世界知名非洲豬瘟專家：做到這些，就可以控制非洲豬瘟

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“以前，我的頭發(fā)好多。40年后的今天，我的頭發(fā)都快沒有了。這就是為什么非洲豬瘟病毒非常厲害的原因。”

何塞·馬紐埃爾比·桑切斯·斯凱諾（José Manuel Sanchez-Vizcaino）

雖然非洲豬瘟無疫苗可用，但西班牙借助及時準確的診斷檢測和嚴格有效的封鎖撲殺等措施，在1985年頒布ASF根除計劃后的10年內(nèi)（1995年）即根除非洲豬瘟。在根除非洲豬瘟的過程中，西班牙積累了大量的實踐經(jīng)驗，西班牙馬德里康普頓斯大學(xué)（Universidad Complutense）獸醫(yī)衛(wèi)生監(jiān)測中心（Centro De Vigilancia Sanitaria Veterinaria）被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）認定為非洲豬瘟參考實驗室，成為OIE認可的3個非洲豬瘟參考實驗室之一。

西班牙馬德里康普頓斯大學(xué)（Universidad Complutense, UCM，創(chuàng)建于1499年，是一所具有500余年歷史的公立大學(xué)）外景

“這是西班牙馬德里康普頓斯大學(xué)獸醫(yī)衛(wèi)生監(jiān)測中心外景，西班牙國家非洲豬瘟參考實驗室設(shè)在這里，世界動物衛(wèi)生組織（OIE）非洲豬瘟參考實驗室也設(shè)在我們中心?！?桑切斯·斯凱諾介紹說，“借此機會，歡迎大家來參觀考察?！?/font>

桑切斯·斯凱諾介紹說：“我們檢測中心第三層是生物安全實驗室，包括BSL3（Bio-Safety Level 3,三級生物安全等級）實驗室， BSL動物檢測設(shè)施，主要是研究一些高風險病毒和海外病毒?！?/font>

在北京舉行的2019年國際豬業(yè)論壇上，世界知名非洲豬瘟專家、對非洲豬瘟有著40年研究經(jīng)驗的西班牙國家暨世界動物衛(wèi)生組織非洲豬瘟病毒研究實驗室主任、西班牙馬德里康普頓斯大學(xué)獸醫(yī)衛(wèi)生監(jiān)測中心教授何塞·馬紐埃爾比·桑切斯·斯凱諾（José Manuel Sanchez-Vizcaino）通過《全球非洲豬瘟疫情發(fā)展史及當前態(tài)勢》《不同的流行病學(xué)情境下ASF疫情的控制與根除》《ASFv檢測及ASF疫病診斷》這3個主題告，系統(tǒng)闡述了ASFv病原、流行病學(xué)、檢測和診斷、防控和根除的關(guān)鍵點把控，并針對有關(guān)細節(jié)問題做了深入探討。

非洲豬瘟病毒非常厲害，全球75%以上的生豬受它威脅

“以前，我的頭發(fā)好多。40年后的今天，我的頭發(fā)都快沒有了（上圖）。這就是為什么非洲豬瘟病毒非常厲害的原因?！鄙Ｇ兴埂に箘P諾如此打趣解釋說，ASFv是一種獨特的雙鏈DNA病毒，可在單核細胞和巨噬細胞（靶細胞）中復(fù)制，在電子顯微鏡下觀察，整個ASFv粒子被六邊形的被膜包裹著，非常穩(wěn)定。

桑切斯·斯凱諾介紹說，ASFv最主要的宿主是非洲的軟蜱，100年來，它從非洲向其他地方的傳播經(jīng)歷了3個過程：

√1921年，非洲豬瘟疫情在非洲的肯尼亞首次被報告。此后的30多年，它一直在撒哈拉以南非洲流行。

√1957年，一趟載著葡萄牙人以及水果、肉類食物的航班從非洲的安哥拉飛往歐洲的葡萄牙首都里斯本，飛機上殘余的豬肉制品被當成泔水送往葡萄牙一家養(yǎng)豬場。同年，葡萄牙發(fā)生ASF疫情。當時，雖然造成豬群大面積感染ASFv，但得到了很好控制。1960年，ASF疫情在葡萄牙復(fù)發(fā)，這次不同于前一次，ASFv已變成傳染性非常高的菌株，在葡萄牙并沒有得到很好控制，然后通過豬和豬肉制品運輸、野豬等傳播途徑迅速擴散到歐洲其他國家：西班牙（1960年）、法國（1964年）、意大利（1967年）、馬耳他（1978年）、比利時（1985年）、荷蘭（1986年）。與此同時，ASFv還跨過大西洋，進入美洲的古巴（1971年）、巴西（1978年）、多米尼加（1978年）、海地（1978年）。

√2007年，一艘載著乘客、水果、豬肉等食物的航船從非洲東海岸駛出，后進入高加索地區(qū)黑海沿岸的格魯吉亞，隨此船丟棄的食物殘渣與生活垃圾成為了ASFv的藏身之處。同年，格魯吉亞向世界動物衛(wèi)生組織上報當?shù)匕l(fā)生ASF疫情，這是ASFv第3次從非洲傳播到其他地區(qū)。這次ASFv傳染性也非常強，迅速擴散到亞美尼亞（2007年）、俄羅斯（2007年）、阿塞拜疆（2008年）、烏克蘭（2012年）、白俄羅斯（2013年）。2014年1月，ASFv從高加索地區(qū)的白俄羅斯邊境向西擴散至立陶宛，后經(jīng)家豬與野豬交叉感染，蔓延至波羅的海沿岸國家：波蘭（2014年2月）、拉脫維亞（2014年6月）、愛沙尼亞（2014年9月）。2016年，ASFv由波羅的海沿岸國家向南擴散到東南歐的內(nèi)陸國家摩爾多瓦。2017年，ASFv蔓延到中歐內(nèi)陸國家捷克共和國和巴爾干半島東北部的羅馬尼亞。2018年，ASF疫情再次在匈牙利發(fā)生。同年，保加利亞、比利時也發(fā)生ASF疫情。

2018年8月，中國首次發(fā)生ASF疫情，亦是ASFv首次進入亞洲。2019年1月，蒙古國首次發(fā)生ASF疫情。2019年2月，越南首次發(fā)生ASF疫情。

桑切斯·斯凱諾強調(diào)說，現(xiàn)在飛機到處飛，輪船來來往往，ASFv病毒也一樣，它會藏在食物當中經(jīng)航班、輪船從一個地方傳播到另外一個地方。雖然美洲的巴西、歐洲的西班牙等國經(jīng)過補殺及根除計劃后近年來未新發(fā)ASF疫情，但目前非洲、歐洲、亞洲這三個大陸超過50個國家和地區(qū)（非洲有30多個國家和地區(qū)，歐洲有17個國家，亞洲3個國家）ASFv仍在持續(xù)擴散。近年來，全球ASF疫情新發(fā)次數(shù)逐年上升，因此需要不斷對感染ASFv的豬只或可能受ASFv感染的豬只進行大量捕殺。有一個很重要的數(shù)字值得一提，目前全球有75%的生豬分布在歐洲和中國。

桑切斯·斯凱諾分析稱，全球各地的ASFv流行病學(xué)的狀態(tài)也不一樣。在東非、南非，ASFv比較復(fù)雜，因為發(fā)現(xiàn)了24種基因型，且非洲野豬和蜱蟲均能夠長期攜帶ASFv，它們均對ASFv耐受，而軟蜱是病毒傳播的媒介。相比東非和南非來講，西非ASFv比較簡單，因為只有一種基因型，軟蜱、非洲疣豬在ASFv傳播中的作用不像在東非、南亞那么大。在歐盟國家，除了羅馬尼亞之外，其他國家大部分ASF疫情發(fā)生野豬身上。在格魯尼亞、俄羅斯、白俄羅斯、烏克蘭等非歐盟的國家，ASFv對家豬造成的影響更嚴重一些。在亞洲的中國、蒙古國、越南，從目前報告發(fā)生的ASF疫情來看，主要威脅家豬。

為什么ASFv在中國傳播更快？

更多野豬感染ASFv情況在中國很快會出現(xiàn)

“在非洲豬瘟領(lǐng)域，我已經(jīng)研究了40多年。但是，中國的ASF情況讓我感到非常驚奇。因為傳播速度實在太快了，在7個月內(nèi)中國多地受到了影響?！鄙Ｇ兴埂に箘P諾分析說，ASFv在中國之所以傳播速度如此之快，主要存在以下風險因素：

√野豬的存在。目前，中國的東北、華南、西南、華中（湖北、湖南）以及西北的秦嶺一帶尤其是陜南地區(qū)是野豬分布較多（見上圖）。如果野豬跟家豬進行混合養(yǎng)殖或是相互接觸，會造成更大的風險。

√含豬血產(chǎn)品的飼料。這種情況太可怕，因為非洲豬瘟的病毒能夠在血液當中進行長時間的存在，即使只有一滴血，當中可能有3000個病毒存在。

√采用泔水（餐廚剩余物）喂豬。在中國，農(nóng)場有采用泔水飼喂豬只的傳統(tǒng)，因此需要改變這一飼喂方式，并告訴豬農(nóng)這樣會帶來哪些風險。

√被ASFv感染的豬被運到屠宰場，屠宰后受ASFv感染的豬肉又被運輸?shù)狡渌牡胤健?/font>

√生物安全水平較低。尤其是對相關(guān)的運輸車輛必須進行徹底的清洗和消毒。即使車輛上沾有一滴血，它至少含有3000個病毒，可能會引發(fā)極大風險，所以對相關(guān)的運輸車輛需要進行徹底清洗和消毒處理。

“在中國，ASFv目前主要在家豬中傳播，野豬當中也曾經(jīng)發(fā)生過。但是，更多野豬感染ASFv的情況很快/可能在未來幾個月會出現(xiàn)，因為中國的野豬數(shù)量也很巨大。同時，也希望保證在中國南方，野豬感染ASFv的問題沒有被遮掩。如果這些問題被掩蓋起來，最后的結(jié)果會變得更加糟糕。”桑切斯·斯凱諾表示，只有保證生物安全措施落實到位，才能進一步遏制非洲豬瘟疫情發(fā)生。如果采用泔水飼養(yǎng)豬只，生物安全風險非常大。因為如果泔水受到ASFv感染，豬吃了之后也會感染，造成循環(huán)傳染。此外，后院養(yǎng)豬多數(shù)生物安全水平比較差，感染ASFv的風險比較高。

不同的流行病學(xué)情境下，如何控制與根除ASFv？

“目前，非洲豬瘟的控制和消除，主要問題是沒有可用的疫苗，也沒有治療的方法。”桑切斯·斯凱諾說，但是在西班牙、巴西、古巴等地確實實現(xiàn)了ASFv根除，因此不用太擔心，ASF疫情還是可以控制，但需要做好以下3方面的工作：

其一，如何早期檢測出ASFv？這個聽起來很簡單，但實際并不是這樣。

其二，如果發(fā)生豬只疑似感染ASFv，如何確診ASF疫??？

其三，一旦暴發(fā)非洲豬瘟，應(yīng)急計劃是什么？這涉及兩方面：一方面從源頭上如何控制ASFv進入豬場？另一方面是疑似/發(fā)現(xiàn)ASFv已進入豬場，采取怎樣的生物安全措施阻斷傳播，以避免更多豬只感染ASFv。

桑切斯·斯凱諾介紹說，ASFv病毒非常頑固，它對環(huán)境的抵抗力非常強。在冷藏肉制品中，它可以存活110天，在冷凍豬肉中可以存在1000天。在血中存活18個月（4oC條件下），在受污染的豬舍環(huán)境中可存活1個月。目前，ASFv主要有3種傳播途徑：

第一，通過間接方式進行傳播。如，泔水、航班、輪船等。由于ASFv會在肉品中存活很長時間，而有些豬肉產(chǎn)品原料受ASFv感染，傳播風險較高。如果對豬肉里面黑色斑點不進行檢測，或者餐廚剩余物/吃剩的豬肉食品未經(jīng)過加熱消毒處理來喂豬，可能會造成傳染。ASFv還會與血液發(fā)生反應(yīng)造成進一步交叉?zhèn)魅?。比如說，在屠宰后必須進行胴體檢驗。再比如，在撲殺/運輸感染/疑似感染ASFv的豬只后，對鞋/車輛攜帶/濺沾的血跡沒有完全清理干凈/消毒處理，又去屠宰/運輸其他的豬，這樣極有可能會將ASFv轉(zhuǎn)染給新的豬群。

第二，在通過生物媒介方式傳染。ASFv沒有天敵，它在宿主身上可進行多次復(fù)制，可以存活6年之久。比如，1994年，葡萄牙宣告根除ASF病毒。當時，葡萄牙一家曾因發(fā)生ASF疫情而關(guān)閉大約4～5年的豬場（早先的豬全部清理完畢）重新投產(chǎn)養(yǎng)豬。過了7個月之后，我們當時對這家養(yǎng)豬場的豬只進行檢測后發(fā)現(xiàn)已感染ASFv。

第三，在受感染的家豬和野豬之間直接傳染，或者通過一些動物來進行傳染。如果豬場所在地區(qū)有野豬出沒的話，一定要保證野豬不進入豬場，如，可以做兩道的防護柵欄。另外，現(xiàn)在，在不少的機場運輸豬肉產(chǎn)品，可能是ASFv攜帶者。像非洲國家的一些機場，還有中國、日本、澳大利亞等國的機場，均已檢測發(fā)現(xiàn)了ASFv病毒，需要加強防范。另外，這些攜帶ASFv病毒的動物本身是否是病毒傳染源，則取決于它受ASFv感染的程度、感染的類型。目前來看，中國發(fā)生ASF疫情造成的致死率很高，但是過幾個月，會有感染ASFv的幸存豬，它們就是ASFv的攜帶者，可能會將ASFv傳染給更多的豬，這種情況非常危險。

桑切斯·斯凱諾還稱，狩獵也會給ASFv傳播帶來風險。蒼蠅也是不可忽視的ASFv傳染的媒介。比如，蒼蠅可以把ASFv從一個農(nóng)場攜帶到另外一個農(nóng)場。

僅從基因型來分析ASFv，是不管用的

ASF病毒PCR檢測，一定要用全血

“在我過去40年的經(jīng)歷當中，為控制和根除非洲豬瘟做了非常多的工作。我覺得實驗室的診斷對于非根除ASFv非常重要?！鄙Ｇ兴埂に箘P諾說，但是，在ASFv實驗室檢測與診斷當中，需要選擇適合的檢測方法。

“ASFv基因組成結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜，普通的病毒DNA只有10～20kb(即Kilobase, DNA長度單位，表示病毒某段DNA分子中含有1000個堿基對)，但ASFv的DNA有170～190kb。ASFv的DNA里面有腹膜細胞，使得耐受力很強，保護非常好，且它的變異性又很高，并不是單一的病毒，而是一個非常復(fù)雜的病毒家族?！鄙Ｇ兴埂に箘P諾分析說，“因此，研究ASF病毒家族，不能簡單通過幾個基因進行描述。換句話說，ASFv并不受某一抗體控制，如果只是采用單一抗體的藥物，不能對它進行有效控制。另外，ASFv基因當中還有兩個蛋白質(zhì)非常復(fù)雜?！?br />

“總體來說，如果僅從基因型來分析ASF病毒，是不管用的?！鄙Ｇ兴埂に箘P諾強調(diào)說，“對于ASFv來說，因為它的靶細胞是巨噬細胞和內(nèi)皮細胞。巨噬細胞在機體整個免疫系統(tǒng)當中的作用非常重要，如果巨噬細胞受到了病毒侵蝕，機體免疫功能就會受到很大影響。另外，巨噬細胞在復(fù)制過程當中也會受到破壞。對于內(nèi)皮細胞是另外一種情況，這就是為什么感染ASFv的豬會出現(xiàn)出血癥狀。”

桑切斯·斯凱諾介紹說，ASF臨床表現(xiàn)主要有超急性、急性、亞急性，或者有時候沒有任何明顯癥狀，一旦出現(xiàn)不同問題需要采取不同的應(yīng)對措施。在中國，大多數(shù)的ASFv感染病例屬于急性-亞急性。通常，ASF急性-亞急性的癥狀主要包括：發(fā)燒、昏睡、厭食、皮膚出血以及循環(huán)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)出現(xiàn)問題并伴有神經(jīng)失調(diào)，這些急性-亞急性的ASF臨床癥狀與古典豬瘟（CSF）、豬丹毒癥、沙門氏菌、放線桿菌、其他敗血癥、豬皮炎腎病綜合征（PDNS）的臨床癥狀非常類似，有時候容易混淆。因此，需要采集受感染豬只的樣品進行實驗室檢測和診斷。比如，中國養(yǎng)豬規(guī)模如此大，很多時候ASFv攜帶了七八個月也沒有暴發(fā)，甚至沒有出血點，往往會被當成其他疾病。對應(yīng)發(fā)燒、昏睡、厭食、皮膚出血這四個癥狀，如果發(fā)現(xiàn)豬只出現(xiàn)了其中3個癥狀，就要考慮它是不是感染ASFv，就需要取樣進行實驗室檢測與診斷。有時候，可能過了幾個月才在臨床當中看到真正的ASF癥狀，這就是為什么它很難進行檢測的原因。不僅僅是現(xiàn)場檢測，包括和實驗室合作取樣，危險性高，因為操作不當ASFv可能傳染給其他的豬。

“通常，急性ASF出現(xiàn)脾臟腫大的癥狀特別多，其次為淋巴系統(tǒng)病變?！鄙Ｇ兴埂に箘P諾說，在對2007年亞美尼亞感染ASFv的野豬進行病理檢測發(fā)現(xiàn)，出現(xiàn)脾臟腫大的病例占比達到100%，同時還出現(xiàn)淋巴結(jié)腫大（94.12%）、出血性淋巴腺炎（88.23%）、胸膜積水（88.23%）、扁桃體出血（88.23%）、扁桃體化膿（52.94%）、肝腫大（88.23%）、休克肺（70.95%）、細支氣管間質(zhì)性肺炎(64.7%)、心包積水（70.59%）、心臟出血（47%）、腸道出血（76.47%）、派爾集合淋巴結(jié)壞死（35.29%）、腎臟出血（41.17%）等癥狀。他還強調(diào)稱，對于野豬來講，非常重要的一點，需要建立并完善早期檢測體系，同時需要建立并完善應(yīng)急計劃。

桑切斯·斯凱諾認為，早期檢測對于非洲豬瘟診斷非常重要?！斑@涉及早期檢測率，雖然現(xiàn)在大部分實驗室診斷非常好，但唯一的問題是在現(xiàn)場發(fā)現(xiàn)病豬之后，它的樣品多長時間才能安全送到實驗室?！彼f，有時候，病毒血癥會長時間存在，抗體也會存在好幾年，所以需要進行長期的PCR（聚合酶鏈式反應(yīng)）測試。

“抗體是ASFv的一個非常重要的感染標記物。在尋找抗原的時候，因為一些抗體與抗原會結(jié)合而成免疫復(fù)合物，尤其是直接用抗原劑診斷劑時，發(fā)現(xiàn)敏感度并不是那么高。所以，有時候需要用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）或iELISA（間接酶聯(lián)免疫吸附試驗）對抗原進行檢測?！?桑切斯·斯凱諾分析說，“如果PCR檢測采用血清，敏感度并不那么高。但是，用全血更加敏感一些，因為有些病毒隱蔽性比較強。因此，做PCR檢測一定要用全血。”

“對于ASFv檢測樣品組織而言，淋巴結(jié)很重要，還包括肺、腎、糞便以及脾蟲，糞便里面有時也含血。ASFv檢測中，很多時候主要看它的紅血球吸附能力，還有紅血球吸附為陰性的結(jié)果。但是，現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)有些病毒不產(chǎn)生紅血球吸附。因此，需要對它進行細胞病理效用的分析?！?桑切斯·斯凱諾說：“通常， PCR檢測采用常規(guī)PCR或?qū)崟rPCR?，F(xiàn)在，更多采用第三種PCR方法——UPL-PCR（Universal Probe Library，UPL；UPL-PCR：實時定量探針庫聚合酶鏈式反應(yīng)）檢測。從ASFv不同的檢測結(jié)果來看，UPL-PCR最敏感?！?br />

桑切斯·斯凱諾介紹說，在ASFv檢測與診斷中，可以采用世界動物衛(wèi)生組織的ELISA法來分析抗體，還可以通過實驗室進行分析抗體。另外，還可以采用免疫印跡法來進行分析抗體，采用此法更容易識別出弱陽性樣本。

“我這里還有很多ASF方面的數(shù)據(jù)和內(nèi)容，我會發(fā)給主辦方，大家可以參閱?！鄙Ｇ兴埂に箘P諾說，“我們還有ASFv檢測筆，使用起來非常便捷，它在現(xiàn)場可以使用。我們還有視頻，也有CD中文版，包括ASFv病原、流行病學(xué)、檢測方法、診斷細節(jié)、疫苗開發(fā)等內(nèi)容?！?/font>

來源：《國際豬業(yè)》