藥敏實驗的病原菌如何培養(yǎng)？

wangyanzhensuo

請大家?guī)蛶兔?！我對病原菌的培養(yǎng)不會！請幫助！:huahua:

⒉冄⑧號

是臨床上做藥敏嗎 直接那動物細菌多的地方涂到平皿上就可以了

adidas1052

用瓊脂培養(yǎng)基平皿培養(yǎng)！

l24029789

培養(yǎng)基會做吧? 最簡單的辦法就是留肝 用肝在培養(yǎng)基上涂一層,之后放好藥敏片,放入恒溫箱,過6小時→OK

l24029789 于 2009-10-9 18:30 補充以下內容

如果你需要培養(yǎng)基的配方 可以留言

anfu123

啥方？可以分享分享嗎？

風1119

體外抗菌藥物敏感試驗
一、抑菌試驗
試驗方法主要有定性測定的紙片瓊脂擴散法（disk agar diffusion tesk, Kirby-bauer tesk）、定量測定的稀釋法（dilution tist）和E試驗法（E-test）。
(一) 紙片瓊脂擴散法
1.基本原理   
將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種待檢菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后不斷地向紙片周圍區(qū)域擴散，形成遞減的梯度濃度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內待檢菌的生長被抑制，從而產生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映檢測菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負相關，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
2.試驗方法
⑴ 培養(yǎng)基的制備
普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：可去生化試劑店購買。做不同細菌的藥敏試驗可選擇不同的培養(yǎng)基。
⑵ 藥敏片的制備
① 藥敏片的制備
取新華1號定性濾紙，用打孔機打成6毫米直徑的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎。經15磅15-20分鐘高壓消毒后，放在37℃溫箱或烘箱中數天，使完全干燥。
    ② 抗菌藥紙片制作
在上述含有50片紙片的青霉素瓶內加入藥液0.25毫升，并翻動紙片，使各紙片充分浸透藥液，翻動紙片時不能將紙片搗爛。同時在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內過夜，干燥后即密蓋，如有條件可真空干燥。切勿受潮，置陰暗干燥處存放，有效期3-6個月。
    ⑶ 試驗方法
① 于純培養(yǎng)平板上，挑取相同的菌落4～5個（圖12-1a）。
② 接種于3～5ml水解酪蛋白（Mueller-Hinton,MH）肉湯中，經35℃培養(yǎng)6～8h(圖12-1b)。
③ 用無菌生理鹽水或MH肉湯校正菌液濁液，使其與標準比濁管的濃度相同(圖12-1c）。校正過的菌液（一般為0.5麥氏單位）在15min內接種完。
④ 用無菌棉拭蘸取校正過的菌液，在試管壁上擠壓幾次，壓去多余的菌液，涂布整個MH平板表面，反復數次，每次旋轉平板60°(圖12-1d)，使整個平板涂均勻。
⑤ 涂布菌液的平板于室溫中干燥3～5min后，用紙片分配器或無菌鑷子取藥敏紙片，貼于平板表面，并用鑷子輕壓一下紙片，使其貼平。每張紙片的間距不小于24mm，紙片的中心距平板的邊緣不小于15mm，90mm直徑的平板宜貼6張藥敏紙片(圖12-1e)。（6）將貼好紙片的平板置35℃培養(yǎng)18～24h后，用標尺量取抑菌圈直徑(圖12-1f)。
3.結果判斷　
根據抑菌圈的大?。ú煌股仄湟志Υ笮〉臉藴什灰恢拢?，判斷為敏感（S）、耐藥（R）或中度敏感（I）。某些細菌可蔓延生長至某種抗生素的抑菌圈內，如磺胺抑菌圈內可能有微量的細菌生長，可忽略不計，應以外圈為準。
   
(a)                                             (b)                          (c)
   
(d)                                  (e)                             (f)
圖12-1　　Kirby-Bauer法試驗程序
（a）挑取菌落（b）轉種肉湯（c）比濁（d）涂布平板上（e）放置藥敏紙片（f）量取抑菌圈大小
（二）試管稀釋法
即最低（或最?。┮志鷿舛龋╩inimal inhibitory concentration,MIC）的測定。
1.基本原理　
在肉湯中將抗菌藥物進行一系列（對倍）稀釋后，定量接種待檢菌，35℃培養(yǎng)24h后觀察，抑制待檢菌肉眼可見生長的最低藥物濃度，即為該藥物對待檢菌的最低抑菌濃度。
2.試驗方法　
取無菌試管26支，排成兩排。另取3支試管，分別作為肉湯對照管、待檢菌生長對照管和質控菌生長對照管。每管加入MH肉湯2ml，在第1管加入經MH肉湯稀釋的藥物原液（256mg/L）2ml混勻，然后吸取2ml至管2管，混勻后再吸取2ml至第3管。如此連續(xù)對倍稀釋至第13管，并從第13管中吸取2ml棄去。此時各管含藥濃度依次為128、64、32、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125mg/L。第1排試管每管加入待檢菌菌液（1×107菌落形成單位（CFU）/ml）0.1ml，第2排試管每管加入標準菌菌液（1×107菌落形單位(CFU)/ml）0.1ml，最終接種菌量約為5×105 CFU/ml。置35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24h。觀察有無細菌生長。
3.結果判斷　
藥物最低濃度管無細菌生長者（對照管細菌生長良好），即為待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）。(圖　12-2)

圖12-2  MIC測定的試驗結果
左起第四管為藥物最低濃度而無細菌生長，即待檢菌的MIC。
（三）E試驗法
1.基本原理　
該方法結合擴散法和稀釋法的原理和特點，操作簡便如擴散法，但可以同稀釋法一樣直接定量測出藥物對待檢菌的MIC。其試條為商品化塑料試條，長50mm,寬5mm，內含干化、穩(wěn)定、濃度由高至低呈指數梯度分布的某種抗菌藥物?？捎糜诟鞣N常見菌、微需氧菌、分枝桿菌、厭氧菌和真菌等的藥敏試驗。酵母菌和霉菌的藥敏試驗是一項新的技術，由于影響因素較多，直接藥敏試驗為困難，E試驗法由于結果準確、穩(wěn)定，受到認同。
2.試驗方法　
菌液、平板接種等同紙片瓊脂擴散法（厭氧菌、隱球菌和其他菌懸液濃度為1個麥氏單位，其他細菌為0.5個麥氏單位）。將E-test試條輕放在接種、干燥后的瓊脂平板上（90mm平板放置1～2條），置一定條件下培養(yǎng)：厭氧菌置厭氧環(huán)境培養(yǎng)48h，微需菌置5%～10%二氧化碳環(huán)境培養(yǎng)24～48h，隱球菌培養(yǎng)48～72h，其他細菌培養(yǎng)24h。
3.結果判斷　
培養(yǎng)后圍繞著試條可形成一個卵圓形的抑菌圈，抑菌圈與試條的橫向相交處的讀數刻度，即是該抗菌藥物對待檢菌的MIC。(圖12-3，圖12-4)

圖12-3　　E試驗示意圖

圖12-4 E試驗法的試驗結果
（a）常見菌的試驗結果（b）苛養(yǎng)菌的試驗結果（c）厭氧菌的試驗結果（d）酵母菌的試驗結果（e）真菌的試驗結果

ghw221

一般用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)就可以。