葛根水煎液對未性成熟小白鼠子宮和卵巢組織形態(tài)結構的影響

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葛根水煎液對未性成熟小白鼠子宮和卵巢組織形態(tài)結構的影響 巴音吉日嘎拉1金曉2朝魯孟1    1.內蒙古農業(yè)大學動物科學與醫(yī)學學院 010018 2.內蒙古自治區(qū)動物防疫監(jiān)督檢驗所010051

摘要 本實驗研究，生后21天的未性成熟雌小白鼠14只，體重為19.13±2.23g，各窩隨機分為對照組和實驗組。給實驗組灌胃葛根水煎液0.25ml，相當于每毫升含生藥0.5g，對照組灌胃給于0.25ml 蒸餾水，其他條件都一樣。每組每天灌藥或蒸餾水一次，連續(xù)用16天，停藥后把小白鼠切開頸部皮膚，切斷頸動脈處死，剖腹取出子宮，卵巢稱重。結果證明，葛根水煎液對小白鼠的體重沒有明顯的增重作用，對小白鼠子宮、卵巢有一定的增重作用。在組織形態(tài)學上，葛根水煎液對小白鼠的子宮腺體數量和卵巢的卵泡數量有明顯增多作用?？傊?，葛根能促進未性成熟小白鼠的子宮、卵巢的發(fā)育。 關鍵詞葛根子宮卵巢小白鼠     隨著世界各國對天然藥品需求的不斷增加，天然藥物在世界醫(yī)藥中的影響和地位日益受重視。中草藥來于大自然屬于天然藥物，具有資源豐富，療效確切，不良反應小等特點，中草藥是歷史悠久的傳統藥物，隨著科學技術的進步和國內外新藥研制開發(fā)中面臨越來越激烈的競爭和挑戰(zhàn)，新藥研究的重點日益轉向傳統中藥及天然藥物活性成分的開發(fā)和利用，中藥活性成分是其發(fā)揮藥效作用的物質基礎，它的深入研究是中藥現代化的關鍵。揭示中藥的作用機制，合理應用中草藥才能充分發(fā)揮其新的藥用價值。     葛根為豆科植物野葛或粉葛的根，具有發(fā)表解肌，升陽透疹，解熱生津等作用，對心血管系統，免疫系統的疾病有較好的治療效果。下面就將葛根及其主要有效成分的藥代動力學研究、藥理作用及臨床應用綜述如下[1]。     化學成分：葛根為豆科植物，分布在亞洲溫熱帶的有30余種，我國約有10多種，以野葛和粉葛分布最廣，產量最高，其根中主要含有（1）黃酮類：黃豆甙元和葛根素等；（2）葛根 A，B，C；（3）三 類主要以葛皂醇A，B，C命名的7種新型齊墩果醇烷型醇類化合物；（4）生堿類。     藥代動力學研究：藥物在體內的吸收研究表明，大鼠口服14C黃豆甙元0.5h后血內顯放射性，大鼠口服近1h后，從胃腸道消失28%，此時尿中已有甙元排出，可見該藥吸收較快。灌胃24h后，自糞便及胃腸道內容物回收的放射性物質占74。5%，說明該藥胃腸吸收并不完全。另外，大鼠口服500ml/kg與50mg/kg后，藥物自胃腸道消失率的對比實驗未見顯著差異說明上述吸收不完全與劑量關系不大，但增加口服劑量，可提高吸收的絕對量。藥物在體內的分布在大鼠、兔、狗、人的實驗中表明，葛根素在體內分布快且較廣，靜脈注射后藥物在各組織中的分布以腎、血漿、肝中較高；睪丸、心臟、肌肉和脾次之。葛根素可通過血腦屏障進入腦內，但含量較低。蛋白結合率分別為32.5±4.4%，27.1±3.1%，24.6±3.5及15.8%。對比實驗表明黃豆甙元血漿蛋白結合能力較葛根素強，有近半量（42.4%）可與血漿蛋白結合，這可能是影響其透過血腦屏障的原因。當用乙醇沉淀血漿蛋白時0.15%以上的藥物能被乙醇提取出。說明甙元與血漿蛋白的結合校疏松。這種可逆性的結合對延長藥物作用時間具有定意義。     藥理作用：對心腦血管的作用（1）改善腦循環(huán)：葛根總黃酮注射于麻醉犬的頸動脈能使腦血流量迅速而明顯地增加，腦血管阻力降低，給高血壓動脈硬化的患者肌肉注射，則可使腦血管阻力減少，血流入時間縮短，波幅和快流段增加，波形好轉，其作用溫和，并非單向擴張血管增加血流，而是使低幅波升高，高幅波降低，使異常波趨向正常。（2）改善微循環(huán)作用：葛根素無論對正常金地鼠微循環(huán)，還是對局部滴加去甲腎上腺素引起的微循環(huán)障礙都有明顯的改善作用，主要表現為增加微血管運動的振幅，提高局部微血流量。（3）對缺血心肌的保護作用：靜脈注射葛根素能使犬中度缺血區(qū)的心肌血流量增加，進入缺血區(qū)的血流增多，但嚴重缺血區(qū)的血流量無明顯改變。腹腔注射200mg/kg葛根素對垂體后葉素所致大鼠心肌缺血有明顯改善作用，采用低溫體外循環(huán)下犬動物模型，用電鏡觀察從形態(tài)學方面證明葛根素對停搏140min的全心缺血心肌的超微活物具有良好的保護作用。這可能使葛根素對缺血心肌有保護作用的電生理基礎，其對腦缺血有保護作用。（4）抗心律失常作用：葛根黃酮、黃豆甙元和葛根醇提取物對烏頭堿、氯化鋇、氯化鈣、氯仿以及腎上腺素所致的心律失常有明顯的對抗作用，說明葛根成分可能影響細胞膜對鉀、鈣、鈉離子通道的通透性而減低心肌興奮性，預防心律失常發(fā)生。     對免疫作用的影響：葛根使巨噬細胞的異物吞噬功能活化，而使初期感染狀態(tài)下的異物排除功能增強；通過活化的巨噬細胞對細胞性免疫施以影響。     葛根素和葛根總異黃酮的雌激素樣作用：葛根素和葛根總異黃酮對雌激素低下的動物顯示弱雌激素活性，對正常雌激素水平的動物無明顯雌激素樣活性，而在合用雌二醇時，則部分抑制雌二醇的促子宮生長作用提示葛根素和葛根總異黃酮具有雌激素受體部分激動劑的特性[2]。     對大鼠乳腺、子宮的發(fā)育作用：葛根提取物能顯著提高未成熟大鼠乳腺和子宮重量，能促進未成熟大鼠乳腺及子宮發(fā)育。還證明葛根提取物能增加大鼠血清促卵泡生成素（FSH）、促黃體生成素（LH）雌二醇（E2）含量，減低泌乳素（PRL）含量[3]。     以上研究結果來看，葛根對心腦血管有保護和改善作用，有抗促癌及誘導癌細胞的分化作用。葛根對母鼠生殖器官有顯著作用，但葛根對子宮卵巢形態(tài)組織上的影響研究比較少，針對解決上述問題，進行了以下實驗。 1材料及方法 1.1材料 1.1.1動物： 20日齡的未性成熟雌性小白鼠，內蒙古大學實驗中心提供。 1.1.2藥物：葛根，按常規(guī)水煎濃縮成0.5g/ml煎劑。 1.1.3 試劑與藥品：固定液、HE染色液、各濃度的乙醇、透明液、二甲苯、冰醋酸等。 1.1.4儀器 顯微鏡、切片器、天平和其他實驗室常規(guī)儀器。 1.2 方法     取14只小白鼠，將各窩小白鼠隨機分成對照組、實驗組，稱重，適應環(huán)境一個星期，自由飲水，固體顆粒飼料（內蒙古大學實驗動物研究中心提供）飼養(yǎng)，一天24小時的燈光來保持溫度，溫度（26±2）oC。第27天開始灌藥，灌藥時間早上，用藥前稱重，記錄，一直保持到停藥為止，灌藥時先準備1ml注射器，然后保定小白鼠，實驗組灌胃葛根0.25ml，對照組灌胃相等量的蒸餾水，其他條件同樣。每組每天灌胃一次，連續(xù)16天。停藥后的第二天，把小白鼠仰位保定在小板上，切開頸部皮膚切斷頸動脈放血致死，剖服取出子宮、卵巢稱重，放在配好的固定液內。然后把組織塊修好后，在流水洗12小時以上。脫水透明，浸蠟等過程。然后修塊焊塊做切片，厚度為5um玻璃片上固定。然后用HE染色液進行染色，最后封片。 2結果 2.1葛根對小白鼠體重方面的影響（見表1和曲線1） 表1對照組和實驗組的體重比較（g） 1—4天5—8天9—12天13—16天 對照組20.37±2.4222.78±1.7323.19±1.7924.18±2.65 實驗組20.65±0.7822.79±0.04 24.41±0.80 25.43±1.47 曲線1對照組和實驗組體重比較曲線 1-2d5-8d9-12d13-16d 結果表明,葛根對小白鼠的體重沒有明顯的作用。 2.2葛根對小白鼠子宮卵巢重量的影響（見表2） 表2對照組和實驗組的子宮卵巢重量比較（g） 子宮卵巢重量（P）P/體重 對照組0.1000±0.06030.0039±0.0022 實驗組0.1252±0.07730.0049±0.0029 結果表明，葛根對子宮卵巢重量有一定的增重作用。 2.3 組織形態(tài)學觀察 （見表3）     對照組的卵巢結構為卵巢外層疏松結締組織構成的，皮質比較寬，生長卵泡多，還有少數初級卵泡和閉鎖卵泡（見圖1）。     實驗組的卵巢結構為皮質很寬，內含大量卵泡，皮質的基質是疏松結締組織，髓質位于卵巢的內區(qū)，其中含有神經，許多大而卷區(qū)的血管和淋巴管，少數初級卵泡和閉鎖卵泡，生長卵泡很多。有接近成熟卵泡，在顆粒細胞間尚未出現充滿液體的腔-卵泡腔（見圖2）。     對照組的子宮結構包括子宮內膜，肌層和子宮外膜。子宮外膜疏松結締組織構成的，很明顯，內膜上皮層柱狀上皮，固有膜淺層細胞成分少，深層細胞成分較多，子宮腺體主分布于固有膜淺層，子宮肌內層深部血管比較發(fā)達（見圖3）。     實驗組的子宮結構也是包括子宮內膜，肌層，子宮外膜。子宮外膜：由疏松結締組織覆蓋腹膜間質構成。子宮?。喊▋拳h(huán)外縱行平滑肌層，兩肌層間有大的動脈，靜脈和淋巴管。內膜：固有黏膜下層的表層由疏松結締組織構成，其中的細胞比表層的少的多。實驗組跟對照組相比子宮腔發(fā)達，子宮腺體數量增多，子宮肌纖維層變厚兩肌層間血管發(fā)達，子宮徑增加（見圖4）。 表3對照組和實驗組鏡下觀察比較（個、ug） 卵巢生長子宮腺體子宮直徑 卵泡數量數量 對照組23±016±48.8±3.5 實驗組47±1024±89.0±2.8 3討論：     子宮的發(fā)育受下丘腦垂體神經內分泌系統的調控，促性腺激素、性激素、生長激素可促進子宮和卵巢的發(fā)育，其中雌激素對子宮和卵巢的發(fā)育中起重要作用。研究證明葛根水煎液的主要成分是黃酮類和葛根素類，具有雌激素樣作用，既促子宮及卵巢的發(fā)育[5]。本次研究證明，葛根水煎液能顯著促進未成熟大鼠的子宮、卵巢的發(fā)育，使小白鼠的子宮卵巢的重量增加，還有小白鼠的子宮腺體數量和卵巢的卵泡數量明顯增多。從組織學角度上也證明，葛根水煎液確實有有雌激素樣作用，既促子宮及卵巢的發(fā)育。這結果與薛曉鷗等[2，3，4]結果一致。這可能是葛根水煎液中的雌激素樣作用所致，即作用于下丘腦和垂體，促進FSH、LH、PRL分泌，增加內源性FSH、LH、PRL水平。發(fā)揮促進子宮發(fā)育的作用。卵巢是雌性的性腺，卵巢的周期改變產生性周期，下丘腦-垂體-卵巢軸三者之間是在相互影響，相互制約中維持著內分泌的動態(tài)平衡。葛根提取物能促進未成熟雌性小白鼠子宮、卵巢的發(fā)育，使子宮卵巢功能正常發(fā)揮，子宮重量增加，表明其對垂體-卵巢軸具有興奮作用。也有認認為葛根具有植物激素可代替雌激素對機體進行調節(jié)，葛根水煎液中確有此類化合物[5]，能促進雌性卵巢與子宮的發(fā)育，部分是其直接作用于卵巢、子宮，部分間接作用于卵巢和子宮，是通過垂體-子宮-卵巢軸有調整作用[3]。其作用機理和葛根水煎液的有效成分待進一步研究。