豬場養(yǎng)戶如何開展非洲豬瘟自檢工作？

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早監(jiān)測、早發(fā)現(xiàn)、早處置”——豬場養(yǎng)戶如何開展非洲豬瘟自檢工作？——訪廣東愛蘇生物科技有限公司劉芮祎市場總監(jiān)

廣東愛蘇生物科技有限公司成立于2015年，在畜牧業(yè)板塊創(chuàng)立了“牧康靈”品牌，以先進的無創(chuàng)采集專利技術(shù)，便捷的現(xiàn)場檢測方法，和最新的“生豬體檢”理念服務(wù)于豬場。非瘟之下，廣東愛蘇結(jié)合養(yǎng)殖生產(chǎn)實踐，總結(jié)了一套集采樣、檢測與技術(shù)服務(wù)于一體的“牧康靈非洲豬瘟一站式解決方案”助力非瘟防控。

自主檢測：有的放矢，心中有數(shù)

Q1.非洲豬瘟自檢政策逐層放開，對于國家鼓勵養(yǎng)殖戶開展自檢工作，能談?wù)勀目捶▎幔?/font>

這是一項非常有益、及時而且十分有必要的政策?？梢哉f現(xiàn)在開展非洲豬瘟自檢工作已經(jīng)迫在眉睫，同時也是防控非洲豬瘟的前提與重中之重。目前防控非洲豬瘟，沒有疫苗，也沒有有效藥物，自檢成了非洲豬瘟防控的第一步，也是“自?！钡那疤幔≈挥叙B(yǎng)殖場戶做到自主檢測，才能了解非洲豬瘟防控的成效，做到有的放矢，心里更有數(shù)！
規(guī)范操作，避免操作污染

Q2.通過對豬場自檢指導工作以及開展的非洲豬瘟檢測培訓，您認為豬場養(yǎng)戶們普遍存在哪些問題？

最主要的問題是操作上“污染防控意識薄弱”。由于多數(shù)養(yǎng)殖戶以前沒有接觸過這樣的實驗，操作流程技能不規(guī)范等，容易造成污染擴散，導致實驗結(jié)果出現(xiàn)假陽性等情況。

關(guān)于如何解決操作污染問題，我們有以下措施建議：

1.“傻瓜式”培訓。儀器設(shè)定好程序，現(xiàn)場指導豬場員工掌握操作技能、流程步驟及判讀實驗結(jié)果。

2.根據(jù)豬場具體情況建立（簡易）實驗室。需要有獨立實驗區(qū)，至少要保證樣本處理區(qū)與操作區(qū)分開；需有通風條件（可配超凈工作臺），避免內(nèi)部交叉污染循環(huán)。日常檢測結(jié)束使用95%的酒精或核酸去除劑對實驗桌、儀器槍頭等進行消毒。

3.對于實驗區(qū)已出現(xiàn)污染問題，可以更換基因序列（靶點）不同的試劑盒，同時確保通風流暢。

規(guī)范化自檢操作流程與操作細節(jié)

Q3.日常監(jiān)測中，養(yǎng)殖場戶該如何開展非洲豬瘟自檢操作呢？有哪些規(guī)范化檢測流程以及操作細節(jié)可以分享？

非洲豬瘟自檢流程與細節(jié)有以下幾點注意事項：

1.樣本來源要廣泛。采樣的樣本除了豬群本身，還應(yīng)包括豬場各個區(qū)域的環(huán)境、用具、員工、來往車輛、飼料原料等。

2.采樣方式要安全可靠。對于豬只本身的臨床樣本，建議使用“唾液樣本”進行監(jiān)測和檢測。因為非洲豬瘟病毒在自然感染的情況下首先在口腔內(nèi)形成感染，病毒從口腔扁桃體進入血液出現(xiàn)的平均時間是3-4天，最長可達19天，也就是唾液可以早于血液至少3天被檢測出來，最早可以提前19天被檢測出來，這也是檢測的黃金窗口期，那這樣就給豬場進行有效、及時處理贏得了大量的時間！如果在血液里面查出有病毒核酸陽性，實際上豬已經(jīng)出現(xiàn)了比較嚴重的病毒血癥，再做任何處理都已經(jīng)來不及了，也就失去了檢測的生產(chǎn)指導意義。

3.采樣時間間隔要合理。應(yīng)根據(jù)豬場實際情況確定，種豬群一般建議一周至少2次，商品豬群一周1次，如果有賣豬等臨時行為，要對出豬臺、進出人員等隨時進行檢測，環(huán)境檢測要做到一周2次左右。如果豬場周圍有疫情發(fā)生的，則更要加強監(jiān)測周期和頻率，做到隨時了解本豬場的病原及生物安全防控情況。

4.采樣數(shù)量要科學。對于臨床樣本數(shù)量，建議母豬分胎次，小豬分胎齡，育肥、保育以欄為單位進行采樣，以及環(huán)境等各個區(qū)域（可以劃分小單元），每組取5份樣本混樣，公豬量少的可以全檢。這里需要注意，混樣樣本不建議份數(shù)太多。假若出現(xiàn)檢測陽性結(jié)果，再單獨對每一份樣本進行溯源，目標過于分散，耗時增長。

“定向”選擇檢測“目標”樣本

Q4:在檢測試劑與儀器的選擇上，您是否能給養(yǎng)殖場戶們一些意見？

首先，從非洲豬瘟病毒的存在形式上來說，分為蛋白和核酸，所以可檢測的目標物就從這兩個層面來入手。目前市面上有快速檢測試紙條，這屬于免疫層析的原理，檢測目標為病毒的蛋白；還有一種方法是用熒光定量PCR儀，配合使用熒光定量PCR試劑盒，這是一種分子水平的診斷，這種方法檢測的是病毒的核酸。

在方法學上，兩種檢測方法都可以檢測病毒，但是靈敏度差異很大，熒光定量PCR的方法是目前最靈敏的方法，所以適合環(huán)境或者唾液樣本的檢測，還有豬場的日常監(jiān)測。而快速檢測試紙條屬于免疫學診斷方法，靈敏度相對較低，但是對于臨床上已有發(fā)病癥狀，肉眼通過癥狀不能確診的情況下，可以使用快速檢測試紙條來進行快速的判斷，所以在臨床上如果遇到有緊急發(fā)病癥狀的時候，可以使用快速檢測試紙條。

Q5：近期，有關(guān)新聞報道（北京森康）非洲豬瘟抗原檢測試劑紙條檢測有假陰性的現(xiàn)象，對此您有何看法？

最近也有很多朋友問過我這個問題，我也非常愿意分享我的觀點。

第一，方法學限制。抗原快速檢測試紙條是免疫膠體金水平的檢測方法，檢測的是病毒的蛋白，這種方法的檢出率或者說靈敏度偏低，換句話說是檢測限（檢測閾值）較高，低病毒量不容易達到檢測限。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第一批非洲豬瘟現(xiàn)場快速檢測試劑評價結(jié)果目錄里，“森康快速檢測試紙條的診斷敏感性是66.67%、特異性100%”，同時注明非洲豬瘟快速檢測試劑條類“僅用于?。ㄋ溃┴i現(xiàn)場快速初步檢測”。這句話本質(zhì)的含義是：病豬或者死豬的帶毒量已經(jīng)很高，更容易達到試紙條的檢測限，所以?。ㄋ溃┴i更容易檢測出來?？乖焖贆z測試紙條檢出率的高低取決于待檢豬的發(fā)病階段，如若是處于潛伏期的病豬，核酸檢測結(jié)果是陽性，抗原快速檢測試紙條檢測是陰性也是合理存在的。

這也提示我們可以通過“定向”選擇檢測“目標”樣本，從而提高準確率。針對豬群日常監(jiān)測與環(huán)境檢測，其帶毒量相對偏低，不容易達到檢測限，不推薦使用抗原快速檢測試紙條。

第二，合理存在假陰或者假陽的可能性。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第一批備案目錄里部分熒光定量PCR試劑盒，診斷敏感性并不都是100%，也有93%或96%的情況。抗原快速檢測試紙條與熒光定量PCR試劑盒敏感性指數(shù)的區(qū)別就是假陰或者假陽比例的高低。所以我個人認為每個產(chǎn)品都有它的優(yōu)缺點，而不能一棍子打死，就說試紙條完全不準確也不可取，關(guān)鍵還是要定向選擇檢測目標樣本。

第三，正規(guī)渠道購置檢測產(chǎn)品。市面上森康產(chǎn)品的價格參差不齊，在這也提醒過廣大用戶，不能一味的在意價格，而不注重產(chǎn)品質(zhì)量。請廣大客戶通過正規(guī)渠道購置產(chǎn)品，保障自身利益。

關(guān)注豬群“內(nèi)在”健康體質(zhì)情況

Q6:唾液檢測在生豬健康度監(jiān)測上也備受關(guān)注，能否介紹生豬的健康體質(zhì)檢測？

抵抗非洲豬瘟，除了做好“外在”的生物安全防控措施，還要注重豬“內(nèi)在”的健康體質(zhì)情況。通過對豬只健康度的評判，可以了解豬群免疫力情況，及時提高豬群免疫力，以提高抗病能力。

其中，我們有寒度檢測試劑盒和朊度檢測試劑盒。寒度檢測試劑盒主要檢測機體體內(nèi)毒素蓄積程度、免疫力水平或肝腎功能受損程度。朊度檢測試劑盒檢測機體的免疫能力。朊度即蛋白含量，代表機體的營養(yǎng)情況。

Q7：唾液檢測的優(yōu)勢及唾液采集的注意事項主要有哪些？

唾液學檢測有四大優(yōu)勢：1.唾液可以早于血液平均3~5天檢測出非洲豬瘟病毒，便于早期篩查；2.唾液采集操作簡單方便，節(jié)省人力和物資；3.對豬無應(yīng)激，方便頻繁的臨床采樣；4.通過唾液樣本，可以進行PCR檢測，進一步確診是否為非洲豬瘟病毒感染。

唾液采樣有以下注意事項：1.采樣時間：控食過夜，前晚停料不停水，第二天早晨采食前采集唾液。這樣采集的唾液樣本純度高，病原含量高；2.要加入唾液保護液，否則唾液中的酶會對病毒核酸造成降解。3.采集出來的唾液樣本不能離心，離心沉淀后，上清液中的病毒量會降低。

Q8：在日常疫病監(jiān)測過程中，您認為應(yīng)該注意哪環(huán)節(jié)？

在日常疫病檢測監(jiān)測中，這幾方面需要注意：

1.非洲豬瘟病毒雖然毒力強，發(fā)病后死亡率高，但它也有弱點，病毒接觸傳播，不接觸就不傳播，這個點來說其威力不及口蹄疫和豬高熱病。若非傳播媒介協(xié)助，自身傳播擴散力度不是特別強。joncarent.com

2.非瘟感染豬清除一定要早：“早監(jiān)測、早發(fā)現(xiàn)、早處置”，及時“穩(wěn)、準、狠”地清除病豬，不給病毒擴散的機會，這樣才能保護健康豬群。

3.落實封閉飼養(yǎng)、全進全出等飼養(yǎng)管理制度，禁止無關(guān)人員和車輛進入場區(qū)；嚴格落實補欄隔離措施和空欄管理制度，避免交叉污染。