魚(yú)類(lèi)細(xì)菌性疾病

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三、魚(yú)類(lèi)細(xì)菌性疾病
3.5. Red spot diseases (赤點(diǎn)病)
本病正如其病名，以體表的點(diǎn)狀出血為其特徵。70年代初期首次被報(bào)告的，比較新的鰻魚(yú)細(xì)菌性疾病。本病不僅在臺(tái)灣、日本經(jīng)常發(fā)生，80年代初期在英國(guó)也有此病的發(fā)生報(bào)告。
(1)病   因
        此病的病原菌乃由Wakabayashi和Egusa所報(bào)告的Pseudomonas anduilliseptica。此菌屬Gram陰性的短桿菌(0.5×1～3μm)。具有單鞭毛，有運(yùn)動(dòng)性。倍培養(yǎng)溫度超過(guò)25度以上時(shí)，運(yùn)動(dòng)性變?nèi)趸蛳АＪ褂闷胀ㄅ囵B(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)，細(xì)菌增長(zhǎng)速度緩慢，20度培養(yǎng)2～3天後，方產(chǎn)生直徑1mm左右的透明，具光澤且黏稠性的菌落。培養(yǎng)溫度范圍是5～30度，至適溫度15～20度。培養(yǎng)pH值范圍是5.3～9.7，至適pH值7～9。培養(yǎng)食鹽濃度范圍是0.1～0.4％，至適食鹽濃度是0.5～1％。本菌在淡水中生存日數(shù)不超過(guò)一天以?xún)?nèi)就死亡，但在海水或稀釋海水中可生存200天以上而不死亡。
(2)癥   狀
        病鰻皮膚，特別在下顎、腹部及肛門(mén)內(nèi)周?chē)钠つw有顯著的點(diǎn)狀出血。因病原菌侵入表皮基底膜或在真皮繁殖，使分布在表皮基底膜及真皮組織內(nèi)的毛細(xì)血管充血，發(fā)生滲出性出血或破綻(裂)性塊狀出血病變。此外，尚可見(jiàn)鰭的出血，肝臟郁血，脾臟褪色萎縮，腎臟萎縮，腸管、胃變赤，腹膜點(diǎn)狀出血。有的病例可見(jiàn)各內(nèi)臟貧血現(xiàn)象。
(3)診   斷
        根據(jù)病鰻典型的體表點(diǎn)狀出血之病理特徵，大概可以診斷為本病。但有些病魚(yú)的癥狀和其他細(xì)菌性疾病的癥狀類(lèi)似，因此尚需進(jìn)行細(xì)菌學(xué)診斷。
將疑似本病的鰻魚(yú)的肝、脾、腎臟或血液，用普通培養(yǎng)基培養(yǎng)進(jìn)行細(xì)菌分離。20度2天培養(yǎng)後，如有透明感的菌落出現(xiàn)，則可進(jìn)一步鑒定是否為本病原菌。用凝集反應(yīng)和直接免疫營(yíng)光法可以同定本病原菌。
(4)對(duì)   策
        飼養(yǎng)水溫保持在26～27度，池水盡可能使用淡水等是有效的對(duì)策手段。但保持水溫必增加燃料投資。理想的預(yù)防措施是使用疫苗，但實(shí)用性的疫苗尚待開(kāi)產(chǎn)。
Chloramphenical等抗生素對(duì)本菌雖有較強(qiáng)的殺傷作用，但在養(yǎng)鰻場(chǎng)使用抗生素治療是有實(shí)際困難的。因?yàn)楸静摲谳^長(zhǎng)，當(dāng)發(fā)病時(shí)，病魚(yú)大都已失去食欲，經(jīng)口投藥效果甚差。另外，本病常發(fā)生於剛剛過(guò)冬時(shí)，此時(shí)，鰻魚(yú)尚未開(kāi)始攝食，也是經(jīng)口投藥效果不佳的原因之一。
因此，設(shè)備完善的養(yǎng)殖池，可將水溫提高到26度，同時(shí)投藥治療，一般都會(huì)收到較好的治療效果。
　
3.6. Pasteureliosis (巴斯德桿菌癥)
本病1969年6月在日本西部 魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)首次流行發(fā)生過(guò)，以脾臟出現(xiàn)多數(shù)，明顯的小白點(diǎn)為特徵，隔年，日本全國(guó)都流行發(fā)生本病，而且每年均有反復(fù)發(fā)生，被害甚大。
(1)病   因
        病原菌首次由本村和北尾兩位專(zhuān)家所分離，在美國(guó)大西洋岸也分離出同一性狀的病原菌。本病原菌Pasteurella piscide屬Gram陰性短桿菌(0.6～1.2×0.8～2.6μm)。但隨著培養(yǎng)條件的變化，有的呈球狀，有的呈長(zhǎng)桿狀。此菌無(wú)運(yùn)動(dòng)性，無(wú)芽胞。
        在普通培養(yǎng)基上，本病生長(zhǎng)不良。在血液培養(yǎng)基(含1.5～2.0％食鹽)上，則繁殖良好。BHI培養(yǎng)基上的菌落呈圓形、無(wú)色、半透明、露滴狀，且有黏稠性，在MaConky培養(yǎng)基上增殖良好，但在SS、BTB培養(yǎng)基上不繁殖。培養(yǎng)溫度范圍是17～32度，至適溫度25～30度。培養(yǎng)pH值范圍6.8～8.8，至適pH值7.5～8.0。培養(yǎng)食鹽濃度范圍0.5～5.0％，至適食鹽濃度2～3％。
(2)癥   狀
        病況進(jìn)行急速，病魚(yú)先失去食欲，然後離開(kāi)魚(yú)群，游入水池底部靜止不動(dòng)而死亡。體表稍變黑，除了魚(yú)鱗脫落的體表有顯著的變色外，無(wú)其他可見(jiàn)的變化。剖解時(shí)，可見(jiàn)脾、腎臟上有多數(shù)的小白點(diǎn)，其他如心臟、肝臟、腸間膜、腹膜、鰾、鰓有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)較少數(shù)的小白點(diǎn)。白點(diǎn)大小自針頭大至直徑數(shù)厘米大，但大多數(shù)在1厘米左右。白點(diǎn)為一個(gè)大菌落或幾個(gè)小菌落所組成，多被纖維組織包圍形成結(jié)節(jié)樣構(gòu)造，內(nèi)部細(xì)菌則已死亡。這些菌落乃由於細(xì)菌耐過(guò)白血球，內(nèi)皮網(wǎng)狀細(xì)胞之吞食後，在病變部位繁殖起來(lái)的。在毛細(xì)血管及間質(zhì)組織內(nèi)，細(xì)菌雖然增殖快，但因不產(chǎn)生菌素，故對(duì)實(shí)質(zhì)組織沒(méi)有太大的影響。
(3)診   斷
        內(nèi)臟出現(xiàn)小白點(diǎn)的病變除本病以外，還有Nocardiosis，Ichthyophthyriasis。本病在肌肉中不形成結(jié)節(jié)或膿瘍，且肝臟及腎臟也不腫大，因此肉眼可以與Nocardiosis， Ichthyophthyriasis之發(fā)生區(qū)別。
確切的診斷還需以細(xì)菌檢查，血液涂抹標(biāo)本及病變組織直接涂抹片等方法為輔助。如有兩端濃染的桿菌，則可判是本病。
(4)對(duì)   策
        因?yàn)閭魅緛?lái)源乃保菌魚(yú)、非海水，因此預(yù)防上，重點(diǎn)要盡快地除去重癥魚(yú)及病死魚(yú)。
Chloramphenical，Tetracyclin等抗生素對(duì)本病原菌有效，但磺胺劑則沒(méi)有殺菌效果。在梅雨期的易流行的季節(jié)里，應(yīng)進(jìn)行投藥預(yù)防措施，減少發(fā)病。
　
3.7. Bacterial gill disease (細(xì)菌性鰓病)
鰓組織表面上因長(zhǎng)桿菌繁殖，刺激而引起的上皮細(xì)胞異常增生使鰓薄板愈合為本病的特徵。
(1)病   因
        Flavobacterium sp.是屬於Gram陰性長(zhǎng)桿菌(0.3～0.5×5～15μm)，無(wú)運(yùn)動(dòng)性。分離時(shí)，一般使用cytophaga培養(yǎng)基，於18度培養(yǎng)5天後，可形成直徑0.5mm、淡黃色、半透明的微小菌落。菌落周?chē)鷪A滑，加入5％仔牛血清將促進(jìn)細(xì)菌生長(zhǎng)。培養(yǎng)溫度是10～25度，食鹽濃度是0～0.05％。
(2)癥   狀
        病魚(yú)食欲減退，離開(kāi)魚(yú)群，浮於水面。病狀加劇後，分泌多量的黏液，將鰓蓋覆蓋使鰓郁血、腫脹。組織病理學(xué)所見(jiàn)，鰓組織細(xì)菌增殖，上皮細(xì)胞增生，特別是從鰓薄板先端開(kāi)始，最後漸擴(kuò)散到鰓板全體，使鰓薄板完全愈者，鰓瓣變?yōu)榘魻?。以上病變，阻害血液中二氧化碳與水中氧氣的交換，使魚(yú)的呼吸受阻害，是魚(yú)死亡的原因。
(3)診   斷
        采集鰓瓣的一部份直接進(jìn)行顯微鏡檢查，確認(rèn)有無(wú)細(xì)長(zhǎng)的細(xì)菌存在，上皮細(xì)胞的增生，及鰓薄板的愈合，就可以初步斷定本病。菌數(shù)不多或與組織緊密附著不能直接觀察時(shí)，則將采集的組織放在載玻片上涂抹，經(jīng)固定、染色後再用顯微鏡檢查。
(4)對(duì)   策
        避免過(guò)密飼養(yǎng)是相當(dāng)重要的。預(yù)防措施過(guò)去常用硫酸銅，有機(jī)水銀制劑來(lái)治療，但依公共衛(wèi)生上而言現(xiàn)已廢棄不用了。目前一般可用過(guò)錳酸鉀(1～2ppm)，1小時(shí)藥浴。在日本用5％食鹽水浸漬2分鐘的方法也是非常有效且安全的。但規(guī)模大的養(yǎng)殖池則需消耗大量的食鹽。
　
3.8. Columnaris disease
        被Flexibacter columnaris感染的魚(yú)，首先在與外界接觸的器官：鰓、鰭、皮膚上出現(xiàn)病變。隨魚(yú)的種類(lèi)、年齡等因素，病變常常出現(xiàn)於魚(yú)體不同的部位。因此常被稱(chēng)之為gill diseases、cotton mouth等。此病不僅在日本，而且在美國(guó)、加拿大及歐洲都有發(fā)生。在美國(guó)和加拿大被稱(chēng)之為summer disease。發(fā)病魚(yú)種多，危害甚大。
(1)病   因
        病原體是Flexibacter columnavis，屬Gram陰性長(zhǎng)桿菌(0.5～0.7×4～8μm)。長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)後，細(xì)菌形狀不一，有的呈細(xì)長(zhǎng)形、波浪狀或輪狀。此菌雖無(wú)鞭毛，但具有特異的運(yùn)動(dòng)性，即菌體一端固定，另一端擺動(dòng)的屈曲運(yùn)動(dòng)和在培養(yǎng)基或載玻片上的滑走運(yùn)動(dòng)。
使用Cytophaga、TY培養(yǎng)基分離時(shí)，菌落呈周?chē)鷺?shù)根狀、黃色扁平的菌落。用液體培養(yǎng)基靜止培養(yǎng)時(shí)，液表面上形成一層黃色的強(qiáng)韌膜。培養(yǎng)溫度范圍是5～35度，至適溫度27～28度。培養(yǎng)pH值范圍是6.5～8.5，至適pH值7.5左右。培養(yǎng)食鹽濃度0.5時(shí)發(fā)育良好，超過(guò)2％時(shí)將不發(fā)育。
(2)癥   狀
        癥狀隨魚(yú)種多少有些差異。首先在鰭、嘴吻、鰓板的先端或體表上出現(xiàn)黃白色的小斑點(diǎn)，然後漸次擴(kuò)大。體表的患部周?chē)兂啵挵紫榷肆验_(kāi)。鰓黏液分泌劇增，鰓葉變成帚狀，部分出現(xiàn)脫落。其他內(nèi)臟一般正常。
        皮膚患部因病原菌增殖，使真皮組織內(nèi)毛細(xì)血管充血，最後破裂引起出血。真皮壞死時(shí)，魚(yú)鱗將脫落。
鰓板被病原菌感染，導(dǎo)致病魚(yú)呼吸困難，是致死的原因。本病和3.7.的Bacterial gill disease不同之處是鰓組織容易出現(xiàn)壞死現(xiàn)象。
(3)診    斷
        病變僅限於體表，易從外觀觀察病變來(lái)診斷。與霉菌感染有類(lèi)似病變，但病巢表面上無(wú)霉菌感染之特異毛狀菌絲，卻附著黃色的黏液。鰓有病巢時(shí)，打開(kāi)鰓蓋，也可以觀察到同樣的癥狀。從患部采集黏液，用400倍的顯微鏡，可以觀察到正在做滑走及屈曲運(yùn)動(dòng)的多數(shù)細(xì)長(zhǎng)菌體，開(kāi)始分散的菌體互相結(jié)合變成特異的圓柱狀。
病原菌的分離，培養(yǎng)將從患部采集的黏液涂抹於Cytophaga或TY培養(yǎng)基上，於25度培養(yǎng)48個(gè)小時(shí)。根據(jù)菌落的形態(tài)，基本上可以判斷為本菌。通常以抗血清，用凝集反應(yīng)來(lái)做輔助診斷。
(4)對(duì)   策
        本病乃接觸而感染，特別是鰓及皮膚有損傷時(shí)易感染，因此流行期盡可能避免撈取或移動(dòng)魚(yú)。
治療使用藥浴最有效。發(fā)病初期可以用磺胺劑及抗生素經(jīng)口治療。雖有疫苗的研究報(bào)告，但距實(shí)用階段尚待進(jìn)一步開(kāi)發(fā)。
　
四、
4.7. 鯉魚(yú)鶪疹病毒感染癥 (Herpesirus Infection of Carp)
本癥是由病毒感染所引起的表皮性腫瘍，俗稱(chēng)鯉魚(yú)痘(carp poo)，雖在1964年已由Schubert以電子顯微鏡在病變組織內(nèi)發(fā)現(xiàn)了病毒顆粒，但病毒的分離直到1984年始由Sano完成。
(1)病   因
        由Herpesvirus cypirini所感染，本病的分離以EPC、FHM等細(xì)胞株，接種腫瘍組織的過(guò)濾上清，在20℃經(jīng)2～3星期後，出現(xiàn)圓形化的病變細(xì)胞，并漸次細(xì)胞融解，在EPC細(xì)胞內(nèi)可出現(xiàn)核內(nèi)包涵體(即Cowdry type A)。
(2)癥   狀
        本病多發(fā)生在2公斤左右的成魚(yú)，於口吻周?chē)Ⅵ?、皮膚等部位常發(fā)現(xiàn)突起腫瘤，不大引起死亡，卻對(duì)觀賞用的錦鯉魚(yú)造成觀賞價(jià)值的損失。組織病學(xué)上的病變，屬上皮乳頭腫(epithelial papilloma)，人工接種後所形成的腫瘤也有相同的組織變化。
(3)診   斷
        本癥病理組織變化屬epitealial papilloma的腫瘤構(gòu)造，以病理診斷非常容易，但病毒的分離率依Sano等人自1981～1983年間，由8個(gè)病例成功地分離來(lái)看，如果能以病毒分離來(lái)輔助診斷則更能確診。本病毒由Sano等人更證實(shí)人工感染鯉魚(yú)經(jīng)10個(gè)月有50～70％的再現(xiàn)率。
(4)對(duì)   策
        本病毒在魚(yú)體內(nèi)呈不顯性的終身感染(latent infection)，去除本病毒的再傳染在目前是相當(dāng)困難的事。養(yǎng)殖池的一般衛(wèi)生管理仍是不可缺少的重要工作。
　
4.8. 鰻魚(yú)病毒感染癥 (Viral Infection in Eel)
自鰻魚(yú)已分離的病毒很多，由於其病原性及疫學(xué)多未確定，在此僅列表於表三(7月份刊出)并稍加說(shuō)明。
由歐洲鰻(在歐洲所捕獲的幼鰻)之腎臟所分離的EVE病毒，其特性和前述的IPN(French 21 Strain)病毒一致，而且稍後也在日本鰻(在日本、亞洲各國(guó)所擄獲的幼鰻)被分離到，EVE病毒主要引起鰻魚(yú)之腎臟充出血，腎小管內(nèi)蛋白滲出物出現(xiàn)及肝脾之壞死 ，鰓發(fā)紅、充出血等病變。由美洲鰻所分離的EVA病毒已知屬Rhabdovirus，臨床癥狀與歐洲EVE病毒類(lèi)似，在日本曾發(fā)生自古巴進(jìn)口的幼鰻死亡例子。
4.9. 病毒性紅血球壞死癥 (Viral Erythrocytic Necrosis)
本癥舊稱(chēng)魚(yú)紅血球壞死癥(PEN)，現(xiàn)以VEN稱(chēng)之。
(1)病   因
        本病毒屬I(mǎi)ridoviridae的DNA病毒，病毒顆粒大小，不同報(bào)告有很大的差異，Walker (1971)在鱈魚(yú)的報(bào)告是330nm，及在鶼魚(yú)的155nm，白鮭魚(yú)的230nm。但病毒的分離尚未成功。
(2)癥   狀
        在感染魚(yú)的紅血球細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，可見(jiàn)1～4μ的嗜鹼性包函體為主要病徵，感染嚴(yán)重的病魚(yú)，其紅血球90～100％都有包涵體。由於紅血球嚴(yán)重的被破壞，死亡的魚(yú)所呈顯著貧血，病魚(yú)的紅血素值多降至2～10％左右。在一感染魚(yú)群，各慢性至急性病程都同時(shí)可被發(fā)現(xiàn)，特別是弧菌癥混合感染時(shí)，其死亡率、型態(tài)趨於復(fù)雜。
(3)診   斷
        因本病的病毒尚未分離成功，故其診斷得以血液抹片來(lái)檢查，抹片以Giemza或 Wright染色，在光學(xué)顯微鏡就可發(fā)現(xiàn)紅血球的質(zhì)內(nèi)包涵體。最終的確可利用電子顯微鏡檢查出iridovirus病毒顆粒的特徵。病毒顆粒大小，直徑154～300nm。
(4)對(duì)   策
        本病的傳播機(jī)序尚未十分明了，防治之對(duì)策只能依病毒疾病的一般措施進(jìn)行。
4.10. 魚(yú)病毒學(xué)的一般實(shí)驗(yàn)技術(shù)
(1)細(xì)菌之培養(yǎng)
        病毒分離所用的細(xì)胞，應(yīng)正值分裂旺盛的正常細(xì)胞，且需同時(shí)使用2種細(xì)胞株供分離。細(xì)胞株應(yīng)事先且定期確定未被Mycoplasma所污染。培養(yǎng)液內(nèi)添加penicillin 100 IU／ml和Streptomycin 100μg／ml，或Gentamycin 100μg／ml和Mycostatin 25 mg／ml。
(2)病材之采取及處理

(a)自5尾病魚(yú)所采的病材，同一器官組織同時(shí)一起做成一個(gè)接種乳劑。盡可能的話，應(yīng)采有上述之2個(gè)接種乳劑。
(b)同時(shí)采取不同魚(yú)群的病材供比照。
(c)病材之采取應(yīng)根據(jù)下列之原則：
1. 孵化不久的幼魚(yú)得除去卵黃，使用全魚(yú)化驗(yàn)。
2. 5cm未滿的幼魚(yú)，采取包括腎在內(nèi)的全部?jī)?nèi)臟器官。
3. 5cm以上的成魚(yú)，只要采取脾及腎。
(d)為輸送及保存上的需要，可加入含倍量的抗生素的pH7.0～7.8緩沖液。
(e)為抑制及減少供檢材料之被污染，添加含800IU／ml之penicillin及800μg／ml之streptomycin，400units／ml之mycostatin緩沖液，在室溫2小時(shí)，或4℃一夜緩慢攪拌，或乳劑通過(guò)0.45μm小大的milipone。

(3)接種及培養(yǎng)
依各所使用的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿大小來(lái)接種多少量的乳劑，但至少每一個(gè)乳劑應(yīng)接種2個(gè)培養(yǎng)瓶(皿)，培養(yǎng)時(shí)間應(yīng)至少觀察14日以上。培養(yǎng)溫度如下：

(a)IHN、IPN、VHS病毒15℃。
(b)CCV病毒27～30℃。
(c)Herpesvirus salmonis病毒5～10℃。

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