復(fù)合BFA對雛雞生長性能及免疫力影響的研究

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復(fù)合BFA對雛雞生長性能及免疫力影響的研究 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 系 別：動物科技學(xué)院 專 業(yè)：動物主產(chǎn) 方 向：家禽營養(yǎng)與免疫 研究生：陳寶江 導(dǎo) 師：谷子林 研究員 一九九八年六月 中國•保定•河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 摘要 　　選用651只尼克紅蛋公雛隨機(jī)分為7組，在飼料中分別添加不同組 合和劑量的BFA，研究其對雛雞增重、紅白細(xì)胞變化、血紅蛋白量、胸 腺、脾、法氏囊發(fā)育及ND抗體水平影響大小及機(jī)制。結(jié)果表明： 　　1．各試驗(yàn)組體重較對照組分別增加 13.5%、 6.3%、 35.3%、 27.3%、 5.9%、 8.3%，差異極顯著，其中血紅蛋白含量與體重呈強(qiáng) 正相關(guān)， r=0.6003(t>t0.01)。 　　2．各試驗(yàn)組與對照組相比綜合免疫能力明顯提高 　　( 1 )白細(xì)胞總數(shù)分別較對照組增加7.2%、 12.9%、 4.8%、 7.3%、 3.5%、 6.2%，其中：淋巴細(xì)胞增加14.01%、 14.73%、 6.03%、 9.11%、 1.45%、 5.70%； 嗜中性白細(xì)胞增加7.20%、 23.34%、 13.04% 15.60% 、 15.98%、 2l.36%，差異極顯著 (F>F 0.01)。 　　( 2 ) ND抗體水平分別增加了217.0%、 201.1%、 109.8%、 84.0%、 69.7%和84.8%，多重方差分析F>F 0.0l。 　　分析表明： CoBFA通過其Zn、 Se、 Vc、 Ve BFA幾種成分 協(xié)同作用相互補(bǔ)充，互相促進(jìn)，提高家禽血紅蛋白含量，促進(jìn)免疫器官 發(fā)育，綜合免疫能力提高，從而達(dá)到增重效果。綜合比較，以第III組即 CoBFA-3為最佳配方。 關(guān)鍵詞： CoBFA；雛雞；免疫力；增重； ND抗體；白細(xì)胞 前言 　　我國養(yǎng)雞歷史悠久，是一個養(yǎng)雞大國，據(jù)統(tǒng)計(jì)，到1995年，全國存欄雞20億只以上，年產(chǎn)蛋1676.7萬噸，占世界總產(chǎn)量42.85%，其中集約化養(yǎng)殖所占比例蛋雞達(dá)50%以上，而肉雞則達(dá)90%[1]。集約化養(yǎng)殖使家禽生 長快，飼料報(bào)酬高，生產(chǎn)能力強(qiáng)，但由于飼養(yǎng)密度大，環(huán)境變化等應(yīng)激因 素增多，使機(jī)體免疫機(jī)能衰退，生產(chǎn)力下降，對疾病，特別是一些烈性傳 染病抵抗力降低，使其傳播迅速，經(jīng)濟(jì)損耗大?，F(xiàn)在對疾病防治主要靠藥物和疫苗，，但實(shí)踐中往往達(dá)不到預(yù)期效果，其原因除藥物疫苗質(zhì)量外，常常是由于家禽本身免疫系統(tǒng)弱化造成的。 　　家禽機(jī)體主要靠皮膚、粘膜、體內(nèi)各種吞噬細(xì)胞及特異性抗體抵抗外 來侵害[2]，集約化飼養(yǎng)，常由于飼料中某些養(yǎng)分不充足或不平衡，使這些 保護(hù)屏障受損，免疫器官發(fā)育受阻，吞噬細(xì)胞、抗體產(chǎn)生能力下降，從而不能亢分發(fā)揮機(jī)體自身抗病能力和生產(chǎn)潛力。研究表明，各種營養(yǎng)素均可影響機(jī)體免疫力，其中Zn、 Se、 Vc、 VE。對其影響最大。 　　Zn是體內(nèi)100多種酶組成成分，對維護(hù)皮膚、粘膜完整、促進(jìn)免疫器 官生長發(fā)育具有重要作用；缺Zn會導(dǎo)致皮膚不完全角質(zhì)化，免疫器官(胸 腺、脾、法氏囊)生長受阻或退化。 　　Se是GSH-PX組成成分，GSH-PX可分解機(jī)體內(nèi)H202、ROOH 等過氧化物，防止它們對細(xì)胞膜的破壞[13][14][15]，同時可抵消血清內(nèi)皮質(zhì)酮 對淋巴細(xì)胞吞噬能力和體液免疫功能的抑制作用。 Vc是一種強(qiáng)還原劑，作為抗應(yīng)激、抗感染營養(yǎng)物，已被廣泛應(yīng)用，它主要是維持胸腺網(wǎng)狀細(xì)胞發(fā)育[43]，分解動物應(yīng)激狀態(tài)下產(chǎn)生的皮質(zhì)酮(一種免疫抑制劑和細(xì)胞毒素)，同時可促進(jìn)創(chuàng)口愈合。 　　VE的免疫作用機(jī)制在于拮抗H202、 ROOH亞硝基化合物生成 [41][3]，同時促進(jìn)Vc在體內(nèi)合成，促進(jìn)脾臟生長，使脾臟鞘動脈周圍網(wǎng)狀內(nèi) 皮系統(tǒng)生成吞噬細(xì)胞能力加強(qiáng)。 　　BFA為一種高分子有機(jī)酸，與其他天然黃腐酸具有相似結(jié)構(gòu)和功能， 其免疫上的功能在于殺菌、抑菌，止血，抗?jié)?，解毒，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生干擾素[23][25][26][57]，此外BFA抑制乙酰苯肼(APH)生成，減少體內(nèi)過氧化 物生成[28][29]。 理論上講， Zn、 Se、 Vc、 VE、 BFA都具有促生長，調(diào)節(jié)、提高 家禽免疫功能作用，但各有特點(diǎn)，相互補(bǔ)充。 Zn保護(hù)上皮粘膜完整，促進(jìn) 器官發(fā)育，促進(jìn)Vc吸收； Vc羥化分解皮質(zhì)酮； Se分解體內(nèi)ROOH、 H202、亞硝基化合物生成，促進(jìn)Vc體內(nèi)合成； BFA加快傷口愈合，同時， BFA具有良好的吸附性和承載性，可作為維生素、微量元素載體。由此可見，以上幾種成分在提高免疫功能上具有可加性，復(fù)合配制上具有可行性。 　　本研究選用尼克紅蛋公雛作為研究對象、以BFA為主要成份，制成含 Zn， Se、 Vc、 VE、的不同配方CoBFA，經(jīng)飼養(yǎng)試驗(yàn)、比較屠宰試驗(yàn)、血紅蛋白量、紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)及血清ND抗體滴 定度檢測，獲得雛雞綜合免疫能力和生產(chǎn)性能變化情況，為以后通過調(diào)節(jié)飼料養(yǎng)分，提高家禽自身抗病、抗逆能力提供科學(xué)依據(jù)。 1，材料與方法 1.1 試驗(yàn)材料 1.1.1 所用藥品 1.1.1.1 生化黃腐酸(BFA)(含腐植酸20%)，深州市威爾有公司生產(chǎn)， 批號： 970305 1.1.1.2 Zn：分析純ZnS04•7H20，天津市化學(xué)試劑三廠生產(chǎn)，批號： 901126 1.1.1.3 Se:飼料級Na2SeO3，解放軍86800部隊(duì)獸藥廠生產(chǎn)，批號： 970101 1.1.1.4 Vc： Vc藥用片劑，華北制藥集團(tuán)有限公司生產(chǎn)，批號： 970101 1.1.1.5 VE：飼料級a-生育酚(50%)，上海三維制藥公司生產(chǎn)，批號： 97-02-7046 1.1.2　試驗(yàn)動物 　　選用尼克紅蛋公雛(1日齡)651只，平均體重33.57g，平均母原抗 體稀釋度為120倍，經(jīng)方差分析差異均不顯著(p>0．05)。隨機(jī)分成7組， I-Ⅵ組為試驗(yàn)組，VII組為對照，每組93只，分兩個重復(fù)。 1.1.3 試驗(yàn)地點(diǎn) 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)山區(qū)研究所實(shí)驗(yàn)室、 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物 科技學(xué)院營養(yǎng)與飼料教研室 1.1.4 時間 1998年4-6月,共6周 1.2 試驗(yàn)方法 1.2.1 飼養(yǎng)試驗(yàn) 　　蛋雛分組前，隨機(jī)取10只稱重，前兩天喂相同開食料，第三天分組分籠飼養(yǎng)，分別飼喂混有不同復(fù)合BFA的雛雞料，對照組飼喂基礎(chǔ)全價料， 自由采食， 自由飲水，室內(nèi)小氣候保持一致， 自然光照和人工補(bǔ)充光照相 結(jié)合，燈光補(bǔ)照，電熱供暖，機(jī)械通風(fēng)，于第13天NDⅣ系免疫(滴眼)， 每隔一定時間于清晨飼喂前每組隨機(jī)抽取10只雞稱重。 　　飼料組成選用本地常用的玉米，麩皮、豆粕、棉粕、花生仁餅、魚粉、 蛋白粉，飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)依蛋雛飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)[16]，基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平見表1． 表1 基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平 單位：%、MJ/kg 飼 料 組 成 原 料 比 例 玉米 麩皮 豆餅 棉餅 花生餅 蛋白粉 魚粉 骨粉 鹽 62.0 5．0 19．0 1.0 5．0 2．0 3．0 2．7 0．3 營養(yǎng) 水平 指 標(biāo) 代謝能 粗蛋白 鈣 磷 食鹽 賴氨酸 蛋+胱 11．91 18.00 0．80 0．70 0.37 0.85 0.60 11．83 17．50 1．09 0．65 0．40 0.83 0．65 標(biāo)準(zhǔn)值 實(shí)測值 另加Met、Lys各0．10g/kg膽堿350mg /KG，微量元素、維生素按 標(biāo)準(zhǔn)添加。 1.2.2 血液常規(guī)及免疫水平 分別于l、 14、 16、 18、20、22、24、26、28、31、 35、 42日齡于各組隨機(jī)取雛雞8只，心臟采血，一部分肝素抗凝作血常規(guī)檢驗(yàn)， 另一部分不加抗凝劑靜置分離血清，作ND抗體測定． 1.2.2.1 沙利氏法分別測各血樣血紅蛋白含量，取均值． 1.2.2.2 計(jì)數(shù)板法計(jì)數(shù)各組各日齡血液紅細(xì)胞數(shù)，取均值。 l.2.2.3 分別利用中性紅、結(jié)晶紫兩種染液對試雞紅白血球染色，顯微鏡 觀察，計(jì)數(shù)各組各日齡白血球總數(shù)，取均值。 1.2.2.4 血液涂片，用瑞氏染色法染色，顯微鏡觀察，分類計(jì)數(shù)白細(xì)胞數(shù) 取均值。 1.2.2.5 非抗凝血液析出的血清，應(yīng)用試管法進(jìn)行血凝抑制實(shí)驗(yàn)，測定各 組各日齡ND抗體滴定度，取均值，觀察變化規(guī)律[33]。 1.2.3． 比較屠宰試驗(yàn) 　　分別于1、 14、 16、 18、 20、 22、 24、26、 28、 3l、 35、 42日齡各組隨機(jī)取雛雞8只，心臟取血后，窒息處死，立即剖解，分離法 氏囊、胸腺、脾臟三種主要免疫器官，去掉脂肪，觀察發(fā)育狀況，使用T-200 型電子天平 (1/1000克)精確稱鮮樣重，取均值比較。 1.2.4 數(shù)據(jù)處理 　　所獲數(shù)據(jù)全部采用IBM-PC機(jī)Ams統(tǒng)計(jì)軟件包處理，并有針對地選用t檢驗(yàn)，多重方差分析q檢驗(yàn)， 相關(guān)分析，多元回歸分析，通徑分析等方 法[30][27]。 2 結(jié)果與分析 2.1體重變化結(jié)果與分析 七個組試雛在試驗(yàn)42天內(nèi)體重變化見表3 圖1 表3 試雛不同日齡體重統(tǒng)計(jì)表 單位：g 14 16 18 20 22 24 26 28 31 35 42 I 85.2 89.5 118.0 144.2 150.9 157.7 172.3 191.2 267.5 333.0 431.3 II 76.7 94.3 102.7 131.8 140.6 149.8 176.8 190.3 224.8 314.7 404.6 III 84.5 102.5 115.8 146.7 155.2 164.0 178.0 193.3 275.5 371.5 514.1 IV 97.0 110.3 118.3 138.2 146.2 157.2 187.3 208.2 243.5 360.7 484.1 V 74.6 84.4 88.8 101.4 118.7 145.1 152.5 189.1 244.8 303.2 402.4 VI 82.0 91.5 98.5 125.0 131.9 150.7 170.2 200.0 246.0 301.3 411.6 VII 70.5 79.8 84.0 96.0 102.8 137.2 144.2 178.8 231.5 286.7 380.5 圖1 試雛不同日齡體重統(tǒng)計(jì)折線圖（可放大顯示） 　　雛雞1日齡隨機(jī)抽取10只，稱體重平均為33.57克，各只間體重方差分析差異不顯著，整個飼養(yǎng)期內(nèi)飼料消耗基本一致。 14日齡I-VI組體重分別 比對照組增加了20.85%、 8.79%、 19.86%、 37.59%、 5.82%、 16.31%， I 組、III組、IV組、Ⅵ組均達(dá)到差異極顯著水平(p<0.01)，其中以Ⅳ、 I、 III組增重較快； 42日齡各組體重比較， I-VI組較對照組分別增加了 13.5%、 6.3%、35.3%、27.3%、 5.9%、 8.3%，其中第III、Ⅳ組增重最快， 多重方差分析F=3.41，差異極顯著；通徑分析表明Zn、 Se、 Vc、 VE、 BFA與體重相關(guān)系數(shù)分別為0.8294、 0.8327、 0.2645、 0.1112、 0.0719， 其中Zn、 Se與體重呈較強(qiáng)正相關(guān)。 　　此外， Se還可通過Vc起作用（通徑系數(shù)0.5373）；BFA與Vc互作較大 (通徑系數(shù)1．9634)。 2.2 血液紅細(xì)胞變化結(jié)果與分析 　　各組試驗(yàn)公雛不同日齡紅細(xì)胞數(shù)及變化規(guī)律見表4 表4 試雛不同日齡紅細(xì)胞數(shù) 單位：百萬/ml I4 16 18 20 22 24 26 28 31 35 42 平均 I 236.3 233.7 195.5 222.7 226.3 219.0 201.7 201.3 195.0 209.5 227.0 215.3 II 237.0 217.8 245.3 185.0 256.3 203.2 192.3 222.2 200.5 210.0 242.2 219.3 III 203.3 215.5 191.0 202.7 224.3 209.0 226.0 209.0 227.0 225.3 225.0 214.4 IV 206.5 230 221.3 189.5 217.7 191.2 202.7 203.5 198.0 208.5 222.8 208.3 V 215.0 197.7 215.7 236.7 217.0 204.8 234.8 231.5 165.0 205.8 201.0 211.4 VI 198.0 211.3 190.3 213.5 241.7 212.2 207.7 192.7 178.0 220.0 221.3 207.9 VII 203.3 212.7 226.3 183.7 220.7 177.0 169.7 209.5 173.0 210:3 225.4 201.1 　　結(jié)果顯示：各試驗(yàn)組紅細(xì)胞數(shù)量比對照組有所提高，I-V1組分別比對照組增加6.6%、8.1%、5.9%、3.5%、5.1%、3.4%，多重分析比較， F=13.411(F>F0.01)，第II、I組較對照組分別達(dá)極顯著，顯著水平： 多元線性回歸表明紅細(xì)胞數(shù)與Zn、 Vc、 VE、 BFA關(guān)系為： 　　　　　　　　　　　y=204.8744+0.0090Xl+0.1406X2+0.1087X3+0.0175X4　(r=0.8722)， 說明CoBFA在一定程度可以提高紅血球數(shù)量，從而提高 機(jī)體供應(yīng)養(yǎng)分和氧氣能力，促進(jìn)機(jī)體生長，其中以Vc和Zn促生長作用較大 2.3 血紅蛋白變化結(jié)果與分析 　　試驗(yàn)各組間不同日齡雛雞血紅蛋白量及變化見表5 表5 不同日齡雛雞血紅蛋白量 單位：mg/g 14 I6 18 20 22 24 26 28 31 35 42 平均 I 10.0 9.3 9.2 9.5 10.2 9.4 9.5 8.6 8.9 9.0 9.5 9.5 II 9.8 9.3 10.3 10.4 10.4 9.4 9.8 9.6 8.8 10.2 8.7 9.7 III 10.0 9.1 10.1 10.3 10.4 10.2 10.4 8.7 8.9 9.9 9.4 9.8 IV 10.0 9.4 I0.0 9.5 10.7 10.1 9.3 9.3 9.4 9,1 9.7 9.7 V 9.0 9.0 10.4 10.2 10.2 9.9 10.8 9.5 8.6 8.4 9.4 9.6 VI 9.5 9.0 10.1 9.7 9.7 9.6 9.9 9.2 9.7 9.1 9.3 9.5 VII 9.0 9.0 10.3 8.5 9.1 9.0 9.0 8.4 8.8 8.5 8.7 8.9 　　結(jié)果顯示：各試驗(yàn)組與對照組比較， I-vI組較vII組分別增加了 6.7%、9.0%、10.1%、9.0%、7.9%、6.7%，多重方差分析F>F 0.01， q檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)各組較對照組差異極顯著，其中以III、Ⅱ、Ⅳ組最高，而各試 驗(yàn)組間差異不顯著。多元回歸血紅蛋白與Vc、 VE相關(guān) y=9.5872+0.0064X1-0.0053X2(r=0.9518) 2.4.1白細(xì)胞總數(shù)變化結(jié)果與分析 各組雛雞不同日齡白細(xì)胞數(shù)及變化規(guī)律見表6 表6 不同日齡雛雞白細(xì)胞總數(shù) 單位：個/ml 14 16 18 20 22 24 I 18416.7 18083.3 19750 15750 15000 20416 II 18500 17625 16333.3 19375 21333.3 21750 III 17250 17625 14500 18833.3 16750 24666.7 IV 18375 16750 16416.7 16875 17416.7 22250 V 16750 16250 16583.3 19916.7 15833.3 20500 VI 20500 16833.3 16583.3 18000 19333.3 20375 VII 18000 18916.7 17333.3 19083.3 16833.3 20666.7 （轉(zhuǎn)下表） 26 28 31 35 42 平均 I 22583.3 18125 16875 21166.7 23625 19072 II 20916.7 19666.7 16375 23000 240417 20083.3 III 29500 23250 14000 20125 19125 18650 IV 5916.7 20166.7 17250 23583.3 245625 19078.4 V 18250 16750 16750 21875 22125 18406.1 VI 19250 19250 19500 20166.7 191875 18899.6 VII 21666.7 6416.7 16875 7083.3 17400 17788.6 （承接上表） 　　結(jié)果表明 各組與對照組比較，白細(xì)胞總數(shù)有所增加，分別較對照增加了 7.2%、12.9%、4.8%、7.2%、3.5%和6.2%，多重方差比較差異未達(dá)到顯 著，但以第II、Ⅳ增加較多，白細(xì)胞總數(shù)與Zn、Se、Vc、 VE、BFA相關(guān) 系數(shù)分別為0.3498、0.4323、0.6386、0.6001、0.6838，與Zn、Se、Vc、 VE、 BFA線性回歸方程為： y=17577．2590+5.1400Xl+6.0189X2+4.6400X3+2.7800X4 (0．8161)， 說明VE、BFA、Vc對白細(xì)胞總數(shù)影響較大，而Zn、Se 相對影響較小。 2.4.2 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 　　各試驗(yàn)組雛雞白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)量及所占比例見表7 表7 試驗(yàn)組雛雞白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 單位：%、個/ml I II III IV V VI VII 淋 巴 比例 數(shù)量 65.4 62.5 62.2 62.6 60.3 61.2 61.5 12473 12552 11600 11943 11099 11567 1094 嗜 中 比例 數(shù)量 28.1 30.7 30.3 30.3 31.5 32.1 28.1 5359 6166 565l 5781 5798 6067 4999 嗜 酸 比例 數(shù)量 2.9 3.2 4.1 4.25 5.0 3.3 4.6 553 643 765 811 920 624 818 嗜 堿 比例 數(shù)量 2.0 2.6 2.5 2.09 2.3 2.5 4.2 381 522 466 399 423 472 747 單 核 比例 數(shù)量 1.5 0.9 l.2 0.8 1.1 1.1 1.6 286 181 224 153 202 208 284 　　結(jié)果顯示：各組間各類白細(xì)胞比較：其中淋巴細(xì)胞以對照組為最低 I-VI組較對照組分別增長14.01%、14.73%、6.03%、9.17%、 1.45%、 5.70%；多重方差分析，差異不顯著；嗜中性白細(xì)胞則分別增加了7.20%、 23.34%、13.04%、15.60%、15.98%、21.36%，其中II、VI組與對照組比較，多重方差分析差異顯著；通徑分析表明， Zn、Se、vc、VE、 BFA相關(guān)系數(shù)分別達(dá)0．230l、0.2248、0.0331、-0.0169、0.3937， 實(shí)驗(yàn)結(jié)果綜合說明，以Ⅱ組增加白細(xì)胞數(shù)效果最明顯。 2.5 免疫器官生長發(fā)育變化結(jié)果與分析 2.5.1胸腺 各組雛雞不同日齡胸腺重量均值及變化規(guī)律見表8、圖2 表8 不同日齡雛雞胸腺重量均值 單位：g 14 16 18 20 22 24 26 28 31 42 I 0.355 0.408 0.503 0.573 0.642 0.697 0.726 1.029 1.674 2.417 II 0.215 0.431 0.474 0.509 0.677 0.684 0.818 1.100 1.626 2.355 III 0.359 0.474 0.539 0.567 0.758 0.767 0.805 1.168 1.714 2.614 IV 0.380 0.490 0.670 0.692 0.728 0.848 1.043 1.286 1.695 2.863 V 0.249 0.330 0.350 0.465 0.544 0.656 0.878 0.933 1.423 2.124 VI 0.354 0.417 0.460 0.475 0.584 0.695 0.941 1.104 1.565 2.160 VII 0.213 0.283 0.307 0.347 0.588 0.589 0.788 1.001 1.324 2.109 圖2 不同日齡雛雞胸腺重量均值折線（可放大顯示） 　　結(jié)果表明：各試驗(yàn)組與對照組比較，胸腺生長發(fā)育迅速，42日齡時比 較，I-Ⅵ組分別較對照組增加： 14.6%、11.7%、23.9%、35.8%、0.7% 和2.4%； t檢驗(yàn)表明：與對照比，III、Ⅳ組達(dá)極顯著(p<0.01)，而I、 II組則達(dá)顯著水平(p<0.05);逐步回歸結(jié)果表明， Vc對胸腺影響最大； y=2.1489+0.0016X32-0.0066X3(r=0.9999)。 2.5.2法氏囊 試驗(yàn)各組不同日齡法氏囊生長發(fā)育變化見表9、圖3 表9 不同日齡法氏囊重量均值 單位：g 14 16 18 20 22 24 26 28 35 42 平均 I 0.316 0.405 0.600 0.704 0.738 0.768 0.939 1.100 1.893 2.231 0.969 II 0.260 0.378 0.503 0.506 0.667 0.861 0.903 1.108 1.357 2.t27 0.867 III 0.247 0.491 0.614 0.718 0.778 0.783 0.810 1.287 1.589 2.515 0.983 IV 0.376 0.398 0.513 0.695 0.760 0.805 0.946 1.239 1.322 2.277 0.933 V 0.228 0.334 0.376 0.479 0.607 0.629 0.750 0.998 1.102 1.975 0.748 VI 0.334 0.353 0.385 0.534 0.649 0.658 0,887 1.099 1.197 2.072 0.817 VII 0.219 0.32 0.367 0.459 0,538 0.557 0.646 0.985 1.098 1.914 0.710 圖3 不同日齡法氏囊重量均值折線圖 （可放大顯示） 結(jié)果顯示：各試驗(yàn)組較對照組法氏囊生長發(fā)育均有較大增長，其增重 幅度42日齡比較I-VI組分別增加16.60%、11.10%、31.40%、18.97%、 3．18%和8．25%；多重方差比較， q檢驗(yàn)結(jié)果各試驗(yàn)組與對照組均差異極顯 著(F>F 0.01)，而各試驗(yàn)間比較，以第三組最高，與其它各組也達(dá)到 極顯著差異；此外I組與Ⅱ、Ⅳ、V；VI組，Ⅳ組與II、V、VI組； II組與V、VI組也分別達(dá)極顯著差異；法氏囊重與Zn、 Vc、 VE、 BFA 關(guān)系為 　　y=1.9440+0.006XI+0.0072X2+0.0060X3+0.0040X4 (r=0.9147)。綜合說明：各種復(fù)合BFA均可刺激法氏囊生長發(fā)育，其中以III組和I組為好。 2.5.3 脾 各組不同日齡脾臟重量均值及變化規(guī)律見表10、圖4 表10 不同日齡脾臟重量均值 單位：g 14 16 18 20 22 24 26 28 31 42 I 0.119 0.105 0.131 0.185 0.208 0.208 0.324 0.360 0.764 1.082 II 0.071 0.125 0.144 0.201 0.211 0.223 0.363 0.349 0.456 1.013 III 0.087 0.127 0.149 0.198 0.238 0.272 0.251 0.346 0.708 1.127 IV 0.098 0.115 0.175 0.214 0.283 0.347 0.377 0.361 0.418 1.279 V 0.069 0.107 0.122 0.188 0.211 0.220 0.272 0.292 0.567 0.685 VI 0.088 0.095 0.124 0.138 0.216 0.228 0.302 0.297 0.54I 0.988 VII 0.068 0.108 0.109 0.137 0.164 0.187 0.208 0.357 0.407 0.655 圖4 不同日齡脾臟重量均值折線圖 （可放大顯示） 　　結(jié)果顯示：各試驗(yàn)組較對照組脾臟生長發(fā)育加快， 42日齡I-VI組較 對照組分別增加：65.2%、54.7%、72.1%、95.3%、4.6%和50.8%，方差 分析除V組外，其它各組均達(dá)到極顯著水平(F>F 0.01)；42日齡多元 線性回歸表明脾重與Zn、Vc、VE、BFA關(guān)系為 　　y=0.4492+0.0034X1+0.0044X2+0.0032X3+0.0008X4 (r=0.9673)，Zn、Vc、VE與脾重呈強(qiáng)正相關(guān)。 2.6 抗體水平變化結(jié)果及分析 各試驗(yàn)組免疫后不同日齡ND抗體水平變化規(guī)律見表11、圖5 表11 不同日齡ND抗體水平 單位：格 14 I6 18 20 22 24 26 28 31 35 42 　 I 20.0 26.7 35.7 41.7 56.0 80.0 266.7 106.7 25.0 10.0 8.3 61.53 II 20.0 16.7 31.7 40.0 63.3 113.3 213.3 106.7 20.0 10.0 8.0 58.45 III 13.3 15.0 20.0 33.3 40.0 86.7 120.0 60.0 40.0 15.0 5.0 40.75 IV 50.0 11.7 16.7 23.3 53.3 66.7 80.0 53.3 20.0 11.7 6.0 35.89 V 30.0 8.3 16.7 16.7 33.3 60.0 80.0 80.0 20.0 10.0 7.5 35.7 VI 11.7 23.3 33.3 22.5 46.7 53.3 66.7 93.3 20.0 16.7 7.3 32.95 VII 11.7 16.7 26.7 23.3 23.3 33.3 40.0 16.7 15.0 4.0 2.8 19.41 圖4 不同日齡ND抗體水平折線圖 （可放大顯示） 　　由圖表可知，各試組與對照組比較， ND抗體水平上升快，高峰值高， 維持較高水平(ND>40)時間長， 10次測定ND抗體平均水平I-VI組 較對照組分別增加了217.o%、201.1%、109.8%、84.0%、69.7%和 84.8%；多重方差分析F=4.605(F>F 0.01)；差異極顯著；相關(guān)性檢驗(yàn) 表明，VE、Vc、BFA與ND水平相關(guān)性最強(qiáng)，r分別為0.9211、o.9198 和0.9118，其次為Se、Zn， r分別為0.2569、0.1208。而多元線性回 歸方程計(jì)算，抗體平均值與Zn、Vc、VE、BFA關(guān)系式為： 　　　　　y=0.0541Xi+0.0039X2+o.1073X3+0.0755x4+19.4000 (r=0.9790)。 3． 討論 　　本試驗(yàn)以蛋公雛增重、血紅蛋白、紅細(xì)胞、白細(xì)胞總數(shù)、各類白細(xì)胞 所占比例、免疫器官生長發(fā)育狀況，以及血清ND抗體水平變化為指標(biāo)， 綜合研究了不同配方CoBFA對家禽生長及免疫功能的影響及作用機(jī)制。 CoBFA所含的幾種主要有效成分均對家禽生長及免疫力提高有促進(jìn) 作用，而其作用機(jī)制又各有不同。 3.1．Zn 作為機(jī)體多種酶成分，參與胱氨酸和酸性粘多糖的合成代謝，對保持上皮完整，生物膜結(jié)構(gòu)，防止其受氧化損害，保護(hù)機(jī)體免受病毒和細(xì) 菌侵害有重要意義，同時作為酶成分具有調(diào)節(jié)新陳代謝，促進(jìn)生長功能。 試驗(yàn)表明，缺Zn會使小白鼠、豬淋巴結(jié)、脾、胸腺重量下降20%-40%， 用2 g/kg和100 g/kg兩種日糧喂豬，其胸腺重相差15倍[3][4][5]。Moulder (1989)報(bào)導(dǎo)，使用0.8-2.0g/kg低Zn日糧喂小鼠，淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著 下降，對抗原持異性增殖能力降低[6]。阮景軍(1994)亦獲得類似結(jié)果[7] Wamer(1987) 證實(shí)， Zn可使T淋巴細(xì)胞和自然殺菌(NK)細(xì)胞活 性上升[8][11]。 Wincharch(1993)又證實(shí)了這一現(xiàn)象[12]。程偉(1992) 報(bào)道，用幾倍NRC標(biāo)準(zhǔn)Zn日糧飼喂仔豬，其增重明顯，且可防治腸炎[10]。 大澤基保(1990)證實(shí)， Zn可在一定程度上提高B淋巴細(xì)胞數(shù)量，增加 抗體產(chǎn)生[9]。本試驗(yàn)證實(shí)Zn與體重、白細(xì)胞數(shù)量，嗜中性白細(xì)胞數(shù)， ND抗 體水平的相關(guān)系數(shù)分別為0.8294、0.3498、0.2301、0.1208，表明其對 生長和免疫確實(shí)有效，但以促進(jìn)生長和提高嗜中性白細(xì)胞數(shù)作用為主。 3.2 Se 作為GSH-PX成分，其免疫機(jī)制在于： 3.2.1 分解機(jī)體內(nèi)ROOH、 H202等物質(zhì)，防止其對生物膜破壞； 3.2.2 提高細(xì)胞內(nèi)5 -羥二十碳四烷酸(5-HETE)和白細(xì)胞三烯B4 (LTB4)含量， 5-HETE和LTB4可抵消皮質(zhì)酮對淋巴細(xì)胞增殖的抑制。 李素芬(1996)證實(shí)，雛雞飼喂高Se日糧，其胸腺法氏囊、脾重明顯增 加，淋巴細(xì)胞數(shù)量增多[17]。孫先忠(1986)則證實(shí)Se可防止淋巴器官變性， 提高白細(xì)胞殺菌能力，使血清中備解素、補(bǔ)體、溶菌酶顯著提高[18]。 Fineh (1989)發(fā)現(xiàn)Se可使外周淋巴細(xì)胞對PHA，刀豆蛋氨酸刺激轉(zhuǎn)化能力快 速、穩(wěn)定[19]，從而提高機(jī)體對細(xì)菌和抗原的反應(yīng)能力，產(chǎn)生抗體迅速，維 持時間長，將Se作為豬雞疫苗增效劑，可明顯提高抗體滴定度，降低強(qiáng)毒 攻擊死亡率，這一點(diǎn)已為Hayek、 Sevker等多人證實(shí)[20][21][22][23][24]。本實(shí) 驗(yàn)證實(shí)， Se與生長，白細(xì)胞總數(shù)，嗜中性白細(xì)胞數(shù)， ND抗體水平相關(guān)系 數(shù)分別為0．8327、 0．4323、 0．0331， 0．2569，說明Se對促生長作用明 顯，而對免疫未表現(xiàn)出明顯作用，其原因可能是： Se提高免疫力在于其分 解過氧化物和抵消皮質(zhì)酮，而VE可以防止過氧化物產(chǎn)生， Vc可羥化分解 皮質(zhì)酮， VE、 Vc的大劑量添加，從而使Se的作用被弱化和掩蓋。 3．3 vc 對家禽抗應(yīng)激，提高免疫力作用機(jī)制在于 3．3．1 Vc可以維持胸腺網(wǎng)狀細(xì)胞功能，促進(jìn)其發(fā)育，提高白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞 殺菌能力[14]。 Aspamar (1990 )向蛋雞日糧中加入50 IU/kg～ 100IU/kgVc，血液殺菌能力， β溶解酶活性，吞噬細(xì)胞吞噬能力明顯上升 [40]。 Rogon(1994)、周明(1990)、乏慶偉(1989)等也分別在雞、對蝦上獲 得類似結(jié)論[52][55]。 3．3．2 Vc的另一個重要作用是羥化分解家禽機(jī)體應(yīng)激狀態(tài)下產(chǎn)生的皮質(zhì) 酮，皮質(zhì)酮作為一種免疫抑制劑和細(xì)胞毒素，會降低機(jī)體免疫力[50]，實(shí)驗(yàn) 證實(shí)，日糧中加入高劑量Vc，可使雞抗綿羊紅細(xì)胞和流產(chǎn)布氏桿菌凝集反 應(yīng)明顯增加，王慶偉(1989)向?qū)ξr料中加人Vc( 100 mg/kg-200 mg/kg)，對蝦血清IgG、IgM、 IgA含量顯著提高 (p<0．01)[55]。 3.3.3 Vc羥化賴氨酸促其轉(zhuǎn)化成膠原纖維，促進(jìn)傷口愈合[53]．本實(shí)驗(yàn)證 實(shí)， Vc與紅細(xì)胞、血紅蛋白、正相關(guān)，從而提高雛雞生長速度；對胸腺發(fā) 育呈強(qiáng)烈促進(jìn)作用，提高淋巴細(xì)胞數(shù)和ND抗體水平 (r=0.91981)；這 與他人所獲結(jié)論一致。 3.4 VE作為免疫佐劑，其作用機(jī)制在于 3.4.1 拮抗H202、，亞硝基化合物，從而提高血液嗜中性白細(xì)胞和巨噬細(xì) 胞活性，達(dá)到提高家禽抗病力效果，程玉冰(1992)向雛雞日糧中加入 150mg/kg-300mg/kgVE，其感染大腸桿菌死亡率下降到37.2%-21.6%， 增重提高 10.2%- 11.6%[41]。 Pichard(1994)[44]、 楊麗萍 (1996)[42]Rice(1988)[49]、Politis(1993)[40]在雞牛上也獲得類似結(jié)果。 3.4.2 VE可促進(jìn)免疫器官發(fā)育， Kohler(1985)、賀英(1996)證實(shí)，VE可 使脾指數(shù)增加，脾臟鞘動脈網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)中巨噬細(xì)胞增加[43][48]。 3.4.3 VE對體液免疫作用機(jī)制在于提高T淋巴細(xì)胞數(shù)量，特別是輔助T淋 巴細(xì)胞數(shù)量，從而使機(jī)體Ig合成增加[45]。楊麗萍(1994)報(bào)導(dǎo)，向接種 ND的雞日糧加入300 mg/kgVE，可使抗體滴定度維持10天以上[42]。 Bonnette(1987)[39]、郭芳彬(1997)[45]、 Richard(1994)[46]、沈詠舟 (1996)[47]、文杰(1996)[37]、Tengerdy(1973)[51]對豬雞試驗(yàn)均有類似反 應(yīng)。 Skpanda(1996)試驗(yàn)用Se-VE合體作IBD疫苗佐劑， IBD抗體滴定度 顯著增加(p<0.01)[46]。本實(shí)驗(yàn)測定分析發(fā)現(xiàn)，在復(fù)合BFA中， VE對 白細(xì)胞數(shù)、 ND抗體作用顯著，相關(guān)系數(shù)分別為0.6001、 0.921l，這與前 人一致而對嗜中性白細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)(r=0.0169)，這說明， VE在日糧中 含量過高，可能會使體內(nèi)一般吞噬細(xì)胞功能受到一定抑制，但作用不明顯， 而其特異性免疫作用明顯增加，使機(jī)體整體免疫力增加。 3．5 BFA為一種高分子活性有機(jī)酸制劑 它是有機(jī)物料經(jīng)生物發(fā)酵而產(chǎn)生 的高分子聚合物，光譜分析表明它是一種多價酚型芳香族化合物，具有酚 基、烯醇基、胺基等，與自然界存在的黃腐酸具有相似的功能：可以殺菌 抗?jié)?、解毒、收斂，對機(jī)體網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)具有顯著激活作用，誘導(dǎo)產(chǎn)生 干擾素，從而提高機(jī)體非特異性免疫能力[38]，具有提高陽離于交換能力， 絡(luò)合緩沖能力，吸附催化能力，可以吸附血小板，促進(jìn)凝血，使傷口加速 愈合，防止病毒感染，此外由于黃腐酸特殊分子結(jié)構(gòu)，可抑制乙酰苯肼 (APH)生成， APH為脂質(zhì)過氧化物的誘導(dǎo)劑[28][29]。試驗(yàn)證實(shí)，黃腐酸 可促進(jìn)脾重增加，提高嗜中性白細(xì)胞數(shù)量，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，從而可以抵 抗防治病毒、細(xì)菌的感染[31][34][36]。黃仁錄(1996)向肉仔雞料中加入 BFA， 21日齡增重提高9.75%-15.63%，球蟲卵顯著下降[38]。谷子林 (1996)對蛋雞試驗(yàn)證明， BFA可使ND爆發(fā)雞群20天產(chǎn)蛋率由34%恢復(fù) 到80%，而對照組只達(dá)到61.920%[34]．本實(shí)驗(yàn)通過對結(jié)果通徑分析表明， BFA的確可明顯提高白細(xì)胞(r=0.6838) 特別是嗜中性白細(xì)胞數(shù)(r= 0．3937)及ND抗體水平 (r=0.9118)。 　　總之，由于Zn、Se、Vc、VE、BFA或?qū)仪萆L,或?qū)γ庖咛?高有促進(jìn)作用，但各自作用機(jī)制不同，作用方面相互補(bǔ)充，使四種不同配 方復(fù)合BFA試驗(yàn)組與單獨(dú)BFA及對照組比較，生長速度及免疫力均有不 同程度增加。 　　各指標(biāo)間關(guān)系通過分析可知： 　　(1)血紅蛋白量與體重呈強(qiáng)相關(guān)r=0.6003(t>t 0.01)，與脾生 長發(fā)育呈強(qiáng)相關(guān)r=0.6270(t>t0.01)。脾重(以42日齡為標(biāo)準(zhǔn))與Zn、 Vc、VE、BFA關(guān)系為 　　y=0.4492+0.0034X1+0.0014X2+0.0032X3+0.0008X4 即主要由Zn、 VE對脾生長起作用；這表明：由于Zn、VE等物質(zhì)促進(jìn)脾 臟發(fā)育加快，提高其對紅細(xì)胞修復(fù)作用及免疫功能，從而達(dá)到促生長效果， 這與前人結(jié)論一致。 　　(2)法氏囊為家禽特有免疫器官，不同試驗(yàn)組法氏囊發(fā)育均較對照 組快，差異極顯著。法氏囊(42日齡)與Zn、Vc、VE、BFA關(guān)系為 　　y=1.9440+0.0006Xl+0.0072X2+13.0060X3+0.0004X4 可見法氏囊量與Vc、 VE含量變化強(qiáng)相關(guān)。 　　(3) ND抗體作為家禽特有的抗體， 可在一定程度上反映家禽體 液免疫水平高低。本試驗(yàn)各組在免疫前抗體水平均較對照組高， 免疫后應(yīng) 答迅速，滴定度水平高，維持時間長(ND>40)I-VI組分別為8、8、 8、6、4、6天，而VII組只有2天；抗體由淋巴細(xì)胞形成，分析表明淋 巴細(xì)胞與抗體水平呈強(qiáng)相關(guān)， r=0.9301(t>t 0.01)；而脾、胸腺、法 氏囊與抗體水平(26日齡測定)線性方程為 　　y=724.60X1+815.49X2+250.32X3+290.2l (r=0.9933)； 胸腺、法氏囊重與ND抗體水平分別呈顯著(t>t 0．05)， 極顯著(t>t 0.01)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.565、0.5836；這說明，ND 抗體水平由淋巴細(xì)胞多少決定，而淋巴細(xì)胞增加主要由Zn、Vc、VE促 進(jìn)胸腺、法氏囊增加造成。 4． 結(jié)論： 4．1 不同配方CoBFA均可提高家禽生長速度及機(jī)體綜合免疫力，在生產(chǎn) 中具有廣泛應(yīng)用前景。 4．2 CoBFA通過促進(jìn)脾發(fā)育，提高血紅蛋白量，加快生長速度。 4．3 CoBFA通過促進(jìn)胸腺、法氏囊發(fā)育，提高機(jī)體綜合免疫力，特別是體 液免疫力。 4．4 綜合考慮增重效果、白細(xì)胞數(shù)及抗體滴定度維持時間 (ND抗體> 40)，認(rèn)為III組效果最佳。 致 謝 本文是在谷子林研究員的悉心指導(dǎo)下完成的。三年中，谷老師在生活 上元微不至的關(guān)懷，學(xué)業(yè)上孜孜不倦的教誨今我終身受益.試驗(yàn)過程中， 任文社、黃玉亭、黃仁錄老師身體力行，親身參與，特別感激任文社老師 在整個試驗(yàn)及論文寫作過程中給以極大支持與幫助。此外，趙國先、朱慧 中、胡維華、胡永芬、王恩強(qiáng)、金東航等老師都給以物質(zhì)、精神上的支持， 于風(fēng)惠、龐新位、張兆蘭等老師審閱了初稿，并提出寶貴意見，九四級畢業(yè)生李巖欣、九五級畢業(yè)生王建輝、王冬梅同學(xué)參與部分實(shí)驗(yàn)工作，謹(jǐn)此 -并致謝。