動(dòng)物性飼料體外蛋白質(zhì)消化率測(cè)定的關(guān)鍵控制點(diǎn)

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  以下是本人在網(wǎng)上找到的一篇文章，可是這篇文章中直說樣品放在搖床上，可是搖得速度或震蕩的速度是多少？我以前也在化驗(yàn)室室做過這方面的很多試驗(yàn)，可是不同的速度會(huì)有不同的結(jié)果！請(qǐng)問速度到底是多呢？

動(dòng)物性飼料體外蛋白質(zhì)消化率測(cè)定的關(guān)鍵控制點(diǎn)


隨著我國養(yǎng)殖業(yè)和飼料工業(yè)的迅速發(fā)展，常規(guī)蛋白質(zhì)飼料資源如魚粉、豆粕等越來越短缺，飼料原料的質(zhì)量很不穩(wěn)定，摻假、使雜現(xiàn)象嚴(yán)重。副產(chǎn)品如羽毛粉、血球粉等由于采用的加工工藝不同，盡管蛋白質(zhì)含量很高（70%~80%，甚至高達(dá)90％），但其消化率變動(dòng)范圍很大。我們實(shí)驗(yàn)室近3年共對(duì)近百個(gè)魚粉、肉粉、肉骨粉和羽毛粉樣品進(jìn)行了體外消化率的測(cè)定，魚粉和肉骨粉的結(jié)果范圍為63.2%～96.8％，羽毛粉為20.2%～78.3％。盡管優(yōu)質(zhì)純魚粉的消化率達(dá)90％以上，但摻入羽毛粉、血粉等后，魚粉從常規(guī)分析蛋白質(zhì)含量夠，但使其消化率大大下降，有的僅60％左右，因此，評(píng)定動(dòng)物性飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，除了常規(guī)分析指標(biāo)粗蛋白、鈣和磷等，其消化率是一個(gè)很重要的評(píng)價(jià)指標(biāo)。
    通過動(dòng)物試驗(yàn)評(píng)定飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值費(fèi)時(shí)費(fèi)力，成本較高。目前我國已經(jīng)頒布的GB/T17811-1999《動(dòng)物蛋白質(zhì)飼料消化率的測(cè)定 胃蛋白酶法》，是相對(duì)于動(dòng)物性試驗(yàn)的簡(jiǎn)便、快速評(píng)價(jià)方法。但在使用這一方法時(shí)，由于對(duì)方法的理解和掌握不夠，導(dǎo)致不同實(shí)驗(yàn)室間的測(cè)定結(jié)果差異很大。現(xiàn)將測(cè)定過程中的關(guān)鍵控制點(diǎn)介紹如下。
1 方法的適用范圍
    該方法僅適合于動(dòng)物性蛋白質(zhì)飼料，如魚粉、肉骨粉、羽毛粉、酵母粉、血粉等體外消化率測(cè)定。該方法不適合用于植物蛋白質(zhì)飼料原料（如豆粕、菜籽粕、棉籽粕及其它雜粕）或配合飼料，因?yàn)樗鼈冎写嬖诘膹?fù)雜碳水化合物如纖維性物質(zhì)及淀粉等會(huì)干擾胃蛋白酶對(duì)蛋白質(zhì)的消化。
2 樣品選取和制備
    選取有代表性的樣品，粉碎并全部過20目篩（孔徑0.9 mm）。注意事項(xiàng)：①不能過細(xì)，也不能過粗。因?yàn)闃悠返姆鬯榱６戎苯佑绊懴实母叩?，粉碎過細(xì)，單位質(zhì)量樣品的接觸面積增加，會(huì)導(dǎo)致消化率結(jié)果偏高；反之，則會(huì)導(dǎo)致結(jié)果偏低。②不能只取篩下物去做分析測(cè)定，因?yàn)楹Y下物的樣品不能完全代表待檢樣品。因此要讓樣品全部通過20目篩，混勻后再進(jìn)行測(cè)定。
3 試劑和溶液配制
3.1 2g/l胃蛋白酶溶液的配制
    ①移取6.1ml濃鹽酸，加蒸餾水稀釋至1 000ml；②將上述稀鹽酸加熱升溫至42～45℃，取下，然后加入2g活性為1：10 000生化級(jí)胃蛋白酶，輕輕地?cái)噭?dòng)，使其溶解。
3.2 注意事項(xiàng)
    ①所用的胃蛋白酶必須為生化級(jí)，如果有條件的，最好對(duì)其活性進(jìn)行實(shí)測(cè)。如果其活性為1：3 000或其它規(guī)格，應(yīng)按照活性比例，相應(yīng)增加或減少酶的用量，使胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶的活性為20IU/ml。因?yàn)槲傅鞍酌溉芤褐忻富钚缘母叩椭苯佑绊懴实母叩?。如果與標(biāo)準(zhǔn)偏離，測(cè)定結(jié)果將無可比性，失去參考價(jià)值。②溶液一定要現(xiàn)用現(xiàn)配，避免配制時(shí)過熱，注意勿在加熱板或電爐上直接加熱胃蛋白酶溶液，否則會(huì)使沉于燒杯底部的酶直接局部過熱而失活。
4 測(cè)定步驟及注意事項(xiàng)
4.1 測(cè)定步驟
    稱取試樣1g（精確至0.000 1ｇ）于300ml具塞三角瓶中，準(zhǔn)確加入42～45℃的2g/l胃蛋白酶溶液150ml，加塞，置于搖床，45℃條件下消化16h。消化后殘?jiān)脼V紙過濾，并用蒸餾水洗凈濾紙上的未消化殘?jiān)?，然后將未消化殘?jiān)B同濾紙一起轉(zhuǎn)入凱氏消化管，按照凱氏定氮方法測(cè)定粗蛋白質(zhì)含量。同時(shí)測(cè)定樣品中粗蛋白。根據(jù)樣品中粗蛋白含量與未消化殘?jiān)写值鞍踪|(zhì)含量之差與樣品中粗蛋白含量的比值計(jì)算得出體外消化率的結(jié)果。
4.2 注意事項(xiàng)
    ①如果樣品的脂肪含量達(dá)1%~10％，最好脫脂；含脂肪大于10％，則必須脫脂，否則脂肪會(huì)影響測(cè)定結(jié)果。另外，脫脂后的樣品需干燥后再稱樣測(cè)定。②胃蛋白酶的活性高低與溫度有密切關(guān)系，42～45℃條件下活性較高。如果溫度過高會(huì)使酶失去活性；反之，會(huì)使酶的活性降低。因此，消化用的搖床或烘箱的溫度一定要控制準(zhǔn)確，最好經(jīng)過溫度校準(zhǔn)。③在pH值和溫度一定的條件下，消化時(shí)間的長(zhǎng)短是影響消化率的一個(gè)關(guān)鍵因素。消化時(shí)間越長(zhǎng)，消化率越高；反之，消化率越低。為了使所獲得的數(shù)據(jù)結(jié)果具有良好的可比性，要嚴(yán)格控制消化時(shí)間。④如果基層實(shí)驗(yàn)室沒有恒溫平轉(zhuǎn)搖床，也可在45℃恒溫烘箱中進(jìn)行消化，但消化的最初4h，每0.5h搖動(dòng)1次；4～8h，每1h搖1次。

    我們選取了2個(gè)魚粉和1個(gè)羽毛粉樣品，對(duì)在烘箱和搖床上的測(cè)定進(jìn)行了比較試驗(yàn)，結(jié)果見表1。從表1結(jié)果可以看出，同一樣品在搖床和烘箱中進(jìn)行消化測(cè)定結(jié)果無顯著差異，烘箱中測(cè)定結(jié)果略低于恒溫平轉(zhuǎn)搖床上的測(cè)定結(jié)果。
5 結(jié)果及判斷
    如果嚴(yán)格掌握好以上實(shí)驗(yàn)條件，就可以獲得準(zhǔn)確且具有良好重現(xiàn)性的結(jié)果見表2。
一般來講，魚粉的消化率應(yīng)不低于85％，優(yōu)質(zhì)魚粉應(yīng)該在90％以上，而飼用羽毛粉的消化率應(yīng)不低于75％。

參考文獻(xiàn)
1 GB/T17811-1999 動(dòng)物蛋白質(zhì)飼料消化率的測(cè)定.胃蛋白酶法
2 Journal of Association of Official Analytist Chemists, 1971, 54:669

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不錯(cuò)的資料，我們正想開展這方面的檢測(cè)。