免疫增強劑在雞疫病防制中的應(yīng)用

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免疫增強劑是先于抗原或與抗原同時應(yīng)用，能非特異性地改變或增強機體對抗原的特異性免疫應(yīng)答，能增強相應(yīng)抗原的免疫原性或改變免疫反應(yīng)類型，而本身并無抗原性的物質(zhì)?，F(xiàn)已證明，具有免疫增強作用的物質(zhì)不下幾十種，常用的有左旋咪唑、西咪替丁、甲硝唑、蜂膠、福氏佐劑、油佐劑、維生素Ｅ、轉(zhuǎn)移因子和干擾素、白細胞介素等 ［ 1-2 ］ 。陳如明等 ［ 3 ］ 研究報道，黨參多糖、柴胡多糖、黃芪多糖、香菇多糖、當歸多糖、玉米花粉多糖、銀耳多糖等植物性多糖及黃芪、靈芝、麥飯石、甘草、白術(shù)、人參、黨參、茯苓等中藥對免疫系統(tǒng)也有刺激作用，可以提高免疫系統(tǒng)組織細胞的活性，增加機體免疫細胞的生長及抗體的合成，從而提高機體的抗病力，維持機體內(nèi)環(huán)境平衡，具有明顯的免疫增強作用。 1 化學(xué)類藥物 1.1 左旋咪唑 左旋咪唑是第 1 個被發(fā)現(xiàn)具有免疫調(diào)節(jié)作用的人工合成化合物，具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)活性，促進細胞免疫和體液免疫。左旋咪唑能增強正常雞體液免疫應(yīng)答反應(yīng)，使雞抗胸腺依賴性抗原抗體滴度，抗非胸腺依賴性抗原抗體滴度均明顯升高。 (1) 左旋咪唑?qū)﹄u新城疫疫苗的免疫增強作用。喬彥良等 ［ 4 ］ 研究結(jié)果顯示高母源抗體雛雞首次免疫雞新城疫（ Newcastle disease,ND ）活疫苗前或疫苗免疫后配合應(yīng)用 10 mg/kg 體重左旋咪唑?qū)η捌谘蹇闺u新城疫病毒 (Newcastle disease virus,NDV) 抗體滴度無明顯影響，但能延長抗體高峰水平維持時間。 ND 疫苗二次免疫前應(yīng)用 10 mg/kg 體重左旋咪唑，血清內(nèi)抗 NDV 特異性抗體明顯升高。 （ 2 ）左旋咪唑?qū)︸R立克氏病疫苗的免疫增強作用。喬彥良等 ［ 5 ］ 報道疫苗免疫同時應(yīng)用左旋咪唑明顯促進馬立克氏病疫苗接種雞細胞免疫和體液免疫功能，用藥后外周血 T 淋巴細胞轉(zhuǎn)化明顯增強，血清內(nèi)抗 MDV 特異性抗體明顯升高。 （ 3 ）左旋咪唑?qū)﹄u傳染性法氏囊病疫苗的免疫增強作用。韓雪清等 ［ 6 ］ 報告雛雞免疫前應(yīng)用左旋咪唑 (3.8,0.38,0.038 mg/kg) ， 7 d ～ 14 d 后即表現(xiàn)出免疫增強作用，單用雞傳染性法氏囊病 (Infectious bursal disease,IBD) 及 IBD+ND 疫苗聯(lián)合免疫時可使抗 ND 、 IBD 抗體水平明顯升高，且左旋咪唑具有頡頏 IBD 弱毒疫苗對 ND 疫苗免疫的干擾作用。喬彥良等 ［ 7 ］ 報告左旋咪唑處理 IBD 雞，可促進其增重，恢復(fù)脾及法氏囊免疫活性細胞，用于正常雞也可增高法氏囊重量指數(shù) (B ∶ B) 及脾重量。

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1.2 西咪替丁為高效選擇性H2受體頡頏劑，在人醫(yī)臨床廣泛用于抑制胃酸分泌，促進胃腸道潰瘍康復(fù)。H2受體不僅僅局限分布于胃腸道，也廣泛分布于淋巴細胞表面。因此，人們對西咪替丁調(diào)節(jié)組織胺的免疫抑制作用及其對免疫應(yīng)答的其他作用進行了研究，證明西咪替丁具有促進機體免疫功能的廣泛作用。研究中發(fā)現(xiàn)西咪替丁明顯促進雞體液免疫和細胞免疫功能。在細胞免疫中，特異性抗原可刺激淋巴細胞釋放巨噬細胞移動抑制因子（macrophage inhibiting factor MIF），使巨噬細胞功能活化，并抑制其游走運動，組織胺能抑制致敏淋巴細胞生成MIF，西咪替丁能拮抗組織胺對MIF生成的抑制作用。研究中首次觀察了西咪替丁對正常雞細胞免疫的影響，發(fā)現(xiàn)西咪替丁明顯促進正常雞體內(nèi)T淋巴細胞增殖，使CD4+細胞百分比升高，CD8+細胞百分比下降，CD4+/CD8+細胞比值升高，使雞外周血淋巴細胞IL-2活性明顯升高，表明西咪替丁明顯促進雞細胞免疫功能。在體液免疫中，西咪替丁促進小鼠抗SRBC抗體產(chǎn)生；可使破傷風(fēng)毒素免疫小鼠體內(nèi)破傷風(fēng)抗毒素滴度明顯增加；可使免疫原性較弱的抗原誘導(dǎo)的抗體滴度明顯升高。研究結(jié)果表明，西咪替丁均明顯促進機體抗胸腺依賴性和非胸腺依賴性抗原抗體的產(chǎn)生，增強機體體液免疫功能。（1）西咪替丁對雞新城疫疫苗的免疫增強作用。免疫ND活疫苗前配合應(yīng)用西咪替丁可明顯頡頏母源抗體對疫苗免疫的影響，使機體維持較高抗體水平；疫苗免疫后配合應(yīng)用西咪替丁可明顯加速抗體高峰水平的到來，并使抗體高峰水平維持時間延長。疫苗二次免疫前應(yīng)用西咪替丁明顯促進ND疫苗接種雞體液免疫功能，用藥后血清內(nèi)抗NDV特異性抗體明顯升高［4］。（2）西咪替丁對馬立克氏病疫苗的免疫增強作用。研究結(jié)果顯示疫苗免疫同時應(yīng)用10 mg/kg～100 mg/kg體重西咪替丁明顯促進馬立克氏病疫苗接種雞細胞免疫和體液免疫功能，用藥后外周血T淋巴細胞轉(zhuǎn)化明顯增強，血清內(nèi)抗HVT特異性抗體明顯升高［5］。 1.3 甲硝唑為臨床上常用的抗微生物和抗寄生蟲藥物，研究發(fā)現(xiàn)其也具有免疫調(diào)節(jié)活性，喬彥良等［8］研究結(jié)果顯示高母源抗體雛雞首次免疫雞ND活疫苗免疫前配合應(yīng)用10 mg/kg～100 mg/kg體重甲硝唑可明顯頡頏母源抗體對疫苗免疫的影響，使血清抗NDV抗體滴度維持較高水平。疫苗免疫后配合用甲硝唑可明顯加速抗體高峰水平的到來，并使抗體高峰水平維持時間延長。雞ND疫苗二次免疫前應(yīng)用10 mg/kg～100 mg/kg體重的甲硝唑可明顯促進雞ND疫苗接種雞體液免疫功能，用藥后血清內(nèi)抗NDV特異性抗體明顯高于未用藥對照雞。

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2 多糖、糖苷及復(fù)方中藥 黃芪多糖（ astragalus poly saccharide ， APS ）能顯著促進雞脾和腔上囊的發(fā)育，這與目前許多有關(guān) APS 對免疫器官發(fā)育影響的研究結(jié)果相一致（李先榮， 1989 等；花象柏等， 1993 ）。研究表明， APS 不但可以促進機體正常免疫器官的發(fā)育和免疫活性細胞的生成，提高免疫活性，而且能抗免疫抑制劑對免疫器官的損害或修復(fù)受損的免疫器官，使免疫器官的組織結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常水平，維持機體的正常免疫機能。 研究表明， APS 分別與雞 ND Ⅰ系苗、 ND Ⅳ系苗、 ND 油乳劑苗和 IBD 凍干苗以肌肉注射、皮下注射、點眼、滴鼻不同方式配合使用，均可使雞血清 ND 和 IBD 抗體效價在相同日齡、不同日齡、不同 APS 用量 3 種情況下顯著高于未使用 APS 組，顯示了明顯的免疫增強作用。國內(nèi)近 20 年來對近百種中草藥來源的多糖進行了化學(xué)和活性研究。許多試驗證實 APS 具有免疫調(diào)節(jié)作用，可顯著促進正常機體的抗體生成細胞數(shù)，提高血清 IgG 水平黃會嶺等 [9] 。試驗表明，在雞疫苗免疫中，將 APS 直接用作免疫佐劑或制成一定濃度的溶液作為疫苗的稀釋液，可以提高機體免疫力和疫苗保護率。而降低雞馬立克氏病的發(fā)病率和死亡率。 郝艷紅等 [10] 試驗表明， 1 日齡雛雞用馬立克氏病毒（ Marek ′ s disease virul ， MDV ）強毒 vMDV 人工感染并注射 APS 后，可使 MD 的發(fā)病率和死亡率下降，對照組分別為 42% 和 34% ，而 APS 組為 40% 和 13% ，顯著增強中樞、外周淋巴器官和主要實質(zhì)器官的含硒谷胱甘肽過氧化物酶活性，明顯降低各器官組織中 LPO 的含量。劉永杰等 [11] 報道， 1 日齡 AA 肉用雛雞以 MD 強毒 vMDV 人工感染后， MD 發(fā)病率為 33.75% ，死亡率 11.25%; 而 vMDV 感染注射 APS 組雞的發(fā)病率為 17.5% ，死亡率為 5% ，且 IL-2 誘生活性和 T 淋巴細胞增殖反應(yīng)顯著升高。劉紅麗等 [12] 報道， APS 通過增強機體抵抗力，調(diào)節(jié)自由基反應(yīng)系統(tǒng)兩方面作用防止腫瘤發(fā)生，抑制 MDV 造成的損害。并且 APS 無毒無害，將之應(yīng)用于 MD 的防治會起到明顯效果。 黃芪多糖和卡介苗（ bacille calmette guerin ， BCG ）能增強雞球蟲免疫保護力。在雞球蟲保護性免疫機制中，居于主導(dǎo)地位的是細胞免疫。細胞免疫應(yīng)答主要是通過依賴胸腺的Ｔ淋巴細胞實現(xiàn)的。 BCG 和 APS 處理球蟲免疫雞后一周即可顯示其免疫增強作用，顯著提高 E ?玫瑰花環(huán)形成率和 T 淋巴細胞轉(zhuǎn)化水平，并維持在高水平上。這表明 BCG 和 APS 均具有顯著的免疫促進作用，能加速機體細胞免疫功能的發(fā)育完善，從而改善雛雞免疫應(yīng)答能力較低的狀況，提高球蟲免疫的效果。沈志強等 ［ 13 ］ 研究報道球蟲免疫雞經(jīng) BCG 或 APS 處理后，在雞體內(nèi)完成生活史循環(huán)的球蟲數(shù)量減少，克糞便卵囊數(shù)降低，攻蟲后抗球蟲指數(shù)明顯提高。 人參、黃芪、黨參、白術(shù)等中草藥配制成的中藥免疫增強劑，在臨床上取得了較好的增強免疫效果。現(xiàn)代方法研究證實，其增強免疫作用的機制與神經(jīng)系統(tǒng)、垂體腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)的功能有關(guān)（花象柏等， 1993 ）。人參皂甙對小鼠、大鼠及豚鼠等多種動物單核?巨噬細胞系統(tǒng)吞噬功能均有明顯的激活作用；黃芪既能促進淋巴細胞的轉(zhuǎn)化，又能增強單核?巨噬細胞系統(tǒng)的功能（鄧文龍等， 1983 ），使Ｅ?玫瑰花環(huán)形成細胞數(shù)增加，并能誘生干擾素，延長某些原代細胞培養(yǎng)和二倍體細胞存活的能力。中藥免疫增強劑不但可促進外周血液 ANAE+T 淋巴細胞總數(shù)的增值，而且能明顯提高輔助型 T 淋巴細胞的數(shù)量，較好地增強火雞皰疹病毒苗 (HVT) 對雞馬立克氏病的免疫效果。免疫增強劑的應(yīng)用不但可促進Ｔ淋巴細胞的增殖，而且可提高輔助型 T 淋巴細胞的比例，從而較好地改善 MD 的免疫效果。? 雞傳染性喉氣管炎（ Infectious laryngotracheitis ， ILT ）疫苗免疫會引起雞紅細胞免疫功能的短暫性降低。 Siegel 在 1981 年提出了紅細胞免疫系統(tǒng)假說理論，認為紅細胞表面有許多與免疫有關(guān)的的物質(zhì)，如 CR1 、 CR3 、 CD58 、 CD59 等，紅細胞有識別、黏附、殺傷抗原、清除免疫復(fù)合物 (circulating immune complexes) 的功能，參與機體免疫調(diào)控，遞呈抗原，促進白細胞的免疫功能，并有完整的自我調(diào)控系統(tǒng)，紅細胞是機體免疫系統(tǒng)的重要組成部分。現(xiàn)代紅細胞免疫理論認為，在許多疾病的發(fā)病機理中，紅細胞免疫缺陷和免疫功能低下占有很重要的地位。健康雞經(jīng)傳染性喉氣管炎疫苗免疫后， RBC-CR1 花環(huán)率和 RBC-IC 花環(huán)率明顯降低，說明 ILT 疫苗免疫會引起機體紅細胞免疫功能短暫性下降。中藥免疫增強劑能夠提高 RBC-CRl 花環(huán)率和 RBC-IC 花環(huán)率 , 并可激發(fā)機體在免疫后很快產(chǎn)生較高濃度的抗體。李繁等 ［ 14 ］ 試驗證明，中藥免疫增強劑與 ILT 疫苗同時應(yīng)用，能夠消除 ILT 疫苗免疫引起紅細胞免疫功能降低的過程 , 提高疫苗的免疫效果。 3 花粉 大量試驗證明，花粉對促進免疫器官發(fā)育、增強免疫細胞活性、提高機體免疫功能有很好的效果（李存德等， 1987 ）。據(jù)王維義等（ 1987 ）報道，油菜蜂花粉能明顯增強大鼠、小鼠、豚鼠對綿羊紅細胞的免疫應(yīng)答反應(yīng)，提高機體的抗體水平。以油菜素內(nèi)酯為主要成份的油菜蜂花粉提取液制劑——“ 906 ”免疫增強劑具有明顯的增強巨噬細胞功能的作用（賀澄日等， 1994 ）。賀澄日等 [15] 研究證明，“ 906 ”免疫增強劑能顯著提高雞新城疫 I 系苗免疫后的抗體水平，且在 30 d 內(nèi)維持與油乳劑新城疫疫苗相近的免疫效果。目前新城疫油乳劑疫苗的價格是Ⅰ系苗的 30 倍。若能將價格低廉、具有明顯提高 I 系苗 HI 抗體效價的“ 906 ”免疫增強劑做為佐劑，與Ⅰ系苗配合研制具有免疫效果好、作用時間長的新型疫苗，應(yīng)用于雞新城疫的防治，則可大大降低防疫費用，提高經(jīng)濟效益。 4 蜂膠 蜂膠的藥理作用主要有殺菌抗病毒、抗炎癥、鎮(zhèn)痛、抑制過氧化物生成等作用，并能激活機體免疫防衛(wèi)系統(tǒng)，促進抗體產(chǎn)生，增強巨噬細胞的吞噬能力，增加抗體再生功能，提高機體特異性和非特異性免疫力等。電鏡觀察可知，雞減蛋綜合征蜂膠滅活疫苗的超微結(jié)構(gòu)主要為蜂膠顆粒吸附病毒粒子并相互交聯(lián)成類免疫刺激復(fù)合物結(jié)構(gòu)，具有抗原“倉庫”作用和免疫刺激復(fù)合物作用。同時蜂膠顆粒與病毒粒子仍保持各自完整的形態(tài)結(jié)構(gòu)，有利于被機體吸收后而發(fā)揮各自的功效和協(xié)同作用，這可能是該疫苗具有較長免疫期與保存期的主要原因。疫苗中有少量的裸露游離的病毒粒子和蜂膠顆粒，接種機體后均可迅速刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，這是該疫苗產(chǎn)生堅強免疫力時間早的主要原因。 據(jù)資料報道，雞體內(nèi) EDS ? 76HI 抗體價在? 6 log2 ?以上即可抵抗 EDS ? 76 病毒的感染。試驗用天然物質(zhì)蜂膠代替?zhèn)鹘y(tǒng)的化學(xué)物質(zhì)為免疫增強劑制備的 EDS ? 76 蜂膠苗，免疫后 7 d 的 EDS ? 76HI 抗體價達 7 log2 ～ 10 log2 。因此，該苗 7 d 產(chǎn)生堅強免疫力，較傳統(tǒng)油苗提前 7 d ～ 8 d 。免疫后 14 d 可達 12 log2 ；免疫后 6 個月仍為 8.7 log2 ～ 9.8 log2 ；免疫后 10 個月～ 12 個月仍維持在 6.5 log2 ～ 8.0 log2 ，表明該苗免疫期可達 1 年。免疫攻毒試驗進一步證實了上述結(jié)果。而免疫后 14 d ，進口油苗 HI 抗體價為 6.5 log2 ～ 8.0 log2 ；國產(chǎn)油苗為 8 log2 ～ 10 log2 ；免疫后 6 個月進口油苗為 5.7 log2 ～ 6.2 log2 ；國產(chǎn)油苗為 6.5 log2 ～ 7.0 log2 ；免疫后 10 個月～ 12 個月，進口油苗為 3.2 log2 ～ 4.5 log2 ；國產(chǎn)油苗為 5.0 log2 ～ 5.5 log2 。上述比較試驗結(jié)果表明， EDS-76 蜂膠苗的效果顯著優(yōu)于進口和國產(chǎn)油苗，區(qū)域推廣試驗表明，并替代進口，完全可以替代傳統(tǒng)的油苗，同時具有保存與使用更加方便的優(yōu)點，具有廣闊的推廣應(yīng)用前景 ［ 10 ］ 。 5 細胞因子 5.1 IL-2 IL-2 是一種糖蛋白，由活性輔助 T 細胞分泌，能提高細胞毒性防御，誘導(dǎo)干擾素產(chǎn)生，激活 B 淋巴細胞。 IL-2 在特異性免疫應(yīng)答中起主要作用，誘導(dǎo)細胞因子產(chǎn)生，克隆增殖活化的 T 淋巴細胞伴隨抗原刺激后產(chǎn)生免疫記憶，同時誘導(dǎo)相應(yīng) B 淋巴細胞的克隆增殖和產(chǎn)生抗體的漿細胞和記憶細胞分化 [16] 。 李宏梅等 [17] 將重組雞 IL-2 與傳染性法氏囊病滅活苗聯(lián)合應(yīng)用，每只雞肌肉注射重組 IL-2 0.4 mL ，同時肌肉注射 IBD 滅活苗 0.5 mL ，加入重組雞白細胞介素 2(IL-2) 后免疫效果進一步增強，抗感染效果達 100% ，其病變發(fā)生減少率達到 20% 。 孫圣蘭等 ［ 18 ］ 研究表明，雞的 IL-2 能增強雞傳染性法氏囊病毒 (Infectious bursa disease virus,IBDV) 多聚蛋白 DNA 疫苗的免疫原性。這主要表現(xiàn)在：①雞 IL-2 提高了 IBDV DNA 疫苗誘導(dǎo)的 T 淋巴細胞增殖反應(yīng)的強度；②雞 IL-2 增強了 IBDV DNA 疫苗誘導(dǎo)的 B 淋巴細胞增殖反應(yīng)的強度；③雞 IL-2 增強了 IBDV DNA 疫苗對強毒的免疫保護，緩減了 IBDV 的癥狀，其根本原因是雞 IL-2 增強了體液免疫和細胞免疫功能，當然也并不排除雞 IL-2 對 IBDV 的感染具有免疫治療作用的可能性。 雞的 IL-2 研究不但在研究雞免疫系統(tǒng)的發(fā)生及免疫調(diào)節(jié)機理中具有重要作用，而且在人類和哺乳動物的比較免疫學(xué)、生物發(fā)育和進化的研究中具有重要意義。因此，國內(nèi)外學(xué)者對雞的 IL-2 進行了不懈的研究，在一些方面已取得了突破性的進展。姜永厚等 [19] 利用國內(nèi)陳洪巖等 [20] 首次克隆得到的 IL-2 與新城疫弱毒 D26 株的 F 基因，經(jīng)載體構(gòu)建，將兩者以非融合蛋白形式共同克隆于真核表達質(zhì)粒 pcDNA 上，成功構(gòu)建了表達雞 IL-2 與新城疫 F 蛋白的重組質(zhì)粒 (pcDNA-F-IL-2) 。用此重組質(zhì)粒免疫雞，其表達 IL-2 可提高新城疫 DNA 疫苗的效力等 [21] 。 5.2 IL-18 IL-18 又稱為 IFN- γ誘導(dǎo)因子 (IFN- γ -inducing factor,IGIF) ，是新近發(fā)現(xiàn)的一種新型細胞因子，具有復(fù)雜的生物學(xué)功能，是細胞因子網(wǎng)絡(luò)中的重要成員。其生物學(xué)活性與 IL-2 相似，具有誘導(dǎo) T 細胞和 NK 細胞產(chǎn)生 IFN- γ，促進 T 細胞增殖，增強 Th1 細胞及 NK 細胞、 CTL 細胞的細胞毒活性等多種生物學(xué)功能。張春杰等 [22] 研究表明其作為免疫增強劑不但具有明顯的增強 IBD 滅活疫苗誘導(dǎo)細胞免疫的作用，而且，對于中和抗體水平的提高， B 淋巴細胞增殖反應(yīng)的加強也具有一定的作用，從而使疫苗的保護率從 86.7% 上升到 93.3% 。 6 結(jié)語 大量試驗結(jié)果證明，免疫增強劑與疫苗的聯(lián)合應(yīng)用是增強疫苗保護效率的一個有效途徑，尤其是中藥免疫增強劑、一些細胞因子在免疫增強中越來越發(fā)揮重要作用。隨著分子免疫學(xué)等免疫學(xué)基礎(chǔ)理論的飛速發(fā)展，特別是 T 細胞對抗原識別的分子基礎(chǔ)和控制 T 細胞活化和功能專職應(yīng)答的研究進展，使免疫增強劑的作用不再局限于增強免疫應(yīng)答，而更著重于其誘導(dǎo)機體選擇性地產(chǎn)生有效防御相應(yīng)病原體感染的特異性的免疫應(yīng)答，減少抗原物質(zhì)的副作用。因此，尋找特性確定、高效、穩(wěn)定、無毒的理想免疫增強劑是當前免疫學(xué)研究的重點之一，隨著免疫增強劑的研究領(lǐng)域不斷拓寬，新成員、新劑型不斷發(fā)現(xiàn)，機理探討不斷深入，臨床應(yīng)用范圍越來越廣，相信隨著研究的不斷深入，免疫增強劑在動物的疫病防治中會起到越來越重要的作用。 文章引自《動物醫(yī)學(xué)進展》