 個感染劑量組的增重與不感染對照組的差異為感染1 萬組顯著,5 萬~20 萬組極顯著,其病變記分為1.33 ~3.08 。堆型艾美耳球蟲和變位艾美耳球蟲高劑量感染引起死亡的很少見,但增重與不感染對照組相比下降明顯,5 萬組減少顯著,10 萬~20 萬組則極顯著。這兩個蟲種各感染組的腸道病變記分1.25 ~3.08 和0.75 ~2.07 。
汪明等(1992) 進(jìn)行了雞巨型艾美耳球蟲內(nèi)生發(fā)育的研究。作者應(yīng)用單卵囊接種技術(shù)分離出純種巨型艾美耳球蟲,繼代收集卵囊后,按30 萬~60 萬個卵囊/ 只劑量接種雛雞24 只,8 只不感染作對照。感染后1 ~8 天定時剖檢感染雞和對照雞,取腸道組織,10% 福爾馬林固定,石蠟包埋,制戚切片,切片以HE 染色,光鏡下觀察發(fā)育史。結(jié)果發(fā)現(xiàn)巨型艾美耳球蟲有2 代裂殖生殖,多出現(xiàn)在小腸絨毛上皮。第一代裂殖體出現(xiàn)在感染后的第2 ~3 天,第二代裂殖體出現(xiàn)在感染后的第3 ~5 天。裂殖體體積較小,大小約8.8um ×6.4um 。配子體出現(xiàn)在感染后的第5 ~8 天,主要發(fā)生于小腸的固有膜內(nèi),少數(shù)在腸腺細(xì)胞內(nèi)。大配子體細(xì)胞內(nèi)含有明顯的成囊體,小配子體含有許多紫色的小核。在感染后6 ~8 天,觀察到合子和卵囊。
余銳萍等(1992) 觀察了人工感染純種巨型艾美耳球蟲后不同時間雞的腸道組織病理學(xué)變化。結(jié)果表明: 巨型艾差耳球蟲主要寄生于雞的十二指腸及空腸中。子孢子主要在腸粘膜上皮細(xì)胞的頂端發(fā)育,引起粘膜上皮脫落。在裂殖生殖階段,裂殖子不僅寄生于上皮細(xì)胞內(nèi),還可穿過粘膜上皮進(jìn)入固有膜和深部的腸腺上皮細(xì)胞內(nèi),此時可見固有膜內(nèi)小血管損傷,呈點狀出血,粘膜上皮大量脫落伴隨粘膜上皮顯著增生及單核細(xì)胞浸潤。裂殖生殖后蟲體繼續(xù)在上述組織細(xì)胞中發(fā)育成配子體及配子。此階段可見腸黏膜絨毛頂部變短寬,固有膜內(nèi)淋巴管高度擴張,出現(xiàn)明顯的炎性水腫?;啬c粘膜內(nèi)未見蟲體寄生。盲腸扁桃體內(nèi)淋巴濾泡生發(fā)中心消失,淋巴細(xì)胞排空,并見大量異嗜細(xì)胞浸潤。
徐鑌蕊等(1994) 利用組織化學(xué)技術(shù)對巨型艾美耳球蟲內(nèi)生發(fā)育階段細(xì)胞內(nèi)的多糖、核酸、堿性核蛋白、非特異性酯酶、堿性磷酸酶和酸性磷酸酶分布定位進(jìn)行了研究,結(jié)果如表4-2 。
表4-2
王江青等(1991) 進(jìn)行了巨型艾美耳球蟲早熟減毒株的選育試駐。試驗結(jié)果表明巨型艾美耳球蟲(長春株)經(jīng)20 代的早熟選育,其潛隱期由132h 縮短到116h ,成為早熟株。該早熟株不經(jīng)選擇傳遞2 代,仍保持了早熟的特性。早熟株比其親代株的繁殖力下降74% ,致病力降低,但仍保持其免疫原性。
趙樹英等(1990) 報道了殺球靈(Diclazuril) 等5 種藥物對堆型艾美耳球蟲的抗球蟲效力。供試雞每只人工感染堆型艾美耳球蟲孢子化卵囊37.6 萬個。以抗球蟲指數(shù)為藥效判定標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果表明:l ×10-6 的殺球靈效力最強,抗球蟲指數(shù)是203 ,腸道未發(fā)現(xiàn)病變,糞中未檢出卵囊。馬杜拉霉素、那拉霉素、拉薩洛菌素的抗球蟲指數(shù)分別為290.2 、193.5 和190.5 。尼卡巴嗪效力較差,抗球蟲指數(shù)僅達(dá)136.2 。
段嘉樹等(1990) 對殺球靈和4 種聚醚類抗球蟲藥物馬杜拉霉素、那拉霉素、拉薩洛菌素和莫能霉素的抗巨型艾美耳球蟲效力進(jìn)行了籠飼試驗。在重度感染情況下,5 ×10-6 馬杜拉霉素,8 ×10-5 那拉菌素,1 ×10-4 拉薩洛菌素和l ×10-4 莫能霉素均可防止雞只死亡,改善增重,減弱腸道病變和減少卵囊數(shù)量。1 ×10-6 殺球靈組出現(xiàn)10% 死亡,但從增重和病變來看,雞只仍然受到保護(hù),糞便中卵囊少。對腸粘膜涂片的觀察顯示殺球靈明顯抑制了巨型艾美耳球蟲的有性生殖,即配子生殖階段的發(fā)育。
從抗球蟲指數(shù)來看,以上5 種藥對巨型艾美耳球蟲的效力依次為: 拉薩洛菌素,馬杜拉霉素,殺球靈,那拉霉素和莫能霉素。
吳薛忠等(1994) 報道了海南霉素(商品名為雞球素)對毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲和變位艾美耳球蟲的籠飼試驗。海南霉素用5 ×10-6 和7.5 ×10-6 ,以鹽霉素6 ×10-5 為藥物對照組。人工感染各蟲種卵囊的劑量為: 毒害艾美耳球蟲5 萬個/ 只,巨型艾美耳球蟲10 萬個/ 只,堆型艾美耳球蟲15 萬個/ 只,變位艾美耳球蟲12 萬個/ 只。人工感染卵囊前1 天開始投服藥物,感染后7 ~8 天結(jié)束試驗。藥效判定以抗球蟲指數(shù)(ACI) 為標(biāo)準(zhǔn)。試驗結(jié)果: 對毒害艾美耳球蟲的ACI ,海南霉素5 ×10-6 為186.1 ,7.5 ×10-6 為l85.3 ,鹽霉素為155.1 ;對巨型艾美耳球蟲的ACI ,海南霉素5 ×10-6 為182.2 ,7.5 ×10-6 的為180.8 ,鹽霉素195.4 ;對堆型艾美耳球蟲的ACI ,海南霉素5 ×10-6 為193.2 ,7.5 ×10-6 的為185 ,鹽霉素為189.8 ;對變位艾美耳球蟲的ACI ,海南霉素5 ×10-6 為196.8 ,7.5 ×10-6 的189.6 ,鹽霉素205.2 ,整個結(jié)果顯示海南霉素對上述雞球蟲均有明顯的抗球蟲效力。
謝明權(quán)等(1993) 應(yīng)用人工感染后,定期剖殺試驗雞,取寄生部位腸粘膜直接涂片,在顯微鏡下觀察裂殖體成熟程度及密度,確定最適收集時間的方法,對毒害艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲和布氏艾美耳球蟲裂殖子進(jìn)行純化試驗。選取材料的位置,毒害艾美耳球蟲在小腸中段,堆型艾美耳球蟲在小腸前段,布氏艾美耳球蟲在小腸后段。感染球蟲的腸道用剪刀縱向剪開,棄去腸內(nèi)容物,用PBS (pH7.2) 洗2 ~3 次后,以刀片輕刮腸粘膜,置含0.25% 胰酶加0.75% 膽酸鈉消化液中,40 ℃消化30 ~40min 。當(dāng)大多數(shù)裂殖體破裂后即停止消化。消化渣用Hank’s 平衡鹽溶髓稀釋,200rpm 離心淘洗2 ~3 次,每次10min. 最后用紅細(xì)胞計數(shù)板計算收獲的裂殖子數(shù)量。結(jié)果是堆型艾美耳球蟲裂殖子最適收獲時間是人工感染后80 ~84h ,毒害艾美耳球蟲是在人工感染后120h ,布氏艾美耳球蟲是95h 。作者提出裂殖子的收獲量與人工感染的卵囊數(shù)量成正相關(guān)。供感染的雞日齡最好是3 周齡的。感染卵囊數(shù)量,毒害艾美耳球蟲40 萬/ 只,堆型艾美耳球蟲是60 萬/ 只,布氏艾美耳球蟲是80 萬/ 只,便能獲得較理想的感染腸道,供分離裂殖子用。
國內(nèi)有幾篇關(guān)于藥物殺滅雞球蟲卵囊的報告。曾衡秀等(1988) 報道了國產(chǎn)消毒劑- “速爾”抑殺微生物和球蟲卵囊的試驗。報告中提到用國產(chǎn)速爾1% 的濃度,可抑殺97.5% 的球蟲卵囊,用2% 的濃度則可100% 抑殺球蟲卵囊,使之不能進(jìn)行孢子化,試驗結(jié)果與國外同類產(chǎn)品相比,其效力相當(dāng)。
劉毅等(1990) 也對國產(chǎn)消毒劑- “速爾1 號”進(jìn)行抑殺雞球蟲卵囊的試驗。試驗與農(nóng)樂、日本產(chǎn)速爾、新浩爾滅、燒堿等(推薦濃度)作了對比。結(jié)果證明,遞爾1 號在2.5% 、3% 的濃度時能抑殺試管內(nèi)的所有卵囊,0.3% 以上的濃度時能使90% 的試管內(nèi)卵囊滅活,2.5% 的濃度時能殺滅試驗環(huán)境及雞場現(xiàn)場中的球蟲卵囊。在60 天的試驗期內(nèi),試驗組雞無球蟲感染。速爾l 號的抑殺雞球蟲卵囊的效果與農(nóng)樂和日本產(chǎn)速爾相似。推薦濃度的新潔爾滅及燒堿對雞球蟲卵囊無作用。
汪明等(1994) 用英國出品的體外殺滅球蟲卵囊的消毒藥劑OO-cide( 殺卵靈) 進(jìn)行了殺滅雞柔嫩艾美耳球蟲卵囊的試驗。試驗表明: 經(jīng)殺卵靈處理過的未孢子化卵囊的孢子化率為2% ,對照卵囊的孢子化率為80% ,孢子化減少率為97.6% ;用殺卵靈處理過的孢子化卵囊,按10 萬/ 只劑量接種雛雞,第8 天剖殺試驗雞,計算出抗球蟲指數(shù)為169 ,試驗雞無臨診癥狀,盲腸病變記分不超過1 分,對照組ACI 為121 ,臨診癥狀明顯。
(林昆華)
作者: lzm_001 時間: 2013-12-2 08:20
球蟲養(yǎng)雞很普遍。如果嚴(yán)重的,死雞也不少的。一般常見的就是盲腸球蟲和小腸球蟲。
作者: 高永長 時間: 2013-12-2 11:33
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