一起育肥豬食物中毒的病例分析

dongbaihua2000

2005年11月14日中午12:31，亭湖區(qū)動(dòng)物疫病監(jiān)測中心接到110來電，請求幫助查看一養(yǎng)殖戶生豬突然死亡的原因。工作人員隨即趕到現(xiàn)場。養(yǎng)殖戶施某家存欄商品豬57頭，當(dāng)天早晨豬群完全正常，喂過食后戶主去田里干活，中午回來發(fā)現(xiàn)有13頭豬死亡，還有幾頭精神沉郁。施某懷疑有人投毒，遂報(bào)警。經(jīng)現(xiàn)場癥狀觀察、病理解剖、病史調(diào)查和生化實(shí)驗(yàn)，診斷結(jié)果為育肥豬亞硝酸鹽及亞硝胺急性中毒癥。
1、發(fā)病情況
該養(yǎng)殖戶存欄57頭育肥豬，體重40-80千克，分8個(gè)圈飼養(yǎng)，發(fā)病前相當(dāng)健康。體重最大的一圈死亡率最高，8頭死了7頭，還有一頭目光呆滯、精神沉郁。最小的一圈沒有死亡，精神狀況基本正常。整個(gè)發(fā)病期共計(jì)死亡18頭豬。
2、臨床癥狀
最先死亡的13頭豬橫七豎八地倒在圈里，可視黏膜發(fā)紺（13/13），皮下淤血（4/13），發(fā)病豬精神沉郁、呼吸急促、心跳快速、脈搏淺弱、多數(shù)豬體溫偏低，為36.5-37℃。發(fā)病豬耳朵尾根厥冷，時(shí)有陣發(fā)性抽搐。
3、病理解剖
血液呈醬油色，凝固不良（13/13），肝脹腫大出血，病理切片肝小葉出血性壞死（6/13），肺出血（6/13），胸腔、腹腔有出血性滲出液（8/13），胃大彎和幽門處黏膜出血（8/13），腸道膨脹鼓氣（9/13）。其它未見明顯變化。
4、詢問病史
問診該養(yǎng)殖戶，豬群一直很正常，從未發(fā)病。所喂的飼料都是從菜場拖回的廢棄的青菜、芹菜、菠菜、韭菜等雜物和魚的內(nèi)臟。飼喂前將這些廢棄物剁碎、混勻，加熱。倉庫里堆有沒有飼喂的菜葉，許多已經(jīng)腐爛。
5、生化實(shí)驗(yàn)
取解剖豬胃內(nèi)容物液體兩滴于濾紙上，加10%聯(lián)苯胺三滴，再加10%醋酸兩滴。濾紙立即呈現(xiàn)棕色。
6、結(jié)果分析
綜合以上幾點(diǎn)，可以認(rèn)為這是一起育肥豬急性亞硝酸鹽及亞硝胺中毒并引起死亡的病例。究其原因，可以從飼料中的化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行分析。
6.1蔬菜中硝酸鹽的還原反應(yīng)
正常情況下，各類新鮮蔬菜中都不同程度地含有硝酸鹽（見表1）和亞硝酸鹽。植物體內(nèi)亞硝酸酶含量比硝酸還原酶的含量高得多，所以新鮮蔬菜中亞硝酸鹽的含量僅占硝酸鹽含量的2-50/00。一旦蔬菜進(jìn)入貯藏和運(yùn)輸環(huán)節(jié)，細(xì)胞會(huì)發(fā)生碎裂，釋放出硝酸還原酶，使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。另外，蔬菜在貯藏過程中，某些大腸桿菌、鏈球菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌、摩根變形桿菌等在適當(dāng)?shù)臏囟?、水分、PH值和滲透壓等條件下可促使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。如新鮮蔬菜中亞硝酸根的含量僅4.8ppm，貯存3天后，可升至17.0ppm，如將煮沸的菠菜置于30℃24小時(shí)后，亞硝酸根的含量可猛增至393ppm。
表1 新鮮蔬菜中-NO3-含量
蔬菜        -NO3-含量（ppm）
青菜        3560
芹菜        3620
菠菜、萵苣        3000
韭菜        3640
6.2魚內(nèi)臟中化學(xué)物質(zhì)的反應(yīng)
魚內(nèi)臟中含有大量的動(dòng)物性蛋白和不飽和脂肪酸。蛋白質(zhì)在一定條件下分解為氨基酸再脫羧基成為相應(yīng)的胺類物質(zhì)，其中仲胺的含量最高。在亞硝酸鹽含量足夠時(shí)，仲胺極易反應(yīng)生成亞硝胺。
6.2.1在酸性條件下亞硝酸鹽轉(zhuǎn)化為有活性的亞硝化劑。
NaNO2+HCl⇌HNO2+NaCl   2HNO2 ⇌ N2O3 + H2O
HNO2 +CNS- +H+ ⇌ON-CNS +H2O  
     HNO2 +HX ⇌ ON-X +H2O
2HNO2 ⇌ （H2NO2）++ NO2-
6.2.2這些具有活性的亞硝化劑與仲胺反應(yīng)得到亞硝胺。
(CH3)2NH + N2O3 ⇌ (CH3)2N-N=O + HNO2
R1R2CONH + （H2NO2）+ ⇌ R1R2CON-N=O + H2O + H+
育肥豬胃內(nèi)的酸性環(huán)境恰好促進(jìn)了以上化學(xué)反應(yīng)的發(fā)生。
6.3毒理作用
6.3.1亞硝酸鹽進(jìn)入血液后, 亞硝酸根可與血紅蛋白相互作用，使正常的血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白。正常機(jī)體內(nèi)，由于紅細(xì)胞內(nèi)具有一系列酶促和非酶促的高鐵血紅蛋白還原系統(tǒng)，故正常紅細(xì)胞內(nèi)高鐵血紅蛋白只占血紅蛋白總量的1%左右。當(dāng)機(jī)體攝入大量亞硝酸鹽時(shí)，紅細(xì)胞形成高鐵血紅蛋白的速度超過還原的速度。高鐵血紅蛋白大量增加，引起機(jī)體組織缺氧，導(dǎo)致家畜中毒。以豬為例，當(dāng)豬紅細(xì)胞內(nèi)高鐵血紅蛋白占血紅蛋白總量的20%時(shí)即表現(xiàn)中毒癥狀，占76%以上時(shí)即導(dǎo)致死亡。
6.3.2魚的內(nèi)臟反應(yīng)得到的亞硝胺一般很少表現(xiàn)出急性毒性，但亞硝酸鹽含量高時(shí)可以引起嚴(yán)重的肝、肺、腎等實(shí)質(zhì)器官的組織損傷。
7、小結(jié)
這是一起由飼料亞硝酸鹽和亞硝胺含量過高引發(fā)的育肥豬高鐵血紅蛋白中毒并引起死亡的病例，并非他人投毒。豬群中大豬采食量高、發(fā)病嚴(yán)重、死亡率高，小豬采食量小，發(fā)病較輕。養(yǎng)殖戶施某對自己因貪圖便宜采用廢棄蔬菜和魚內(nèi)臟作為飼料喂豬感到悔恨不已。在110民警和動(dòng)物防疫人員的監(jiān)督和指導(dǎo)下，施某一方面迅速采用1%亞甲蘭靜脈注射治療發(fā)病豬，另一方面催家人將已死亡的育肥豬做無害化處理。

dongbaihua2000

1．病原學(xué)
1．1 病原分類
附紅細(xì)胞體是一類無細(xì)胞壁、嗜血液寄生的多形態(tài)微生物[1]。1928年Schilling等首次在嚙齒動(dòng)物血液中發(fā)現(xiàn)并建立了附紅細(xì)胞體屬[4]。以后相繼在豬、牛、綿羊、山羊、馬、兔、犬、貓、猴、駱駝、羊駝、狐類、驢、鹿、角馬、駱馬等哺乳動(dòng)物和鳥類及人體中證實(shí)有附紅細(xì)胞體的感染。迄今為止，已發(fā)現(xiàn)并命名的附紅細(xì)胞體有數(shù)十種，主要有球狀附紅細(xì)胞體（E.coccoides）（鼠）、異形附紅細(xì)胞體（E.dispar） (鼠)、豬附紅細(xì)胞體（E.suis）（豬）、小附紅細(xì)胞體（E.parvum）（豬）、溫氏附紅細(xì)胞體（E.wenyoni）(牛)、E.teganodes(牛)、E.tumoii(牛)、綿羊附紅細(xì)胞體（E.ovis）(綿羊)、山羊附紅細(xì)胞體（E.herci）（山羊）、兔附紅細(xì)胞體（E.lepns）(兔)、犬附紅細(xì)胞體（E.canis）(犬)、E.perekropovi（犬）、貓附紅細(xì)胞體(E.filis)、微小附紅細(xì)胞體（E.minutum）(貓)、E.mariboi（狐）、雞附紅細(xì)胞體（E.galli）(雞)、E.noguchii(人)和人附紅細(xì)胞體(E.humanus)(人)等[1，4，5]。由于附紅細(xì)胞體多數(shù)是根據(jù)宿主來命名的，而有些附紅細(xì)胞體并不具有嚴(yán)格的宿主特異性，例如綿羊附紅細(xì)胞體也可感染山羊[6]，因此，有些種類可能是同物異名?，F(xiàn)已證實(shí)，豬的小附紅細(xì)胞體是豬附紅細(xì)胞體的前體或未成熟階段，兩者是同一個(gè)種。
目前，國際上將附紅細(xì)胞體列入立克次氏體目（Rickettisiaies）、無形體科（Anoplasmataceae）、附紅細(xì)胞體屬（Eyperythrozoon）[7]。但Rikihisa（1997）[8]通過對豬附紅細(xì)胞體的基因序列（16SrRNA）的分析，發(fā)現(xiàn)其基因序列與霉形體科（Mycoplasmataceae）的同源性較高。隨后Neimark(2001)[6]對溫氏附紅細(xì)胞體、豬附紅細(xì)胞體、貓血巴通氏體（Haemobartonella felis）和鼠血巴通氏體（H.muris）的基因序列分析也獲得了相同的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)它們的基因序列與柔膜體綱（Mocullicute）、霉形體屬（Mycoplasma）較接近，在霉形體屬的肺炎型組內(nèi)形成一個(gè)新的分支，認(rèn)為宜將這4種嗜血性細(xì)菌歸屬霉型體屬，同時(shí)分別重新命名為溫氏霉形體（Condidatus Mycoplasma wenyonil）、豬嗜血霉形體（Candidatus Mycoplasma haemosuis）、貓嗜血霉形體（Condidatus Mycoplasma haemofelis）和鼠嗜血霉形體（Candidatus Mycoplasma haemomuris）。最近Messick(2002) [9]用同樣的方法，將在袋鼠、羊駝和犬血液內(nèi)發(fā)現(xiàn)的附紅細(xì)胞體樣寄生物命名為袋鼠嗜血霉形體（Condidatus Mycplasma haemsdidelphidis sp.nov.）、羊駝嗜血霉形體（Condidatus Mycoplasma haemolamae sp. nov）和犬嗜血霉形體（Mycoplasma haemocanis comb nov.）。
1．2 病原形態(tài)
用光鏡和電鏡對附紅細(xì)胞體進(jìn)行顯微和超微結(jié)構(gòu)觀察，發(fā)現(xiàn)附紅細(xì)胞體是一種典型的原核生物，是多形態(tài)生物體[4]。
1）電鏡下觀察[10-15]，附紅細(xì)胞體無細(xì)胞壁，僅有單層界膜，無明顯的細(xì)胞器和細(xì)胞核。多數(shù)為球形小體，直徑在0.3～1.5μm，偶見桿狀附紅細(xì)胞體，可單個(gè)或多個(gè)呈小團(tuán)狀附著在紅細(xì)胞表面，其中較小的幼稚附紅細(xì)胞體與紅細(xì)胞之間形成約30nm寬的電子透明區(qū)，而較大的成熟附紅細(xì)胞體則可使附著處的紅細(xì)胞膜凹陷，甚至形成空洞。有些大型的附紅細(xì)胞體可伸出纖絲，嵌在細(xì)胞膜上。
2）光鏡下觀察[4，11。12，14，16]，鮮血壓滴鏡檢可見附紅細(xì)胞體形態(tài)多呈環(huán)形、圓形、卵圓形、頓點(diǎn)形、桿狀等，多數(shù)聚集在紅細(xì)胞表面，少則3～5個(gè)，多則達(dá)15～20個(gè)，也可游離于血漿中作上下左右扭轉(zhuǎn)翻滾等運(yùn)動(dòng)，一旦附在細(xì)胞表面運(yùn)動(dòng)即停止。被感染的細(xì)胞常失去正常的球狀立體形，邊緣不整齊，呈鋸齒狀、星芒狀、不規(guī)則多邊形狀等。環(huán)狀蟲體大小為0.3～0.4μm，最大可達(dá)1.5μm，桿狀蟲體大小為（0.3～0.5）μm×(0 .2～0.3) μm.。血涂片染色鏡檢，可見附紅細(xì)胞體形態(tài)也呈多形性，但以圓形為主，多數(shù)以單個(gè)或多個(gè)附著在細(xì)胞表面，甚至布滿整個(gè)紅細(xì)胞表面。瑞氏染色附紅細(xì)胞體染成淺藍(lán)色，姬姆薩染色體呈紫紅色，革蘭氏染色呈陰性，苯胺類色素易著色。
1．3 生物學(xué)特征
附紅細(xì)胞體的發(fā)育過程及傳播途徑還不清楚，但可以肯定附紅細(xì)胞體主要在宿主紅細(xì)胞上以二分裂法進(jìn)行繁殖[1]?，F(xiàn)已證實(shí)豬虱、鱗虱、伊蚊、庫蟻、吸血蠅等可為家畜附紅細(xì)胞體病的傳播媒介[17-19]，認(rèn)為節(jié)肢動(dòng)物是終未宿主，豬是中間宿主，附紅細(xì)胞體在豬血液中進(jìn)行裂殖增殖[20]。劉興發(fā)等[21]（1997）在對附紅細(xì)胞體人畜感染及傳播途徑的調(diào)查后認(rèn)為，豬、奶牛和人附紅細(xì)胞體感染可通過垂直途徑傳播，而雞的附紅細(xì)胞體感染不能經(jīng)卵垂直傳播，認(rèn)為垂直傳播和血源傳播是人感染附紅細(xì)胞體的主要途徑。附紅細(xì)胞體在體外不能純培養(yǎng)，但可在體外進(jìn)行增殖培養(yǎng)。律祥君等[22]報(bào)道感染豬全血與健康豬全血等量混合后經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋，在37℃厭氧培養(yǎng)96h時(shí)豬附紅細(xì)胞體的增殖效果最好，厭氧條件下加細(xì)胞培養(yǎng)液和感染豬全血，未見附紅細(xì)胞體有明顯增殖。Nonakal 等 [23] 報(bào)道豬附紅細(xì)胞體在厭氧或5%CO2條件下，可在含10%小牛血清的rEM培養(yǎng)液中生長，rEM中加入肌苷可使細(xì)胞保持完整性，并促使附紅細(xì)胞體吸附于紅細(xì)胞。在體外，附紅細(xì)胞體對低溫抵抗力較強(qiáng)，在4℃的血液中可存活1個(gè)月，不受紅細(xì)胞溶解的影響，-80℃時(shí)可存活80d，感染血液中加入二甲基亞砜（DMSO）和10%甘油或10%馬血清，可在液氮或-70℃長期保存。但附紅細(xì)胞體對干燥和化學(xué)消毒藥品抵抗力較弱 [1] 。
2．診斷學(xué)
可根據(jù)流行病學(xué)特征、臨床癥狀、血常規(guī)檢查及病理剖檢等做出初步診斷，確診需查見病原、特異性抗體或DNA片段等。
2．1 光鏡鏡檢
是診斷本病最基本的方法。根據(jù)臨床癥狀需要可選用壓滴法、血片染色法等。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)為，在1000倍油鏡下觀察20個(gè)視野，發(fā)現(xiàn)附紅細(xì)胞體則判為陽性，其中將附有蟲體的紅細(xì)胞占全部紅細(xì)胞的10%以下判為“＋”；10%～~50%判為“＋＋”；50%～75%判為“＋＋＋”；75%以上判為“＋＋＋＋”；20個(gè)視野均未見附紅細(xì)胞體判為陰性 [4，16，21] 。
2．2 動(dòng)物試驗(yàn)
用可凝動(dòng)物或人的血液，經(jīng)腹腔、肌肉或靜脈接種小鼠、兔和雞等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，然后觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的病狀，并采血檢查附紅細(xì)胞體?；?qū)⒖赡齽?dòng)物和脾臟摘除，然后觀察其癥狀，并從血液中檢查病原[4，24]。本法有一定的輔助診斷意義，常用于附紅細(xì)胞體病的實(shí)驗(yàn)性研究。
2．3  免疫學(xué)診斷
1）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）  Splitter首先用于診斷豬附紅細(xì)胞體病，急性病型效果好。臨床發(fā)病后第3天，患畜血清即顯陽性反應(yīng)，2-3周后漸轉(zhuǎn)為陰性，但慢性帶菌者顯陰性反應(yīng)。Daddow[25]（1997）用感染有綿羊附紅細(xì)胞體的陽性血液反復(fù)凍融，離心沉淀后超聲波裂解制作抗原，建立了檢測綿羊附紅細(xì)胞體抗體的CFT試驗(yàn)，該法可用于羊群的檢測，但不適用于個(gè)體的診斷。Norris[26]（1987）也建立了檢測綿羊附紅細(xì)胞體抗體的CFT試驗(yàn)。
2）間接血凝試驗(yàn)（IHA）  Smith（1975）[27]首先建立該法用于檢測豬附紅細(xì)胞體的抗體，IHA滴度1：40為陽性，靈敏度較高，能檢出CFT反應(yīng)轉(zhuǎn)陰的耐過豬。Baljer[28]（1989）應(yīng)用該法對實(shí)驗(yàn)性感染豬附紅細(xì)胞體后豬血清中抗體的消長規(guī)律進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示抗體在隱性感染時(shí)基本不產(chǎn)生，急性感染時(shí)升高，持續(xù)2個(gè)月后降到最低，然后隨著臨床癥狀的重現(xiàn)而再次上升。
3）簡接熒光抗體法（IFA）  該法最早用于診斷牛附紅細(xì)胞體病，抗體于接種后第4天出現(xiàn)，隨著寄生率的上升，在第28天達(dá)到高峰，較血液涂片法敏感 [29] 。也可用于綿羊附紅細(xì)胞體的檢測 [30] 。
4）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）  1996年Lang等用去掉紅細(xì)胞的綿羊附紅細(xì)胞體抗原對羊進(jìn)行ELISA檢測，認(rèn)為此法比IHA的敏感性高8倍。用此法檢測豬，敏感性高于IHA法，且特異性好，不與豬和牛的其他疾病發(fā)生交叉反應(yīng)，但此法不適于小豬和公豬的診斷，也不適于急性期的診斷[31，32]。用此法也可檢測牛的溫氏附紅細(xì)胞體感染[33]。
2．4 分子生物學(xué)診斷
應(yīng)用DNA探針技術(shù)和PCR技術(shù)等分子生物學(xué)方法診斷或檢測附紅細(xì)胞體病的報(bào)道始于上世紀(jì)90年代。1991年Oberst用噬菌體gtll構(gòu)建了豬附紅細(xì)胞體的DNA文庫，并篩選出KSU-2克隆作為診斷用探針，能與從陽性豬血提取的DNA發(fā)生雜交反應(yīng)，但不與從陰性豬血、貓血通氏體陽性貓血、犬血巴通氏體陽性犬血和牛邊緣邊蟲（Anaplasma marginale）陽性牛血中提取的DNA發(fā)生雜交反應(yīng)，隨后Oberst又利用PCR-DNA雜交技術(shù)分別檢測了實(shí)驗(yàn)感染和自然暴發(fā)的豬附紅細(xì)胞體病豬血液中的病原體[34]。Gwaltney[35]（1993）用組織原位染交和電鏡相結(jié)合的方法檢測了血液樣品中的附紅細(xì)胞體，建立了檢測豬附紅細(xì)胞體的PCR方法，其最低檢測基因組量為450pg，且優(yōu)于IHA。Messick[36]（1999）首次用針對豬附紅細(xì)胞體16SrRNA基因的3對特異性引物建立了PCR方法，其最低檢測量為57個(gè)豬紅細(xì)胞體，且特異性強(qiáng)。Vandervoort(2001)[37] 建立了檢測牛溫氏附紅細(xì)胞體的RCR方法，其敏感性較血液涂片法高，甚至可檢測出血液涂片為陰性的病例。
3、結(jié)語
附紅細(xì)胞體的首次發(fā)現(xiàn)至今已有近80年，但過去由于其對人和動(dòng)物感染的普遍性及臨床發(fā)病的不顯性，所以沒有引起重視。近年來隨著人體病例的增多及畜群中普遍多發(fā)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失，才逐漸引起了醫(yī)學(xué)界和獸醫(yī)界的重視。但目前國內(nèi)大部分研究僅局限于該病的流行病學(xué)調(diào)查、診斷和治療等，有關(guān)病原的分類、宿主特異性與交叉感染性、發(fā)育過程、體外培養(yǎng)、分子生物學(xué)特性等研究尚缺乏或不夠深入，生產(chǎn)實(shí)踐中也無行之有效的控制方法。基于該病的隱性感染很高，潛在的危害性很大，且具有人畜共患的特性，因此應(yīng)進(jìn)行深入細(xì)致的研究。

sdjgq

文章很好.只是你的區(qū)域性不對呀.應(yīng)該發(fā)到豬區(qū)里.或是疾病防治里.