畜牧人

標(biāo)題: 蝦青素和雙乙酸鈉聯(lián)用對斷奶仔豬‑生產(chǎn)性能和抗氧化能力的影響 [打印本頁]

作者: 綠色華瑞 時(shí)間: 2014-11-5 14:09
標(biāo)題: 蝦青素和雙乙酸鈉聯(lián)用對斷奶仔豬‑生產(chǎn)性能和抗氧化能力的影響

蝦青素和雙乙酸鈉聯(lián)用對斷奶仔豬‑生產(chǎn)性能和抗氧化能力的影響

‑林建坤‑郭瑞萍‑

山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院畜牧系，濰坊‑261041‑

摘‑要‑試驗(yàn)旨在研究飼糧添加蝦青素和雙乙酸鈉的混合制劑對斷奶仔豬生長性能和抗氧化能力的影‑響。試驗(yàn)選取 48 頭 28 日齡的三元雜交斷奶仔豬，隨機(jī)分為 4 個(gè)組，每組 6 個(gè)重復(fù)，分別飼喂含 0 ( 對照‑組) 、1100 ( 低劑量組) 、2200 ( 中劑量組) 和 4400 ( 高劑量組) mg/kg 的蝦青素和雙乙酸鈉混合物的飼‑糧。結(jié)果表明: 與對照組相比，中劑量組和高劑量組仔豬平均日增質(zhì)量 ( ADG) 以及空腸黏膜總抗氧化能‑力 ( TAOC) 、過氧化氫酶 ( CAT) 活性顯著升高，而空腸黏膜 MDA 含量顯著降低 ( P ＜0. 05) ; 高劑量組仔‑豬平均日采食量 ( ADFI) 以及血清 ( TAOC) 、超氧化物歧化酶 ( SOD) 、谷胱甘肽過氧化物酶 ( GSH － px) 、‑CAT 活性而 F/G 和血清 MDA 含量顯著降低 ( P ＜0. 05) 。試驗(yàn)表明: 飼糧中添加蝦青素和雙乙酸鈉的混合制‑劑能提高仔豬的養(yǎng)分消化率和抗氧化能力，進(jìn)而提高仔豬的生產(chǎn)性能。

‑關(guān)鍵詞‑蝦青素; 雙乙酸鈉; 斷奶仔豬; 生長性能; 空腸; 抗氧化能力‑

中圖分類號: S 816. 7‑文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A‑文章編號: 1002 －2813 (2014) 13 －0028 －05‑

蝦青素為一種廣泛存在于多種生物中的類胡蘿‑卜素，其結(jié)構(gòu)中多個(gè)共軛雙鍵和羥基基團(tuán)，具有很‑強(qiáng)的還原性，因而蝦青素具有優(yōu)秀的抗氧化能力。‑畜牧業(yè)中蝦青素的應(yīng)用多集中在水產(chǎn)動物以及家禽‑的著色效果上，在抗氧化性能上的研究尚停留在體‑外細(xì)胞培養(yǎng)和小鼠試驗(yàn)上。此外，畜牧生產(chǎn)上飼糧‑的霉變情況十分普遍，而霉菌毒素能夠加重氧化應(yīng)‑激對斷奶仔豬的損傷，尤其表現(xiàn)在腸道方面的損‑傷。雙乙酸鈉是畜牧上常用的防腐防霉劑，其防霉‑防腐效果好，在動物體內(nèi)能完全代謝且代謝產(chǎn)物主‑要為二氧化碳和水，不會對動物以及畜產(chǎn)品安全造‑成威脅，因而在食品以及飼料行業(yè)應(yīng)用普遍。然而‑目前對于蝦青素和雙乙酸鈉在斷奶仔豬飼糧中的應(yīng)‑用研究還較少，且這 2 種物質(zhì)在斷奶仔豬飼糧中聯(lián)‑合應(yīng)用的抗氧化和促生長效果還有待動物試驗(yàn)驗(yàn)證。‑試驗(yàn)旨在研究斷奶仔豬飼料中蝦青素與雙乙酸‑鈉聯(lián)用對仔豬腸道氧化還原平衡狀態(tài)以及生長性能‑發(fā)揮的影響，為這 2 種添加劑在畜牧業(yè)中的聯(lián)合應(yīng)‑用提供理論依據(jù)，為研究新型混合飼料添加劑提供‑參考數(shù)據(jù)。

‑1‑材料與方法

‑1.1‑試劑材料‑蝦青素 (純度為 58. 6%) 為自行提取，雙乙‑酸鈉 (純度＞ 99%) 購自沈陽市圓融化工有限公‑司。以分析純氯化鈉配制滅菌生理鹽水 (0. 9%‑NaCl)，高溫高壓滅菌后備用。‑

1.2‑試驗(yàn)動物與分組‑試驗(yàn)選取48 頭28 日齡的初始體質(zhì)量為 (7.09 ±‑0. 69) kg 的三元雜交斷奶仔豬，隨機(jī)分配到 4 個(gè)處‑理組，每組 6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù) 2 頭豬。對照組飼‑喂基礎(chǔ)飼糧，其余 3 個(gè)組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添‑加了 1 100 (低劑量組)、2 200 (中劑量組) 和‑4 400 (高劑量組) mg/kg 的蝦青素和雙乙酸鈉混‑合物 (w∶w =1∶10) 的試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)期 28 d。

‑1.3‑飼糧配方及飼養(yǎng)管理‑飼糧為玉米－豆粕型粉料，基礎(chǔ)飼糧配方及營‑養(yǎng)水平參考 NＲC (2012) 5 － 10 kg 以及 10 － 20 kg‑體質(zhì)量階段的豬營養(yǎng)需要配制。基礎(chǔ)飼糧組成及營‑養(yǎng)水平見表 1。以圈為重復(fù)單位，每圈 4 頭仔豬。‑每日飼喂 4 次 (分別為上午 8: 00、上午 12: 00、‑下午 16: 00 和晚上 20: 00)，飼喂量為每次采食結(jié)‑束后料槽中略有剩余為度，自由飲水，其余日常管‑理均按常規(guī)進(jìn)行。

‑表 1‑基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平 (飼喂基礎(chǔ))‑

注: 維生素預(yù)混料為每千克飼糧提供: 維生素 A 8 500、維生素 D3‑2 000、維生素 K31. 3、維生素 B11. 5 、維生素 B25. 5、維生素 B120. 03、‑煙酸 16、葉酸 0. 7、D －泛酸 16 和生物素 0. 2 mg。微量元素預(yù)混料為每‑千克飼糧提供: Fe 115、Cu 150、Zn 115、Mn 55、Se 0. 3 和 I 0. 4 mg。‑

1.4‑樣品采集‑

1.4.1‑飼料樣品采集‑試驗(yàn)飼糧配制當(dāng)天、試驗(yàn)第 14 和 28 d 對各處‑理飼糧進(jìn)行采樣，3 次采樣混合均勻后以四分法進(jìn)‑行縮份之后－20 ℃保存待測。

‑1.4.2‑血清樣品采集‑試驗(yàn)第 0 和 28 d 上午 8: 00 對所有豬只進(jìn)行前‑腔靜脈采血 10 mL，緩慢引入真空玻璃離心管，室‑溫靜置 10 min 后 3 500 r/min 下離心 10 min，取上‑清液以 EP 管分裝后保存在－20 ℃冰箱中待測。

‑1.4.3‑糞樣采集‑在試驗(yàn)第 20 － 26 天以鹽酸不溶灰分為內(nèi)源指‑示劑進(jìn)行部分收糞，以圈為單位對 7 d 的糞便樣品‑進(jìn)行混合取樣 60 g 左右，所有糞樣按照每 100 g 糞‑樣加入 5 mL 硫酸的比例加入硫酸，再滴幾滴甲苯‑后充分混合均勻，在 65 ℃ 烘箱中烘干至恒重，粉‑碎后保存待測。

‑1.4.4‑空腸黏膜樣品采集‑試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，在各處理組中選取體質(zhì)量接近‑平均體質(zhì)量的豬各 6 頭進(jìn)行屠宰采樣，迅速剖開腹‑腔，分離腸道，截取空腸中段 10 cm 長度，縱向剖‑開后預(yù)冷生理鹽水沖洗內(nèi)容物，以干凈的載玻片固‑定方向輕輕刮取黏膜，裝入滅菌 EP 管后錫箔紙包‑裹，液氮速凍，－80 ℃保存待測。

‑1.5‑指標(biāo)測定

‑1.5.1‑生長性能指標(biāo)‑平均日采食量 (ADFI): 以圈為單位每日記錄‑豬只的采食量，ADFI = 每圈總采食量/每圈仔豬頭‑數(shù)/試驗(yàn)天數(shù);‑平均日增質(zhì)量 (ADG): ADG = 每圈總增質(zhì)量/‑每圈仔豬頭數(shù)/試驗(yàn)天數(shù);‑料重比 (F/G): 以 ADFI 與 ADG 的比值表示。

‑1.5.2‑腹瀉率和養(yǎng)分消化率‑以圈為單位每日記錄腹瀉情況，按照下列公式‑計(jì)算各處理仔豬腹瀉率:‑腹瀉率/% = 試驗(yàn)期腹瀉仔豬頭次/ (試驗(yàn)仔豬‑頭數(shù) × 試驗(yàn)天數(shù)) ×100‑測定飼料和糞樣中干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、能量、‑鈣、總磷以及鹽酸不溶灰分的含量，按照下列公式‑計(jì)算養(yǎng)分消化率:‑某養(yǎng)分消化率 (%)‑= 100 － (飼料中指示劑‑含量/糞中指示劑含量 × 糞中某養(yǎng)分含量/飼料中某‑養(yǎng)分含量) ×100‑

1.5.3‑血清指標(biāo)‑血清中總抗氧化能力 ( TAOC)，丙二醛‑(MDA) 含量以及超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘‑肽過氧化物酶 (GSH － px) 和過氧化氫酶 (CAT)‑活性均以分光光度比色發(fā)進(jìn)行測定，測定試劑盒購‑自南京建成生物工程研究所 (南京); 二胺氧化酶‑活性以 ELISA 試劑盒 (GBD 公司，美國) 進(jìn)行測‑定。以上所有指標(biāo)的測定步驟參見試劑盒說明書。

‑1.5.4‑空腸黏膜指標(biāo)‑制備空腸黏膜勻漿上清液，取出樣品在冰面上‑解凍后按照試劑盒說明書步驟制備 10% 的空腸黏膜‑勻漿，4 ℃ 2 000 r/min 離心 10 min 取上清液分裝‑待測。測定指標(biāo)包括: 組織總蛋白含量，T － AOC，‑MDA 含量，SOD、GSH － Px、CAT 活性。以上指標(biāo)‑采用南京建成生物工程研究所的試劑盒進(jìn)行測定。

‑1.6‑數(shù)據(jù)處理與分析‑以 SPSS 17. 0 中的卡方檢驗(yàn)對腹瀉率進(jìn)行分析，‑以 ANOVA 程序?qū)ζ溆嘀笜?biāo)進(jìn)行方差分析，并以‑Duncan 氏法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差‑

‑表示，以 P ＜0. 05 為差異顯著標(biāo)準(zhǔn)。

‑2‑結(jié)果與分析‑2.1‑蝦青素聯(lián)合雙乙酸鈉對斷奶仔豬生長性能的‑影響

‑從表 2 可見: 飼糧添加 2200 或 4400 mg/kg 蝦‑青素和雙乙酸鈉混合制劑顯著提高斷奶仔豬的末質(zhì)‑量、試驗(yàn)期增質(zhì)量和 ADG (P ＜ 0. 05)。同時(shí)，高‑劑量 (4400 mg/kg) 蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑還‑顯著提高斷奶仔豬 ADFI (P ＜0. 05)，顯著降低 F/‑G (P ＜0. 05)。

‑2.2‑蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對斷奶仔豬血清‑氧化還原狀態(tài)的影響‑從表3 可見: 與對照組相比，高劑量組血清TAOC、‑SOD、GSH － Px 和 CAT 活性顯著增加 (P ＜ 0.05)，‑MDA 含量顯著降低 (P ＜0.05)。中、低劑量組上述指‑標(biāo)也具有相同趨勢，但差異不顯著 (P ＞0.05)。

‑2.3‑蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對斷奶仔豬腹瀉‑率和養(yǎng)分消化率的影響‑從表 4 可見: 與對照組相比，中劑量組和高劑‑量組斷奶仔豬腹瀉率顯著降低 (P ＜0. 05)。從表 5‑可見: 添加蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對斷奶仔豬‑干物質(zhì)、鈣、總磷的全腸道表觀消化率沒有顯著影‑響 (P ＞0. 05)，而顯著提高了粗脂肪和粗蛋白質(zhì)的‑表觀消化率 (P ＜0. 05)。

‑2.4‑蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對斷奶仔豬血清‑二胺氧化酶含量的影響‑從表 6 可見: 與對照組相比，添加不同劑量的‑蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑均能一定程度降低斷奶‑仔豬血清中的二胺氧化酶 (DAO) 含量，且高劑量‑組達(dá)到顯著水平 (P ＜0. 05)。

注同表 2。‑

2.5 蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對斷奶仔豬空腸黏‑膜氧化還原狀態(tài)的影響‑從表 7 可見: 飼糧添加 2200 或 4400 mg/kg 蝦‑青素和雙乙酸鈉混合制劑顯著提高空腸黏膜TAOC‑以及CAT活性，顯著降低空腸黏膜MDA含量(P ＜0. 05)。

而與對照組相比，高劑量組空腸黏膜 SOD‑和 GSH － Px 活性顯著升高 (P ＜0. 05)

‑3‑討論‑3.1‑飼糧添加蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對斷奶

‑仔豬生長性能的影響‑

通常仔豬在斷奶階段容易受到諸多不良因素的‑影響導(dǎo)致生長性能下降，其中多數(shù)與氧化應(yīng)激有‑關(guān)。Naguib 等 (2000) 研究發(fā)現(xiàn)，蝦青素在體外表‑現(xiàn)出強(qiáng)大的清除自由基能力。曹秀明等 (2011) 的‑試驗(yàn)表明，蝦青素具有保護(hù)細(xì)胞膜免受ＲOS 的損‑傷，且保護(hù)機(jī)制與其抗氧化功能有關(guān)。幼齡動物對‑霉變飼料敏感，極易發(fā)生腹瀉等病理反應(yīng)，引起或‑加重氧化應(yīng)激。雙乙酸鈉是食品和畜牧行業(yè)中常用‑的防霉劑，有研究表明，肉鴨飼糧中添加 0. 2% ～‑0. 4%的雙乙酸鈉能顯著提高肉鴨增質(zhì)量，極顯著‑改善飼料轉(zhuǎn)化率，且對成活率等無明顯影響。試驗(yàn)‑在仔豬飼糧中添加不同劑量的蝦青素和雙乙酸鈉的‑混合制劑 (w∶w = 1∶10)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)添加劑量達(dá)到 2‑200 ～4 400 mg/kg 時(shí)，仔豬的生長性能顯著改善。‑這可能是由于蝦青素具有抗氧化能力，而雙乙酸鈉‑防止飼料霉變，減輕飼料霉變導(dǎo)致的仔豬氧化應(yīng)激‑程度加深。兩者共同作用，從飼料和動物體兩方面‑共同促進(jìn)仔豬的健康，提高仔豬生長性能。

‑3.2 飼糧添加蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對斷奶仔

‑豬血清氧化還原狀態(tài)的影響‑

血清中氧化還原狀態(tài)的變化可以反映機(jī)體循環(huán)‑中的氧化還原狀態(tài)。試驗(yàn)飼糧添加蝦青素和雙乙酸‑鈉混合制劑能夠有效提高血清中 TAOC，提高血清‑SOD、GSH － Px、CAT 等抗氧化酶的活性，降低脂‑質(zhì)過氧化產(chǎn)物 MDA 的含量。該結(jié)果表明蝦青素能‑夠進(jìn)入機(jī)體，并且在機(jī)體內(nèi)起到維持氧化還原平衡‑狀態(tài)的作用。

‑3.3 飼糧添加蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對斷奶仔‑豬腹瀉率和養(yǎng)分表觀消化率的影響‑斷奶仔豬生長性能的發(fā)揮很大程度上與腸道的健‑康有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加 2 200 ～4 400 mg/kg‑蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑時(shí)，仔豬的腹瀉率明顯‑降低，同時(shí)仔豬對飼糧中粗脂肪和粗蛋白質(zhì)的表觀‑消化率在劑量達(dá)到 4 400 mg/kg 時(shí)表現(xiàn)為顯著的升‑高?？梢娢r青素和雙乙酸鈉二者合用能夠明顯促進(jìn)‑斷奶仔豬腸道健康，提高腸道的養(yǎng)分消化能力。

‑3.4‑飼糧添加蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對斷奶‑仔豬血清二胺氧化酶含量以及空腸氧化還原‑狀態(tài)指標(biāo)的影響‑二胺氧化酶 (DAO) 是主要存在于腸道的細(xì)胞‑內(nèi)酶，當(dāng)腸道受損時(shí)該酶大量外流進(jìn)入血液循環(huán)，‑因此血液中該酶的含量能夠反映腸道受損程度。研‑究表明，蝦青素聯(lián)合雙乙酸鈉能夠明顯減輕空腸細(xì)‑胞受損程度，減少血清 DAO 含量。進(jìn)一步研究確‑定，蝦青素聯(lián)合雙乙酸鈉能夠顯著提高空腸抗氧化‑能力，維持空腸健康狀態(tài)。這可能是由于蝦青素具‑有優(yōu)良的抗氧化性能，而雙乙酸鈉能夠減輕飼料霉‑變程度，減少腐敗物質(zhì)對腸道的刺激，協(xié)助減輕腸‑道氧化應(yīng)激損傷。

‑4‑結(jié)論‑研究表明，飼糧添加 1 100 ～4 400 mg/kg 蝦青素‑和雙乙酸鈉的混合制劑 (w∶w =1∶10) 有利于維持血清‑和空腸的氧化還原狀態(tài)，促進(jìn)空腸細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，提‑高腸道對養(yǎng)分的消化能力，提高動物的生長性能。

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‑選擇發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳發(fā)酵時(shí)間為 3 d。

‑2.7‑驗(yàn)證試驗(yàn)‑由前面的優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果，可知最佳培養(yǎng)條件:‑葡萄糖 5%，蛋白胨 2%，34 ℃，pH7. 5，接種量為‑5%以及培養(yǎng)時(shí)間 3 d，在此條件下發(fā)酵產(chǎn)生的蛋氨‑酸含量相對最高，重復(fù)試驗(yàn) 3 次，見表 1。

在此發(fā)酵條件下，3 次重復(fù)試驗(yàn)得到的結(jié)果差‑距不大，在 3. 5% 左右，生產(chǎn)蛋氨酸重復(fù)性較好，‑蛋氨酸產(chǎn)量最高達(dá)到 2. 105 g/L，說明該試驗(yàn)條件‑穩(wěn)定，結(jié)果可靠。

‑3‑結(jié)論與展望‑

從茶樹根的內(nèi)生菌中篩選出蛋氨酸產(chǎn)生菌，通‑過薄層分析鑒定，該菌種能產(chǎn)生蛋氨酸。經(jīng)培養(yǎng)基‑成分優(yōu)化和培養(yǎng)條件優(yōu)化，得到最佳培養(yǎng)基成分及‑培養(yǎng)條件: 葡萄糖 5%，蛋白胨 2%，34 ℃，pH‑7. 5，接種量為 5%，培養(yǎng)時(shí)間 3 d，在此條件下發(fā)‑酵產(chǎn)生的蛋氨酸含量最高，平均達(dá)到 2. 065 g/L，‑比優(yōu)化前的 1. 223 g/L 提高 68. 8%，初步達(dá)到了優(yōu)‑化的目的。接下來的工作是對其做進(jìn)一步的正交優(yōu)‑化試驗(yàn)及對菌種進(jìn)行基因改造等，以期獲得更高產(chǎn)‑的菌珠。‑

目前，我國己經(jīng)基本掌握了蛋氨酸化學(xué)合成法、‑酶法和微生物發(fā)酵法等生產(chǎn)技術(shù)，在基因工程和生物‑工程領(lǐng)域的研究也取得了一定進(jìn)展。在國際上對蛋氨‑酸需求旺盛的背景下，我國的蛋氨酸產(chǎn)業(yè)只有在研發(fā)‑和生產(chǎn)工藝上加大創(chuàng)新力度、降低生產(chǎn)成本，才能在‑未來的國際市場競爭中處于有利地位。

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