劉志南 張立昌 (美國輝瑞動(dòng)物保健品有限公司) 豬偽狂犬病(Pseudorabies, PR)是由偽狂犬病病毒(PRV)引起的豬和其它多種動(dòng)物共患的急性和高死亡率的傳染病,豬可耐過急性感染而存活,成為病毒天然貯藏庫,而其它一些哺乳動(dòng)物如牛、羊、狗感染常是致死性的。1902年在匈牙利由Aujeszky博士首次發(fā)現(xiàn),故也稱Aujeszky’s disease(AD)。我國僅在1988-1995年間,廣東26個(gè)豬場發(fā)生,感染母豬19750頭,約占100多個(gè)集約化豬場母豬總數(shù)的30%。該病潛伏期為36小時(shí)-10天,一般3-6天。最重要傳播途徑是野毒感染的種豬引進(jìn),其次是通過鼠傳播,其它途徑包括空氣、鳥類、昆蟲、人、車輛等機(jī)械性攜帶。未免疫豬群,特征性的臨床癥狀,母豬和公豬表現(xiàn)繁殖障礙和呼吸道癥狀;哺乳仔豬表現(xiàn)為最急性,死亡率可高達(dá)100%;斷奶仔豬與哺乳仔豬相似,死亡率約為50%,主要表現(xiàn)為呼吸系統(tǒng)疾病癥狀,如果出現(xiàn)繼發(fā)感染,損失則會(huì)加劇,存活的仔豬日增重下降;育成育肥豬發(fā)病率可達(dá)100%,而死亡率約為2%,主要表現(xiàn)打噴嚏、流鼻涕、劇烈咳嗽、呼吸困難等呼吸道癥狀,成為豬群感染的病毒庫。特征性的病理變化在扁桃體、肝、脾、肺、淋巴結(jié)、腦等器官的壞死。 偽狂犬的控制包括兩個(gè)主要方面:生產(chǎn)管理和免疫。現(xiàn)就偽狂犬病的新視點(diǎn)及其控制與凈化技術(shù)等涉及的問題作如下解釋,以饗關(guān)系此問題的養(yǎng)豬生產(chǎn)者,并期望達(dá)到有效控制該病的目的。
1. 豬群流行或爆發(fā)偽狂犬,應(yīng)如何使用輝瑞公司的撲偽佳(PR-Vac Plus)疫苗進(jìn)行控制? 在我國,幾乎所有的規(guī)?;i場都通過免疫手段控制偽狂犬病,如果仍流行或爆發(fā)偽狂犬病,則可說明生物安全不完善,或免疫保護(hù)不良。為了快速控制感染蔓延和減少生產(chǎn)損失,使用撲偽佳進(jìn)行全群免疫,包括此后6周內(nèi)出生的仔豬;4周后,種群再進(jìn)行第2次免疫,包括所有公豬、母豬、后備種豬。請(qǐng)牢記:基礎(chǔ)免疫(兩次注射)對(duì)疫苗包括其它疫苗產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)保護(hù)至關(guān)重要。產(chǎn)前2周、已使用撲偽佳進(jìn)行第2次免疫的母豬所產(chǎn)的仔豬,分別在10周齡(商品豬和選留種豬)和14周齡(僅選留種豬)免疫。臨床癥狀有望在完成基礎(chǔ)免疫后2周逐步改善、恢復(fù),但死胎、木乃伊和弱仔,仍要持續(xù)一段時(shí)間。
2.在上述免疫程序中,為什么沒有使用滴鼻(IN)免疫?
如果豬群爆發(fā)偽狂犬病,作為緊急控制措施,3日齡的滴鼻免疫是一種選擇,因?yàn)槟冈纯贵w對(duì)免疫干擾輕微,保護(hù)產(chǎn)生時(shí)間快。但滴鼻不是緊急和常規(guī)控制措施的首選,因?yàn)椋旱谝?,滴鼻僅是局部的粘膜免疫,保護(hù)持續(xù)時(shí)間短,僅為3-4周。這樣,需要再次滴鼻免疫和后期的肌肉注射;第二,在偽狂犬疫苗普遍使用的今天,豬群爆發(fā)偽狂犬病的現(xiàn)象不多見;第三,即使爆發(fā)或流行偽狂犬病,采用肌肉注射的途徑,也會(huì)產(chǎn)生快速的保護(hù)(36小時(shí)),此結(jié)果雖然從免疫機(jī)理無從解釋,但從現(xiàn)場(上海、浙江等)實(shí)踐得到了證實(shí);第四,在豬群良好的免疫狀態(tài)下,3日齡的滴鼻免疫是不必要的,也是一種資源的浪費(fèi)(資金和人工),除非母源抗體保護(hù)不堅(jiān)強(qiáng)(即母豬原來使用的偽狂犬疫苗保護(hù)不良),這也是歐美等國家不普遍采用滴鼻免疫的原因,因?yàn)槿绻褂猛灰呙缂让庖吣肛i,又要推薦滴鼻免疫仔豬,則證明該疫苗產(chǎn)生的母源抗體不能給仔豬提供堅(jiān)強(qiáng)的保護(hù)。因此,從養(yǎng)豬者的生產(chǎn)成本和控制的效果出發(fā),如按推薦的程序,使用撲偽佳免疫種豬,即可給仔豬提供堅(jiān)強(qiáng)而持久的保護(hù),70日齡內(nèi)的仔豬,不必作任何免疫,包括滴鼻。需要說明的是,撲偽佳毒株高度安全,可用于滴鼻免疫,但由于配以含油佐劑稀釋液,故不推薦此方法。
3.如何保證豬群遠(yuǎn)離偽狂犬病的困擾?
作為偽狂犬病的綜合防制措施,主要包括兩個(gè)方面:第一,良好的生產(chǎn)管理和完善的生物安全體系。如豬場的選址和豬舍的布局(兩點(diǎn)或三點(diǎn)式)、生產(chǎn)流程(嚴(yán)格的全進(jìn)全出-AIAO)、引進(jìn)無PRV種豬或精液入場,上述三方面最重要。還有環(huán)境控制(溫濕度、通風(fēng)、消毒),防止外界車輛、鳥類、野生動(dòng)物、人的攜帶及飼料污染,定期監(jiān)測(cè)和及時(shí)淘汰PRV陽性種豬等;第二,免疫。優(yōu)質(zhì)疫苗的選擇和合理的免疫程序,二者缺一不可。從某種意義上講,第一方面更應(yīng)得到重視。
4.如何有效利用血清學(xué)監(jiān)測(cè)方法?
血清學(xué)診斷,應(yīng)用于豬群健康監(jiān)測(cè),有其快捷、準(zhǔn)確等優(yōu)勢(shì),尤其是ELISA方法,特異性高、重復(fù)性好。但在我國眾多的監(jiān)測(cè)實(shí)例中,在以ELISA檢測(cè)偽狂犬抗體時(shí),以O(shè)D值或S/N值來判定免疫抗體水平的高低和免疫效果,從而指導(dǎo)豬場的疫苗選擇和免疫程序。此錯(cuò)誤的認(rèn)識(shí),正在給豬場的免疫帶來極大的危害。事實(shí)上,如果以gE缺失的偽狂犬疫苗免疫豬只和使用鑒別診斷ELISA方法,S/N值的高低僅表示陰性或陽性(野毒感染),這是血清學(xué)檢測(cè)上的誤區(qū)。而對(duì)于檢測(cè)上的缺陷,不總能區(qū)分野毒抗體和疫苗抗體,這使檢測(cè)失去了真正意義;而且,檢測(cè)陽性,僅能表示感染(包括疫苗免疫),與現(xiàn)在存在的主要疾病問題無必然的因果關(guān)系;再有,如果不能將不同階段的豬分開,如基礎(chǔ)母豬和公豬、后備種豬、斷奶仔豬、育成育肥豬,就無法確知該病在豬群中的流行情況,包括病原循環(huán)在哪個(gè)日齡階段、傳播和感染時(shí)間等。因此,常規(guī)監(jiān)測(cè)確定豬群有無偽狂犬野毒感染,30份血清樣本,分布在基礎(chǔ)母豬和公豬、10周齡和60-70Kg育成育肥豬,以gE-ELISA檢測(cè)。免疫效果的衡定可采用血清中和試驗(yàn)(SN)方法,但要記住,偽狂犬病的免疫保護(hù)是以細(xì)胞免疫為主。
5.不同疫苗毒株,在應(yīng)用過程中,是否會(huì)出現(xiàn)基因重組?
首先,用于疫苗生產(chǎn)的毒株,其毒力減弱,不單純是基因缺失的結(jié)果,還有可穩(wěn)定遺傳的變異了的病毒結(jié)構(gòu)蛋白;其次,從理論上講,基因缺失的偽狂犬病毒存在修復(fù)即重組的可能,但從世界范圍的應(yīng)用實(shí)際結(jié)果看,目前尚無此報(bào)道;再次,用于生產(chǎn)疫苗的毒株均為致弱的毒株,不會(huì)在豬群中傳代。即使在個(gè)體中發(fā)生重組,危害也會(huì)很有限;最后,如果重組,其基因片斷也是來自野毒,說明豬群有野毒感染,而野毒感染帶來的危害遠(yuǎn)比極小可能疫苗重組后的更嚴(yán)重。因此,使用標(biāo)記基因(gE)缺失的偽狂犬弱毒疫苗是控制偽狂犬整個(gè)方案中最重要一環(huán)。
6.gE、gG、TK和rr基因的作用是什么?對(duì)疫苗的免疫原性和安全性有何影響?
gE(gI)為全球通用的標(biāo)記基因,缺失后,會(huì)降低毒力;gG(gX)為編碼基因,對(duì)PRV病毒復(fù)制不是必須的,與毒力也無關(guān)系。缺失后,用于美國早期診斷,由于其鑒別診斷特異性的局限性,已不用此基因作為標(biāo)記基因;TK(Thymidine kinase,胸腺嘧啶核苷激酶),與病毒毒力有關(guān),控制PRV在神經(jīng)組織內(nèi)復(fù)制;rr(Repeat region)為重復(fù)基因,功能尚不完全清楚,有資料顯示與毒力有關(guān)。根據(jù)免疫機(jī)理,疫苗毒株與野毒在結(jié)構(gòu)上越相似越有利于免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性保護(hù),在充分保證安全性的前提下,力求疫苗毒株的完整性,以提高疫苗的免疫原性。撲偽佳就是在此標(biāo)準(zhǔn)下開發(fā)研制的。
7. 既然育肥豬單純感染偽狂犬病毒后的死亡率不超過2%,為何還需要免疫?可否免疫0.5頭份?
眾所周知,在一個(gè)偽狂犬野毒感染的豬群,如果育成育肥豬沒有免疫,感染率可高達(dá)100%,但在無繼發(fā)感染的情況下,死亡率不會(huì)超過2%,這是不重視在此階段危害的一個(gè)重要原因。感染的育成育肥豬,臨床上主要是以呼吸系統(tǒng)疾病為主,表現(xiàn)咳嗽、打噴嚏、呼吸困難等,這些豬,日增重和飼料轉(zhuǎn)換率都會(huì)明顯降低,從而帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。在美國,一頭感染的豬,損失約為12美元。另外,感染的育成育肥豬,也變成了病毒貯藏庫,猶如定時(shí)炸彈,隨時(shí)危害其它豬只。鑒于此種種原因,種豬場選留的后備種豬,分別在10周齡和14周齡免疫兩次;商品豬,在10周齡免疫一次。
疫苗的免疫原性和免疫劑量是成功免疫的基礎(chǔ)。由于不良的注射技術(shù)或主觀上故意減少劑量,均會(huì)造成免疫失敗。認(rèn)識(shí)上的誤區(qū),認(rèn)為豬越小,免疫劑量越小。而事實(shí)上,豬只年齡越小,免疫系統(tǒng)發(fā)育越不健全,又有母源抗體對(duì)后天免疫的干擾,若不給予足夠劑量的疫苗抗原,難以有效地刺激機(jī)體免疫系統(tǒng),產(chǎn)生良好的免疫保護(hù)。因此,0.5頭份的劑量不可取。
8. 撲偽佳的安全性如何?懷孕母豬可以免疫嗎?如何看待可能的副作用?
在我國對(duì)生物制品管理越來越嚴(yán)格、各項(xiàng)法規(guī)越來越完善的今天,得到農(nóng)業(yè)部注冊(cè)本身就證明撲偽佳是安全的,這包括疫苗毒株(Buk)和佐劑(Amphigen—愛菲金),這是其一;其二,撲偽佳原始毒株分離于羅馬尼亞布加勒斯特(Bucharest),捷克的R. skoda和華盛頓州立大學(xué)Berger博士用雞胚致弱此病毒;最后,美國輝瑞公司1975年6月26日從普度(Purdue)大學(xué)獲得此毒株,并用于疫苗生產(chǎn)。通過近30年的應(yīng)用實(shí)例,證明該疫苗具有高度安全性,包括對(duì)妊娠各階段的母豬和各日齡豬只。當(dāng)然,有一點(diǎn)需明確的是:由于懷孕早期和后期的母豬對(duì)任何外來刺激均表現(xiàn)較強(qiáng)烈的不良反應(yīng),如短暫的體溫升高、采食量下降、甚至流產(chǎn)。撲偽佳毒株和愛菲金佐劑對(duì)免疫健康動(dòng)物是高度安全的,無任何不良反應(yīng)。但免疫臨床非健康豬只,或處于某些傳染性疾病的潛伏期、營養(yǎng)不良或有寄生蟲感染、運(yùn)輸或環(huán)境應(yīng)激、免疫抑制性藥物的應(yīng)用,及未按標(biāo)簽上說明進(jìn)行疫苗接種等情況,可能會(huì)加劇上述不良反應(yīng)。作為一個(gè)負(fù)責(zé)任的公司,對(duì)這種小概率事件,已明確提請(qǐng)使用者注意。況且,免疫本身就是機(jī)體的一個(gè)炎性過程,而免疫保護(hù)往往與機(jī)體的反應(yīng)是密不可分的。這種反應(yīng)包括機(jī)體的免疫應(yīng)答及伴發(fā)的臨床副作用。即使如此,應(yīng)在保證充分的免疫效果的前提下,盡可能降低因此而帶來的負(fù)面影響。此平衡往往由佐劑來掌控,即在提高免疫效果時(shí),而些許放寬了可能的副作用。
9. 免疫反應(yīng)和保護(hù)是如何建立的?
抗原遞呈細(xì)胞(APCs)如巨嗜細(xì)胞生存于動(dòng)物的血流和免疫系統(tǒng)內(nèi);APCs與抗原接觸和加工,并在主要組織相容性復(fù)合物(MHC)分子的參與下,在APCs表面把抗原提呈給輔助性T細(xì)胞,從而啟動(dòng)機(jī)體免疫反應(yīng);輔助性T細(xì)胞將疫苗抗原信息傳遞給動(dòng)物免疫系統(tǒng)的殺傷性T細(xì)胞和B細(xì)胞;
10、愛菲金(Amphigen)也是含油佐劑,與其它油佐劑有區(qū)別嗎?與水劑比較,優(yōu)勢(shì)為何?
愛菲金(Amphigen)佐劑含有高度純化的天然乳化劑卵磷脂和少量油(4.5%),卵磷脂它是由與組織細(xì)胞膜成分相似的生物相容性物質(zhì)磷脂和糖脂組成,油滴被無刺激的卵磷脂包裹,賦予該佐劑具油劑和水劑的雙重優(yōu)點(diǎn),獨(dú)特之處在于對(duì)抗原的吸附面積增加、通針性好、可減少注射部位不良反應(yīng)和組織損傷,且兼有與水劑同樣安全的特性;有助于抗原的吸收和處理,抗原通過脂質(zhì)體結(jié)合到油滴上,此油滴與動(dòng)物細(xì)胞膜有很好的生物相容性。因此,有助于巨嗜細(xì)胞向注射部位游走,有利于抗原呈遞細(xì)胞(APCs)對(duì)抗原的處理,及加工過的抗原結(jié)合到主要組織相容性復(fù)合物(MHC)分子上,同時(shí),可增強(qiáng)激活記憶細(xì)胞;與其它佐劑相比,更有效激活輔助性T細(xì)胞和免疫系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)證明,撲偽佳可產(chǎn)生良好的體液免疫和細(xì)胞免疫。其它油佐劑,含油量介于10-20%,如果純化不良,極易引起注射部位的炎性反應(yīng),甚至壞死和全身的不良反應(yīng),而且,注射費(fèi)力。水性佐劑,不會(huì)加強(qiáng)疫苗的免疫原性。
11. 目前,哺乳仔豬無明顯死亡和神經(jīng)癥狀,剖檢無特征性的肉眼病變,為什么不能完全說明偽狂犬控制良好?
的確,偽狂犬特征性臨床表現(xiàn)是哺乳仔豬的高死亡率和神經(jīng)癥狀,及壞死性病變。但在免疫的豬群,即使發(fā)生偽狂犬病,這些表現(xiàn)可能看不到,況且,現(xiàn)場中,又常常被PRRS、圓環(huán)病毒(PCV2)和其它肺炎類疾病所掩蓋,更有甚者,與附紅細(xì)胞體感染相混淆,又增加了對(duì)該病診斷的難度。其后果是忽略了對(duì)偽狂犬的控制,造成生產(chǎn)的嚴(yán)重?fù)p失而又把責(zé)任推在PRRS、PCV2等疾病身上。從大量的病理學(xué)診斷結(jié)果和采取的相應(yīng)控制方案的成功,有力地說明上述觀點(diǎn)的真實(shí)性。因此,在你的豬群中,如果采取了大量的疾病控制措施而生產(chǎn)仍無明顯好轉(zhuǎn),則應(yīng)首先應(yīng)考慮偽狂犬的控制效果,當(dāng)然,還包括豬瘟。
12. 在比較各公司的偽狂犬疫苗后,發(fā)現(xiàn)撲偽佳的抗原含量僅為104.5 TCID50,能夠產(chǎn)生良好的免疫效果嗎?
首先需要明確的是,最低抗原量均需要經(jīng)過大量的試驗(yàn)來確定。各公司的偽狂犬疫苗因毒株不同,免疫原性差異也較大,最低的抗原含量也不同;其次,進(jìn)口偽狂犬疫苗均需要當(dāng)?shù)孬F醫(yī)主管部門如農(nóng)業(yè)部和我國農(nóng)業(yè)部的嚴(yán)格試驗(yàn)和審批方可允許現(xiàn)場使用。輝瑞公司的撲偽佳也不例外,是在大量的試驗(yàn)基礎(chǔ)上來確定的最低抗原含量,此含量已通過美國農(nóng)業(yè)部和我國農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)并證明可產(chǎn)生最佳的免疫效果。而且,在近30年的應(yīng)用和在美國偽狂犬病國家凈化方案中,撲偽佳發(fā)揮的作用也再次證實(shí)了該毒株具有的優(yōu)異的免疫原性;最后,撲偽佳的抗原滴度,除與疫苗病毒株具有較高的免疫原性密切相關(guān)外,還與疫苗中使用了專利佐劑-愛菲金有關(guān),愛菲金不但增加了吸附抗原的能力,而且吸附的抗原更易被抗原遞呈細(xì)胞(APC)識(shí)別、捕獲、加工處理,進(jìn)而提高了T、B淋巴細(xì)胞對(duì)抗原的識(shí)別。因此,以疫苗中標(biāo)識(shí)的抗原含量免疫豬只,能夠產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)的免疫保護(hù),主動(dòng)免疫保護(hù)可持續(xù)到豬出欄上市,包括高水平的血清中和抗體和良好的細(xì)胞免疫,能最大限度地降低PR引起的臨床癥狀和野毒排放時(shí)間、排放量。仔豬通過初乳可獲得8-12周的被動(dòng)保護(hù),切斷病毒的早期感染。減輕育成育肥豬的呼吸道癥狀,提高日增重,預(yù)防呼吸系統(tǒng)疾病綜合征(PRDC)的發(fā)生,減少該群體的散毒和整個(gè)豬群的感染壓力,為豬群偽狂犬的控制和凈化創(chuàng)造了先決條件。
13. 撲偽佳在美國國家偽狂犬凈化工程中,扮演的角色是什么?
自1976年11月3日偽狂犬病病毒布加勒斯特毒株被美國農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)用于生產(chǎn)疫苗,輝瑞公司使用此病毒株先后生產(chǎn)了PR-Vac和PR-Vac Plus(撲偽佳)兩種偽狂犬病弱毒疫苗,兩者只是稀釋液有所不同,撲偽佳使用了含愛菲金佐劑的稀釋液。經(jīng)過近30年的使用,疫苗的安全性和效力得到了充分證實(shí),在美國進(jìn)行的豬偽狂犬病根除計(jì)劃中發(fā)揮了重要作用,這兩種疫苗至今在美洲、歐洲和亞洲仍有較大的市場份額。在豬偽狂犬病根除計(jì)劃的研究和實(shí)踐中,人們進(jìn)一步認(rèn)識(shí)到撲偽佳(含有佐劑)在豬偽狂犬病凈化中所表現(xiàn)的突出價(jià)值。試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)接種幾種偽狂犬病活疫苗都同樣能控制臨床病例的發(fā)生,但在抵御病毒再次感染的能力(免疫力的持續(xù)時(shí)間和病毒感染的劑量)和再次感染后排毒時(shí)間和排毒量上有明顯差異。撲偽佳抵御病毒再次感染的能力最好,再次感染后排毒時(shí)間最短,這在豬偽狂犬病免疫根除過程中是最重要的。
14. 撲偽佳是在哪個(gè)國家生產(chǎn)的?
作為世界第一大動(dòng)物保健品公司,無論生產(chǎn)廠地設(shè)在何處,都是嚴(yán)格按照總部的生產(chǎn)規(guī)程進(jìn)行產(chǎn)品生產(chǎn)的。每批產(chǎn)品都需經(jīng)嚴(yán)格的檢驗(yàn),合格后方可出廠,因?yàn)閷?duì)于輝瑞公司,信譽(yù)應(yīng)是最重要的。
撲偽佳是在美國內(nèi)布拉斯加林肯廠生產(chǎn)的。
15. 國產(chǎn)疫苗和進(jìn)口疫苗能否搭配使用?
在我國有的豬場,種豬(母豬和公豬)使用進(jìn)口偽狂犬疫苗免疫,而仔豬或育成豬則改用國產(chǎn)疫苗。此做法可以理解,其原因是為了降低生產(chǎn)成本。我們深入分析一下,種豬使用進(jìn)口疫苗,是為了給種豬提供良好的保護(hù),擔(dān)心國產(chǎn)疫苗無法達(dá)到此目的。既然對(duì)國產(chǎn)疫苗信心不足,就允許免疫其它豬只嗎?核算成本,如果使用國產(chǎn)疫苗,按推薦程序應(yīng)免疫2次,計(jì)4ml,約3.0元。在與撲偽佳免疫效果接近的情況下,成本節(jié)約可忽略。故為了達(dá)到最佳的免疫保護(hù)效果,不建議采用此方式。
16. 根據(jù)我國偽狂犬病發(fā)生的實(shí)際情況,作為偽狂犬病控制的重要措施,推薦的凈化或控制免疫程序是什么?
一個(gè)完善的偽狂犬防制方案,應(yīng)根據(jù)具體豬群的感染情況來制定。就免疫控制或凈化程序,應(yīng)考慮生產(chǎn)布局、生產(chǎn)流程、現(xiàn)有的免疫程序和控制效果(gE抗體陽性率)、仔豬母源抗體的消失時(shí)間等因素。推薦的偽狂犬病凈化和控制程序如下:
日齡/階段
| 凈化程序
| 控制程序
| 仔豬
| 無母源抗體
| 3周齡免疫1次,4周后再免
| 3周齡免疫1次
| 有母源抗體
| 10周齡免疫1次,4周后再免
| 10周齡免疫1次
| 后備母豬
及公豬
| 自己選留
| 2次,間隔4周,首免在10周齡;第3次免疫在28周齡,以后同基礎(chǔ)母豬
| 外購
| 到場1周內(nèi)首免,4周后再免。以后同種豬程序
| 基礎(chǔ)母豬
| 選擇一*
| 2次,間隔4周,首免在產(chǎn)前8周;以后胎次,產(chǎn)前8-3周免疫1次
| 選擇二**
| 基礎(chǔ)免疫(2次注射、間隔4周)后,3次/年
| 基礎(chǔ)公豬
| 基礎(chǔ)免疫(2次注射、間隔4周)后,3次/年
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