單味與復(fù)方地榆對奶牛乳房炎病原菌的抑菌試驗

貔貅

摘要：對乳房炎乳汁中常見病原菌進行分離純化，并利用單味地榆和含有地榆的中藥成方對該病原菌進行體外抑制試驗，對比研究了地榆對乳房炎病原菌的作用效果。
關(guān)鍵詞：乳房炎；乳汁；抑菌試驗；中藥
    乳房炎（mastitis）是奶牛飼養(yǎng)業(yè)中的一種常見病，該病發(fā)生極為廣泛，幾乎世界各地的牛場均有發(fā)生，其對奶牛生產(chǎn)造成的影響和損失都是非常嚴重的。奶牛乳房炎可分為臨床型與隱性型。其中隱性乳房炎的發(fā)病率和對奶牛業(yè)的影響都超過臨床型乳房炎[1，2]。而按照中獸醫(yī)理論分析，除外傷引起的乳房炎外，多是陽明胃經(jīng)實熱、厥陰肝經(jīng)郁滯和沖任而脈失調(diào)，使乳房絡(luò)脈不暢，乳汁積滯發(fā)熱腐敗而成[3，4]。地榆本身含有大量的鞣質(zhì)和地榆皂甙，具有涼血止血[4]，收斂消毒的作用。故可以用以奶牛乳房炎的治療。
1.材料與方法
1.1細菌的分離
    選取臨床型乳房炎和CMT檢測為隱性乳房炎的牛奶，接種鮮血平板培養(yǎng)基，24小時后挑取菌落進行純培養(yǎng)。并根據(jù)菌落在麥康凱、卻甫曼等鑒別培養(yǎng)基上生長的情況，對所分離的細菌進行大致的分類，然后用生化試驗進行準確分類[6，7]。將分離的細菌接種和平板進行培養(yǎng)，備用。
    抑菌試驗時，選取培養(yǎng)37℃，18～24小時的細菌，采用平板挖洞法檢測藥物對細菌的作用效果。
1.2中藥的制備
1.2.1單味地榆
    采用水煎濃縮的方法，將藥物制成水溶劑，并濃縮成1g/ml生藥。分裝安瓿，高溫蒸汽滅菌30分鐘備用。
1.2.2含有地榆的中藥復(fù)方的制備
    將含有地榆、蒲公英、連翹的中藥復(fù)方水煎濃縮成水溶液，并用醇提方法除去其中的蛋白質(zhì)，然后用活性炭吸附法除去藥物中的致熱源，做成含有1g/ml生藥的中藥復(fù)方注射液，滅菌后備用。
2.結(jié)果
2.1細菌分離結(jié)果
    在臨床和隱性型乳房炎發(fā)病奶牛的牛奶中，共分離到細菌87株，其中有葡萄球菌株36株，占總數(shù)的41.38%，鏈球菌25株，占鏈球菌總數(shù)的28.74%，這兩項共占所有發(fā)病奶牛乳區(qū)分離細菌總數(shù)的70.11%，這表明在由細菌引起的奶牛乳房疾病中，葡萄球菌和鏈球菌占主導(dǎo)地位。另外其他種屬的細菌，大腸桿菌有12株，變形桿菌有4株，克雷伯氏菌47群2株，產(chǎn)氣腸桿菌3株，其他可能菌種5株。
    在試驗時選取葡萄球菌10株，分別為金黃色葡萄球菌3株，表皮葡萄球菌3株，其他葡萄球菌4株；鏈球菌12株，停乳鏈球菌、無乳鏈球菌、乳房鏈球菌和其他鏈球菌各選取3株；大腸桿菌、變形桿菌等各選取2株。
2.2中藥抑菌結(jié)果
2.1單味地榆與含有地榆的中藥復(fù)方的抑菌效果
用卡尺測量平板抑菌試驗中藥物對各細菌的抑制環(huán)的直徑，單位mm。

表1單味藥與復(fù)方的抑菌效果（mm）

	金黃色葡萄球菌			表皮葡萄球菌			其他葡萄球菌
單藥	17.5	19	14	16	25	25	15.5	21.8	23	29
復(fù)方	14	18	16.5	17.5	11	13	17	20	18.5	15.5

	乳房鏈球菌			停乳鏈球菌			無乳鏈球菌			其他鏈球菌
單藥	15	15.5	18	24	17	17	20.5	20	23	18	17	18.5
復(fù)方	19.5	17	20	24	19	20.5	15	22	20	19.5	25.5	26

	大腸桿菌		產(chǎn)氣腸桿菌		變形桿菌		克雷伯氏菌47群
單藥	21	19	20	18	17.5	19	27	27
復(fù)方	20	17.5	14.5	13	17	14	12	17

2.2結(jié)果比較
    對比單藥和復(fù)方對三組細菌的抑制作用，通過統(tǒng)計分析可以發(fā)現(xiàn)，單味地榆對葡萄球菌屬細菌的抑菌環(huán)平均直徑為d=20.58±1.65（mm），而復(fù)方則是d=16.1±0.92（mm）；二者差異極顯著，p<0.01。對鏈球菌屬的抑制作用情況則相反，單味藥效果和復(fù)方之間差異不顯著，p>0.05,抑菌環(huán)平均直徑分別為d=18.58±0.84（mm）和d=20.71±0.98（mm）。試驗中藥物對其他細菌的抑制作用在比較時差異極顯著，p<0.01。

表2藥物對大腸桿菌等細菌的抑制效果比較（數(shù)據(jù)為平均值）

	大腸桿菌	產(chǎn)氣腸桿菌	變形桿菌	克雷伯氏菌47群
單藥	20	19	18.25*	27**
復(fù)方	18.75	13.75**	15.5	14.5*

3.討論與分析
    試驗中細菌分離鑒定結(jié)果表明，葡萄球菌和鏈球菌是奶牛乳房炎主要致病菌，這和以前報道的結(jié)果相符合[2，3]，同時也證明本試驗所選取的試驗對象具有普遍代表性意義。
    從試驗結(jié)果可以看出，地榆與含有地榆的中藥復(fù)方，對于試驗中分離到的各乳房炎致病菌的體外抑制作用均比較明顯。，試驗中單味地榆對所有試驗菌的抑菌環(huán)的直徑均超過了15mm，可見所分離的乳房炎致病菌均對其藥物有較高的敏感性，同時，復(fù)方也表現(xiàn)出了良好的試驗效果，對于葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌高敏。
    在試驗中單味地榆和復(fù)方對鏈球菌屬細菌的抑制作用均好于其他細菌，對葡萄球菌屬細菌也有的良好的效果。對比地榆與含有地榆的中藥復(fù)方，除鏈球菌屬細菌外，單藥的抑菌作用明顯好于復(fù)方，p<0.01。對于這一點，可以從以下幾方面解釋。
1.抑菌效果與體外的試驗條件和復(fù)方中地榆單藥濃度的降低有關(guān)。抑菌試驗時，單味地榆和復(fù)方藥物濃度均是1g/ml生藥，因此復(fù)方中地榆的含量低于單味藥的濃度。
2.不同的病原菌對乳房炎的致病作用不一樣，金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌和乳房鏈球菌是乳房炎的主要致病菌而表皮葡萄球菌以及革蘭氏陰性桿菌為條件致病菌[8]，其感染和作用途徑不同。
3.對藥物高敏的葡萄球菌屬和鏈球菌屬細菌在細菌分類上，屬于革蘭氏陽性菌，而大腸桿菌等屬于革蘭氏陰性菌，這可能與細菌對藥物的敏感程度和細菌的結(jié)構(gòu)以及藥物的作用途徑有關(guān)。一般來說，革蘭氏陽性菌的細胞壁較革蘭氏陰性菌更利于藥物的透過。