免疫增強(qiáng)劑有機(jī)硒在生長(zhǎng)豬上的應(yīng)用研究

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免疫增強(qiáng)劑有機(jī)硒在生長(zhǎng)豬上的應(yīng)用研究 摘 要 選擇日齡相近、平均體重(30.0±0.5) kg的杜×長(zhǎng)×大三元雜交小母豬20頭，隨機(jī)分為2個(gè)處理，每個(gè)處理10頭，對(duì)照組為基礎(chǔ)日糧組，處理組為基礎(chǔ)日糧+有機(jī)硒（硒酵母200mg/kg），研究有機(jī)硒替代抗生素對(duì)生長(zhǎng)豬免疫性能的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明：在飼料中添加有機(jī)硒，能夠提高生長(zhǎng)豬血清中球蛋白與白蛋白比值，提高牛血清白蛋白（BSA）免疫抗體OD值（免疫第7d時(shí)差異達(dá)顯著水平，P<0.05）及植物血球凝集素（PHA）刺激皮褶厚度增加值。 關(guān)鍵詞 有機(jī)硒；生長(zhǎng)豬；生產(chǎn)性能；免疫性能 中圖分類(lèi)號(hào) S852.4 硒是動(dòng)物必需的微量元素之一，它與動(dòng)物生長(zhǎng)、發(fā)育和疾病發(fā)生有著密切的關(guān)系。硒以無(wú)機(jī)硒和有機(jī)硒形式存在，無(wú)機(jī)硒包括亞硒酸鈉、硒酸鈉、硒化鈉、亞硒酸鈣；有機(jī)硒包括硒酵母、硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸等。有機(jī)硒的生物利用率高于無(wú)機(jī)硒，易于動(dòng)物吸收利用，且有機(jī)硒毒性小，不會(huì)對(duì)人和環(huán)境造成不良影響[1]。硒與動(dòng)物的免疫狀況密切相關(guān)，被稱(chēng)為免疫促進(jìn)劑[5]。硒能刺激免疫球蛋白及抗體的生成，提高機(jī)體體液免疫、細(xì)胞免疫和非特異免疫功能；缺硒可導(dǎo)致免疫能力低下，而補(bǔ)硒可提高機(jī)體免疫力。日前有機(jī)硒對(duì)促進(jìn)生長(zhǎng)豬免疫機(jī)能方面的研究在國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少，為尋求抗生素替代品，提高生長(zhǎng)豬自身免疫力，以生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)無(wú)公害豬肉而開(kāi)展了本試驗(yàn)研究，旨在探討有機(jī)硒對(duì)生長(zhǎng)育肥豬免疫性能的影響，為今后指導(dǎo)生產(chǎn)提供參考。 1 試驗(yàn)材料及方法 1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)及試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)在河南省黃泛區(qū)農(nóng)場(chǎng)第一種豬場(chǎng)進(jìn)行。選擇日齡相近、平均體重（30.0±0.5）kg的杜×長(zhǎng)×大三元雜交小母豬20頭，隨機(jī)分為2個(gè)處理，每個(gè)處理10頭，對(duì)照組為基礎(chǔ)日糧組，處理組為基礎(chǔ)日糧+有機(jī)硒（硒酵母0.02%）。 1.2 試驗(yàn)飼料及飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)日糧營(yíng)養(yǎng)水平采用NRC(1998)標(biāo)準(zhǔn)，飼料配方及營(yíng)養(yǎng)水平指標(biāo)見(jiàn)表1。試驗(yàn)期間試驗(yàn)豬飼養(yǎng)管理采用常規(guī)飼養(yǎng)管理模式，試驗(yàn)豬按常規(guī)飼養(yǎng)管理程序進(jìn)行驅(qū)蟲(chóng)和免疫，采用干粉料日喂3次，自由采食、自由飲水，豬只發(fā)生病變或異常，要及時(shí)處理并記錄豬只耳號(hào)。 1.3 試驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)及方法 .3.1 血液生化指標(biāo) 總蛋白(TP)、球蛋白（GLB）、清蛋白（ALB）、計(jì)算血清球蛋白與白蛋白的比值（G/A）。 1.3.2 免疫指標(biāo) 1.3.2.1 體液免疫指標(biāo) 使用牛血清白蛋白(BSA)試劑，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，在酶聯(lián)免疫自動(dòng)讀數(shù)儀492nm處讀數(shù)，以1：50倍稀釋光吸收值表示其抗體生成，測(cè)定血清中BSA抗體效價(jià)(OD值)。 1.3.2.2 細(xì)胞免疫指標(biāo) 遲發(fā)性過(guò)敏反應(yīng)的測(cè)定，在生長(zhǎng)豬左腿內(nèi)側(cè)皮下注射植物血球凝集素（PHA），右側(cè)注射生理鹽水，測(cè)定24h后腿皮褶厚度增厚差值。 1.4 試驗(yàn)處理 在正式試驗(yàn)開(kāi)始后的第7d，每個(gè)處理（對(duì)照組和處理組）選取3頭體重相近的健康豬，每千克體重耳后肌肉注射牛血清白蛋白(BSA)1mg進(jìn)行免疫，并在免疫后的0d(試驗(yàn)的第7d)、7d(試驗(yàn)第14d)和21d(試驗(yàn)第28d)用10ml真空采血管頸靜脈采血5ml,3 000r/min離心15min，制備血清，-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩? 于試驗(yàn)正式開(kāi)始后的第14d，對(duì)處理組剩余的豬只隨機(jī)選取2頭，進(jìn)行皮膚過(guò)敏試驗(yàn)。其中在1頭豬的左大腿內(nèi)側(cè)腹骨溝皮下注射0.5ml PHA（250μg/ml），右腿注射0.5ml生理鹽水，圈圓圈標(biāo)記。并分別于注射前和注射24h后用厚度計(jì)測(cè)定注射部位的皮褶厚度（3次讀數(shù)，求平均值），再求出兩腿皮褶增厚的差值，觀察過(guò)敏反應(yīng)程度。另外1頭左腿注射1ml PHA（250μg/ml），右腿注射1ml生理鹽水(其它處理同上1頭豬)，測(cè)定24h后皮褶厚度增厚值。 2 試驗(yàn)結(jié)果與分析 2.1 血液生化指標(biāo) 分別于正式試驗(yàn)開(kāi)始后的第7d、第14d、第28d前腔靜脈采血制備血清，檢測(cè)血清中的總蛋白、白蛋白，并計(jì)算血清球蛋白與白蛋白比值（G/A），試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。 血清球蛋白的主要作用是用以維持機(jī)體血管內(nèi)滲透壓的平衡和物質(zhì)的運(yùn)輸?？贵w是球蛋白重要的組成部分，炎癥反應(yīng)和應(yīng)激狀態(tài)下，血清球蛋白的含量增加。由表2可見(jiàn)，對(duì)照組與處理組豬血清總蛋白含量在試驗(yàn)1～28d時(shí)均有上升趨勢(shì)；且對(duì)照組上升幅度大于處理組，但統(tǒng)計(jì)分析差異不顯著（P<0.05）。在整個(gè)試驗(yàn)期間對(duì)照組血清中白蛋白含量上升，而且對(duì)照組血清中白蛋白含量高于處理組；處理組豬血清中白蛋白含量在試驗(yàn)的第14d時(shí)稍有下降，而在試驗(yàn)的第28d時(shí)上升。在整個(gè)試驗(yàn)期，處理組和對(duì)照組血清中G/A值均表現(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì)，同時(shí)，在試驗(yàn)的第7d、第14d、第28d，處理組血清中G/A值均高于對(duì)照組，其中第7d和第14d時(shí)血清中G/A值統(tǒng)計(jì)分析差異達(dá)到顯著水平（P<0.05）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在經(jīng)過(guò)抗原牛血清白蛋白刺激后，機(jī)體的免疫系統(tǒng)被激活，更多的蛋白質(zhì)用于抗體的合成，隨著抗體產(chǎn)生量的提高，血液中的球蛋白含量隨之增加，G/A值升高。表明有機(jī)硒具有提高生長(zhǎng)豬體液免疫的作用。 2.2 牛血清白蛋白（BSA）抗體OD值 前腔靜脈采取BSA免疫后第0d、第7d、第21d的試驗(yàn)豬血清，檢測(cè)BSA抗體OD值。對(duì)照組和處理組的牛血清白蛋白（BSA）抗體OD值結(jié)果見(jiàn)表3。 分析發(fā)現(xiàn)，在BSA免疫前，豬血清中已經(jīng)含有BSA抗體，且變異很大，而試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)認(rèn)為BSA為一種異源蛋白抗原，豬血清中BSA抗體水平應(yīng)該為零。估計(jì)這種抗體是由于許多疫苗如豬瘟疫苗中含有牛血清白蛋白成分(例如作為佐劑)造成的，而在本試驗(yàn)開(kāi)始之前，該豬場(chǎng)已對(duì)試驗(yàn)豬群進(jìn)行過(guò)兩次豬瘟疫苗免疫。盡管如此，當(dāng)以注射BSA抗體OD值為1時(shí)，用各時(shí)間點(diǎn)的OD值與之比較，則比值仍可出現(xiàn)較明顯的規(guī)律性變化，即免疫后第7d時(shí)，BSA抗體的OD值均升高，而且，處理組與對(duì)照組相比差異達(dá)顯著水平(P<0.05)。免疫后第21d時(shí)BSA抗體的OD值均下降，且處理組(有機(jī)硒組)下降幅度大于對(duì)照組，表明有機(jī)硒能被用來(lái)合成谷胱甘肽過(guò)氧化酶（ＧＳＨ-Ｐｘ）,以消除由于應(yīng)激而產(chǎn)生的更多自由基(主要是通過(guò)降低氧化磷酸化的偶聯(lián)作用，導(dǎo)致電子滲透的增加和超氧化基的過(guò)量產(chǎn)生)，具有降低免疫反應(yīng)程度，避免機(jī)體長(zhǎng)期處于高度應(yīng)激狀態(tài)，從而達(dá)到促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體生長(zhǎng)的作用。 2.3 皮褶厚度增加值 分別于正式試驗(yàn)開(kāi)始后的第7d、第14d、第28d每個(gè)處理隨機(jī)選擇1頭豬，在豬的左腿內(nèi)側(cè)肌肉注射植物血球凝集素（PHA）0.5ml，右腿內(nèi)側(cè)注射0.5ml生理鹽水；再另外分別選擇1頭豬，在豬的左腿內(nèi)側(cè)肌肉注射植物血球凝集素1.0ml，右腿內(nèi)側(cè)注射1.0ml生理鹽水，并于24h后用厚度測(cè)量?jī)x檢測(cè)左、右腿皮褶厚度增加值，計(jì)算左右腿24h后皮褶厚度增厚差值，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。 PHA是一種促有絲分裂原。動(dòng)物皮下組織對(duì)PHA的反應(yīng)狀況是細(xì)胞免疫的一項(xiàng)指標(biāo)[6-8]。免疫組織學(xué)分析，這種皮下反應(yīng)的主要參與者為單核細(xì)胞和致敏的T淋巴細(xì)胞，其反應(yīng)包括局部發(fā)炎感染并向皮下擴(kuò)散，血管周?chē)准?xì)胞聚集成套狀、水腫以及皮膚膠原蛋白隆起。由表4可見(jiàn)，試驗(yàn)組豬PHA注射后24h皮褶厚度增厚值大于對(duì)照組（在試驗(yàn)第14d時(shí)，0.5ml PHA注射劑量試驗(yàn)組豬24h后皮褶厚度增厚值小于對(duì)照組，這可能與個(gè)體差異有關(guān)），并且給試驗(yàn)豬注射1ml PHA皮褶厚度增厚差值大于注射0.5mlPHA劑量時(shí)皮褶增厚差值，表明給生長(zhǎng)豬注射PHA 24h后皮褶厚度的增厚差值與注射PHA的劑量有關(guān)。同時(shí)，本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在試驗(yàn)的第14d時(shí)，皮褶增厚差值大于第7d時(shí)的皮褶增厚差值，而在試驗(yàn)的第28d時(shí)，皮褶增厚差值又下降，表明隨日齡增加，生長(zhǎng)豬機(jī)體免疫功能逐漸完善。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在生長(zhǎng)豬飼料中添加有機(jī)硒有提高生長(zhǎng)豬細(xì)胞免疫的作用。 綜上所述，有機(jī)硒(硒酵母)有提高生長(zhǎng)豬血液中G/A值的作用，提高牛血清白蛋白（BSA）免疫抗體OD值（免疫第7d時(shí)差異達(dá)顯著水平，P<0.05）及植物血球凝集素（PHA）刺激皮褶厚度增加值的作用，即具有提高動(dòng)物機(jī)體免疫性能的能力。 參考文獻(xiàn) 1 郝智慧，袁纓.微量元素硒的研究新進(jìn)展[J].遼寧畜牧獸醫(yī)， 1999（1）：27～30 2 毛勝勇.有機(jī)硒在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用研究[J]. 飼料與畜牧，2000（6）：9～11 3 Kim Y Y,Mahan D C. 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