豬場(chǎng)疫病監(jiān)測(cè)與實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)的分析利用 農(nóng)業(yè)部種豬質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（廣州）樊福好
隨著現(xiàn)代養(yǎng)豬模式向集約化程度的發(fā)展，我們雖然可以通過(guò)加強(qiáng)生產(chǎn)操作管理，通過(guò)藥物、疫苗、通過(guò)更新品種、通過(guò)良好的環(huán)境來(lái)取得滿意的生產(chǎn)成績(jī)。但無(wú)論如何，豬群健康問(wèn)題造成的損失卻仍然在與日俱增，已經(jīng)成為制約養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要因素，養(yǎng)豬業(yè)者已經(jīng)不能僅僅滿足于對(duì)個(gè)體豬只的檢測(cè)，而對(duì)豬群健康性能監(jiān)測(cè)則提出越來(lái)越高的要求，期望通過(guò)大量的檢測(cè)數(shù)據(jù)來(lái)預(yù)警豬群健康事件發(fā)生的幾率，達(dá)到知己知彼、防患于未然的目的?！安恢我巡《挝床 钡膫鹘y(tǒng)中醫(yī)理論已經(jīng)得到了現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)者的高度認(rèn)同。
本文將重點(diǎn)闡述現(xiàn)代豬群健康性能監(jiān)測(cè)的方法和數(shù)據(jù)分析技術(shù)。
1、豬場(chǎng)疫病監(jiān)測(cè)的原理與方法
在進(jìn)行任何一項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目之前，我們必須了解該項(xiàng)目的原理，不能僅僅滿足于知其然；只有知其所以然，我們才能更好地分析該項(xiàng)目的得失成敗，分析該項(xiàng)目接近真實(shí)性的程度（作者據(jù)此提出“2Know”原理，即“to know how ，to know why”）。
1.1對(duì)豬群健康性能監(jiān)測(cè)的主要目的包括：
1.1.1診斷性監(jiān)測(cè)（diagnosis）——確定引起某種臨床癥狀的個(gè)體或群體性疾病（如流感病毒H3核酸監(jiān)測(cè)，豬鏈球菌二型的細(xì)菌分離培養(yǎng)和鑒定）。
1.1.2估測(cè)陽(yáng)性個(gè)體數(shù)占群體的百分比（prevalence）。如通過(guò)監(jiān)測(cè)豬瘟抗體和流感抗體的分布情況，確定疫苗的接種時(shí)機(jī)；通過(guò)監(jiān)測(cè)某種疾?。ㄈ鐐魅拘晕s性鼻炎）的陽(yáng)性感染率，確定該疾病的清除（凈化）的方式與方法。
1.1.3篩查（screening）——挑選出陰性群體的陽(yáng)性個(gè)體。如通過(guò)對(duì)豬偽狂犬gI抗體（通常所說(shuō)的野毒抗體）的檢測(cè)，確定偽狂犬病病毒感染豬群或豬只，從而采取凈化措施。
1.2確定樣本量監(jiān)測(cè)的大小。樣本量的確定涉及到費(fèi)用問(wèn)題和科學(xué)定性/定量問(wèn)題，所以是一件非常嚴(yán)肅的事情。
1.2.1監(jiān)測(cè)樣本量大小取決于本次監(jiān)測(cè)的目的，如估測(cè)感染率，或篩查（Screening）陽(yáng)性個(gè)體，或重復(fù)監(jiān)測(cè)。通用的數(shù)學(xué)公式為n=[1-(1-a)1/D]x[N-(D-1)/2]（其中，n—樣本量大小，a—置信區(qū)間，D—估測(cè)陽(yáng)性動(dòng)物數(shù)/發(fā)病動(dòng)物數(shù)，N—動(dòng)物總數(shù)）。如a—0.90，D—10，N—4000，則n=22。
1.2.2監(jiān)測(cè)樣本量大小還可以采用其它數(shù)學(xué)方法進(jìn)行估測(cè)。影響抽樣量的因素主要包括實(shí)驗(yàn)室所采用的監(jiān)測(cè)方法，群體陽(yáng)性率或發(fā)病率。抽樣量的大小也取決于：實(shí)驗(yàn)室所采用監(jiān)測(cè)方法的估測(cè)標(biāo)準(zhǔn)差、誤差、置信度、樣本總量。如：PRRS監(jiān)測(cè)中，如S/P估測(cè)標(biāo)準(zhǔn)差=1.19，誤差=0.05，置信度=95%，那么：100頭豬，則抽樣58頭；5,000頭豬，則抽樣132頭；10,000頭豬，則抽樣134頭；100,000頭，則抽樣136頭。由此可見(jiàn)，隨著樣本總量的擴(kuò)大，抽樣量增加越來(lái)越小。所以，不能使用百分比來(lái)確定樣本抽樣量。
1.3豬場(chǎng)疫病的檢測(cè)通常采用臨床診斷，流行病學(xué)診斷和實(shí)驗(yàn)室診斷等方法。所有這些方法并不是萬(wàn)能的，必須將其綜合分析判斷。
1.3.1臨床診斷通常按照以往的經(jīng)驗(yàn)來(lái)做出大致的推論。許多豬病都具備特殊的臨床癥狀，如流感（短期內(nèi)急性發(fā)作，出現(xiàn)發(fā)熱和呼吸道癥狀，懷孕母豬出現(xiàn)流產(chǎn)）、豬瘟（出血性敗血癥）、藍(lán)耳?。ㄍ砥诹鳟a(chǎn)）、圓環(huán)病毒?。?/font>PMWS、PDNS）、細(xì)小病毒（初產(chǎn)母豬出現(xiàn)大小不一致的木乃伊胎兒），口蹄疫（出現(xiàn)特征性口唇部和蹄部水皰）。
在臨床診斷中，尸體解剖也可以提供線索，如增生性腸炎、沙門(mén)氏菌感染、支原體感染、胸膜肺炎等都具有特殊的肉眼病理變化。
1.3.2流行病學(xué)診斷主要通過(guò)疾病流行、發(fā)展的基本規(guī)律來(lái)分析疾病發(fā)生的原因和大致去向。如口蹄疫和流感等急性、烈性傳染病往往伴隨著水域和交通干線快速傳播；在玉米收購(gòu)季節(jié)出現(xiàn)陰雨天氣，則第二年發(fā)生霉菌毒素中毒的病例會(huì)明顯增多。
1.3.3實(shí)驗(yàn)室診斷式是指通過(guò)各種物理、化學(xué)和生物學(xué)的方法來(lái)確定疾病發(fā)生的原因，并提出預(yù)防、控制疾病的方法。
2、豬群健康性能實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)的原理和方法
2.1豬健康性能監(jiān)測(cè)方法（以感染性因子為例）
選擇監(jiān)測(cè)方法是進(jìn)行檢測(cè)的第一步，如果為了了解以前是否感染，通常選擇監(jiān)測(cè)抗體；如果為了了解當(dāng)前是否存在感染，通常選擇監(jiān)測(cè)抗原。如：監(jiān)測(cè)后備母豬是否感染PRRS（未接種疫苗），可以用ELISA方法監(jiān)測(cè)抗體（感染過(guò)）；監(jiān)測(cè)種公豬是否感染PRRS，可以用PCR方法監(jiān)測(cè)病毒核酸（感染著）。
目前健康性能監(jiān)測(cè)的通用方法主要包括兩個(gè)方面：
2.1.1抗原監(jiān)測(cè)：通常采用病原分離（病毒分離、細(xì)菌培養(yǎng)、雞胚接種、組織培養(yǎng)），動(dòng)物接種，IFA，IPMA，IHC，PCR等方法。
考慮到準(zhǔn)確性和及時(shí)性等原因，基因檢測(cè)方法在發(fā)達(dá)國(guó)家已經(jīng)成為感染性因子確診的標(biāo)準(zhǔn)方法；在我國(guó)，高致病性禽流感和口蹄疫均采用基因檢測(cè)方法進(jìn)行確診。90年代中期以來(lái)，基因診斷又廣泛應(yīng)用了聚合酶鏈反應(yīng)體外擴(kuò)增基因的方法。這種方法只需合成一對(duì)與待查基因有關(guān)的引物，在耐熱DNA聚合酶的作用下，通過(guò)升溫（使待查DNA變性）--降溫（使引物與待查DNA結(jié)合）--保溫（使引物延伸）的過(guò)程，反復(fù)20~30次循環(huán)，待查基因的拷貝數(shù)可擴(kuò)增幾十萬(wàn)甚至幾百萬(wàn)倍。由于該方法簡(jiǎn)單、快速，如果制成試劑盒，則非常適合在基層單位推廣應(yīng)用。
2.1.2抗體監(jiān)測(cè)：抗體檢測(cè)主要考察機(jī)體對(duì)病原的即時(shí)反應(yīng)能力，目前采用SN，ELISA等方法。
3、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法的評(píng)價(jià)
實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法的評(píng)價(jià)主要通過(guò)以下兩個(gè)指標(biāo)：
3.1檢測(cè)方法的敏感性（sensitivity）：感染個(gè)體被監(jiān)測(cè)出陽(yáng)性結(jié)果的比率。如5頭偽狂犬病陽(yáng)性豬，實(shí)驗(yàn)室只檢測(cè)到4頭陽(yáng)性，則該檢測(cè)方法的敏感性為80%。
3.2檢測(cè)方法的特異性（specificity）：未感染個(gè)體被監(jiān)測(cè)出陰性結(jié)果的比率。如5頭偽狂犬病陰性豬，實(shí)驗(yàn)室卻檢測(cè)到1頭陽(yáng)性，則該檢測(cè)方法的敏感性為80%。
所以，可以通過(guò)敏感性和特異性來(lái)綜合評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室某種檢測(cè)方法的可靠程度。
| 疾病狀態(tài)（+）
| 疾病狀態(tài)（-）
| 檢測(cè)結(jié)果（+）
| | | 檢測(cè)結(jié)果（-）
| | |
對(duì)于個(gè)體來(lái)說(shuō)，假陽(yáng)性的結(jié)果危害較大，往往會(huì)造成個(gè)體的損失。而對(duì)于群體來(lái)說(shuō)，假陰性的結(jié)果危害較大，往往會(huì)造成群體的損失。如某頭偽狂犬病陽(yáng)性的公豬卻被檢測(cè)出陰性，則可能會(huì)造成該豬群的持續(xù)感染。所以，假陰性的危害要比假陽(yáng)性大得多。
4、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù)的分析利用
4.1數(shù)據(jù)的獲得：當(dāng)樣品送至實(shí)驗(yàn)室后，通過(guò)各種實(shí)驗(yàn)室方法獲取診斷數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)包括抗原、抗體數(shù)據(jù)，分子生物學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)（如基因序列）和檢測(cè)臨床和解剖病理圖片資料。實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員通過(guò)對(duì)這些資料進(jìn)行分析，提出診斷結(jié)論。
下文將以抗原抗體數(shù)據(jù)資料為例來(lái)探討實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù)的分析利用方法?？梢圆捎藐?yáng)性率、陰性率、可疑率、合格率、平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、群體差異度、健康指數(shù)等指標(biāo)來(lái)衡量檢測(cè)結(jié)果。
4.2陽(yáng)性率 如豬瘟抗體的陽(yáng)性率。
4.3陰性率 如藍(lán)耳病抗體的陰性率。
4.4可疑率 指介于陽(yáng)性和陰性之間結(jié)果的百分率。原則上，所有可疑結(jié)果從理論上都應(yīng)該進(jìn)行重新檢測(cè)（實(shí)驗(yàn)室內(nèi)對(duì)同樣的樣本檢測(cè)或重新采集樣本檢測(cè)）。
4.5群體差異度 是衡量一個(gè)豬群檢測(cè)值均勻度的一個(gè)重要指標(biāo)，且不受檢測(cè)方法的影響。如間接血凝檢測(cè)的結(jié)果為：1:32、1:32、1:32、1:64、1:16，ELISA檢測(cè)的結(jié)果為：78%、67%、55%、94%、15%，兩種檢測(cè)方法用差異度衡量，差異度均為0.4；而用標(biāo)準(zhǔn)差衡量，則分別為：29.8、0.012，不具備任何可比性。
群體差異度還可以比較不同的檢測(cè)指標(biāo)：如豬瘟抗體的差異度為0.27，藍(lán)耳病抗體的差異度為0.82，則說(shuō)明藍(lán)耳病的免疫水平不容樂(lè)觀。
4.6健康指數(shù) 是衡量某個(gè)體在相對(duì)正常群體背景中的正常狀態(tài)指標(biāo)（計(jì)算方法，略）。
在表格中，14號(hào)（0.02）、5號(hào)（2.97）、16號(hào)（0.47）、1號(hào)（0.48）的健康指數(shù)極低，是應(yīng)該引起高度關(guān)注的豬只，有潛在的感染可能性或已經(jīng)被感染。
從圖中可以看出，檢測(cè)值處于最高和最低位置時(shí)，其健康指數(shù)均較低，所以，不能認(rèn)為抗體水平越高越好。
總之，進(jìn)行豬群健康性能監(jiān)測(cè)時(shí)，必須考慮下列因素：沒(méi)有計(jì)劃，不作檢測(cè)；抗原會(huì)隨時(shí)間而變化；抗體會(huì)隨時(shí)間而變化；沒(méi)有任何一項(xiàng)檢測(cè)方法是萬(wàn)能的；不是所有的動(dòng)物在同一時(shí)間內(nèi)感染；多動(dòng)物感染時(shí)，檢測(cè)容易，發(fā)病初期抗體監(jiān)測(cè)難度大（如流感）；必須采用正確的監(jiān)測(cè)手段；樣本量的大小取決于：置信度，感染動(dòng)物數(shù)，群體大小；樣本量大，可信度高；陽(yáng)性監(jiān)測(cè)失敗不等于豬群是陰性。
另外，我們還必須強(qiáng)調(diào)群體概念，淡化個(gè)體概念；從群體中考察個(gè)體的狀態(tài)；強(qiáng)調(diào)動(dòng)態(tài)概念，淡化靜態(tài)概念！ | 
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