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9樓
發(fā)表于 2007-8-24 11:15:05
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這樣做有點(diǎn)復(fù)雜,可按以下方法:
發(fā)酵大豆蛋白中小肽的測定
1、原理:
利用三氯醋酸作蛋白質(zhì)沉淀劑,將發(fā)酵大豆蛋白中的蛋白質(zhì)和肽鏈較長的肽沉淀,并將其中的短鏈小肽用酸溶解出來,經(jīng)過濾、離心、消化、蒸餾,測定其蛋白質(zhì)含量,并以其占樣品粗蛋白質(zhì)的百分?jǐn)?shù)來表示含量。本方法是參照中華人民共和國輕工行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)大豆肽粉標(biāo)準(zhǔn)(QB/ T 2653 -2004)基礎(chǔ)上修訂而來。
2、試劑及儀器:
1)100ml燒杯;
2)10ml,50ml移液管;
3)干過濾裝置;
4)半微量法或全量法粗蛋白質(zhì)測定的試劑和裝置;
5)15%三氯醋酸溶液;
6)4000 轉(zhuǎn)/ 分鐘的離心機(jī)。
3、方法:
準(zhǔn)確稱取樣品6克于100 ml燒杯中,準(zhǔn)確加入15 %三氯乙酸溶液50 毫升,混合均勻,靜置5 分鐘,以中速定性濾紙干過濾,棄去少許初始濾液,將濾液轉(zhuǎn)移至離心管,在4000 轉(zhuǎn)/ 分鐘下離心10 分鐘,準(zhǔn)確移取其上清液10ml于消化管中,按半微量法(消化后定容至100ml,準(zhǔn)確移取其中10ml進(jìn)行蒸餾)或全量法粗蛋白質(zhì)測定方法測定其粗蛋白質(zhì)含量。同時(shí)做空白試驗(yàn)、測定樣品的粗蛋白質(zhì)的含量。
4、結(jié)果與計(jì)算:
小 肽%(半微量法)=(V1-V0)×C×6.25×0.014×10×5÷m×100%÷cp×100%
小 肽%(全量法)=(V1-V0)×C×6.25×0.014×5÷m×100%÷cp×100%
式中:
V1--餾出液消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積,ml;
V0--空白試驗(yàn)消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積,ml;
C--鹽酸的摩爾濃度,mol/l;
6.25×0.014--蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換系數(shù);
m--稱取樣品質(zhì)量,g;
cp—樣品的粗蛋白質(zhì)含量,%。
重復(fù)性: A)、每個(gè)試樣的兩個(gè)平行樣間允許相對(duì)偏差為其算術(shù)平均值的10%,以其算術(shù)平均值上報(bào)結(jié)果;
C)、所得的結(jié)果是指小肽占粗蛋白質(zhì)的百分含量。
因其中含有無機(jī)氮,測得結(jié)果應(yīng)減去無機(jī)氮,見非蛋白氮的測定。 |
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