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自家組織苗的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)和制苗方法的改進(jìn)

冷和平，溫育銘，羅瑞國(guó)

    藍(lán)耳病和圓環(huán)病毒感染, 是當(dāng)前養(yǎng)豬場(chǎng)普遍存在,并且最難以對(duì)付的兩種疾病。由于當(dāng)前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上還沒有針對(duì)這2種疾病的免疫效果確切的疫苗供應(yīng), 因此自家組織苗作為預(yù)防這2種疾病的一種無(wú)奈選擇, 正在全國(guó)各地大小豬場(chǎng)被廣泛使用。2002年前后自家組織苗最初開始在豬場(chǎng)推廣使用時(shí),的確取得了顯著的效果, 對(duì)豬場(chǎng)有效地預(yù)防藍(lán)耳病和圓環(huán)病毒感染, 發(fā)揮了巨大的作用,使很多瀕臨倒閉的豬場(chǎng)因此而起死回生。但問題是很多人過分地夸大了自家組織苗的作用, 有的豬場(chǎng)場(chǎng)長(zhǎng)和技術(shù)人員, 對(duì)自家組織苗甚至到了迷信的程度。曾經(jīng)有一個(gè)豬場(chǎng)場(chǎng)長(zhǎng)介紹他的養(yǎng)豬經(jīng)驗(yàn), 說他平時(shí)其他工作基本都不用管, 只要監(jiān)督制作好自家組織苗就可以了, 以致他們豬場(chǎng)的病豬根本看不到肺臟病毒性病變, 仍然堅(jiān)持采集病豬的肺臟制作自家組織苗。
    目前，很多養(yǎng)豬技術(shù)人員對(duì)自家組織苗的認(rèn)識(shí), 最起碼存在下列兩大誤區(qū)。
    第一，自家組織苗可以長(zhǎng)期使用。自家組織苗的效果, 取決于病變組織中病毒的含量。2002年當(dāng)自家組織苗剛開始推廣使用時(shí),由于之前豬場(chǎng)一直沒有使用過有效的疫苗,發(fā)病豬癥狀都比較典型, 病變組織中病毒含量較多,而且每批采集的病料中病毒含量的變異度也不大,所以自家組織苗的效果顯著而且穩(wěn)定。但是,隨著疾病逐漸得到控制,典型的病料越來(lái)越難以獲得,通過采集自然發(fā)病豬的病變組織制作自家組織苗,效果將越來(lái)越差,這是使用自家組織苗的必然規(guī)律。事實(shí)已經(jīng)證明很多豬場(chǎng)在使用自家組織苗一段時(shí)間后,效果確實(shí)越來(lái)越差,不但藍(lán)耳病或圓環(huán)病毒依然存在,而且其他疾病也越來(lái)越難以控制。所以自家組織苗只能是臨時(shí)應(yīng)急的一種措施,不能長(zhǎng)期使用。長(zhǎng)期使用自家組織苗,將給豬場(chǎng)帶來(lái)一系列風(fēng)險(xiǎn),具體我們將在本文風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)部分討論。
    第二，自家組織苗包醫(yī)百病。很多技術(shù)人員都認(rèn)為, 只要是豬場(chǎng)存在的疾病, 自家組織苗中都會(huì)含有相應(yīng)的抗原,所以使用本場(chǎng)發(fā)病豬病變組織制作的自家組織苗,可以預(yù)防豬場(chǎng)存在的所有疾病。這種認(rèn)識(shí)是非常錯(cuò)誤的。作為一種疫苗,要使其對(duì)特定的傳染性疾病產(chǎn)生免疫作用,必須具備2個(gè)條件:①疫苗中必須含有相應(yīng)的具有免疫源性的抗原;②抗原的劑量必須符合一定的要求?？乖刻?無(wú)法有效產(chǎn)生抗體;此外,抗原量太多或太少,還有可能誘導(dǎo)免疫耐受。自家組織苗通常都是通過采集病豬的病料來(lái)制作的, 然而各種病原對(duì)組織的嗜好是不一樣的,藍(lán)耳病病毒在肺部含量較多,而豬瘟病毒因其嗜內(nèi)皮細(xì)胞的特性,使其在腎臟和免疫器官含量較多。如果把病豬所有內(nèi)臟一起搗碎制苗,各種抗原都將被稀釋,很難達(dá)到有效免疫的抗原量。所以, 我們制作自家組織苗,都是有針對(duì)性的,疫苗用于預(yù)防什么疾病,就應(yīng)該選擇什么病原含量最多的器官或組織制苗。
    因此,自家組織苗不是包醫(yī)百病的靈丹妙藥,不但不能長(zhǎng)期使用,也不能濫用。 在應(yīng)用自家組織苗以前,一定要認(rèn)真進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià),在權(quán)衡利弊的基礎(chǔ)上,再進(jìn)行科學(xué)決策。
1 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)
    應(yīng)用自家組織苗的風(fēng)險(xiǎn), 主要來(lái)自下列2個(gè)方面。
1.1 免疫效果不確切
    由于我們無(wú)法準(zhǔn)確地定量分析病料組織中抗原的含量,同時(shí),自然發(fā)病的豬,每頭的病變組織中病原的含量都存在很大的變異。所以,用自然發(fā)病豬病變組織制作的自家組織苗,其免疫效果存在很大的不確定性。我們一方面無(wú)法判斷這種疫苗能否產(chǎn)生有效保護(hù),另一方面,可能這批疫苗能產(chǎn)生有效保護(hù),但下批卻無(wú)法產(chǎn)生有效保護(hù)。
1.2 疫苗滅活不徹底
    自然發(fā)病的豬,體質(zhì)和抵抗力下降后,很容易繼發(fā)或并發(fā)其他疾病,所以,自然發(fā)病豬的病變組織中,大都含有多種病原。這些病原對(duì)滅活條件的要求,存在很大的差異。 以甲醛溶液為例,需氧細(xì)菌滅活需要的濃度為0.1%～0.2%,厭氧細(xì)菌滅活需要的濃度為0.4%～0.5%,病毒滅活需要的濃度為0.05%～0.4%,而且,豬瘟病毒用甲醛溶液滅活效果不理想。所以制作不同的疫苗,對(duì)滅活劑的種類和滅活劑的濃度要求是不一樣的。種類選擇不合理,無(wú)法達(dá)到滅活的效果。濃度太低,滅活不徹底;濃度太高,破壞抗原的免疫源性,使免疫效果變差?，F(xiàn)在很多豬場(chǎng)制作自家組織苗,都是使用0.3%～0.4%的甲醛溶液(有的豬場(chǎng)甚至使用0.3%～0.4%福爾馬林,甲醛含量?jī)H相當(dāng)于0.1%～0.15%), 這種滅活方法, 無(wú)法保證疫苗中所有的病原都被滅活。尤其是使用病料組織制苗這種方法,病料組織無(wú)法徹底過濾,疫苗中含有大量組織破碎后形成的有機(jī)物質(zhì), 滅活不徹底的問題就更普遍。疫苗滅活不徹底, 將給豬場(chǎng)帶來(lái)如下兩方面的風(fēng)險(xiǎn):
1.2.1 造成疾病在豬場(chǎng)中傳播
    疫苗中未滅活的細(xì)菌或病毒達(dá)到一定數(shù)量,就可能造成這些疾病在豬場(chǎng)流行,而且這種流行屬于人工感染后的流行,病原的致病力比自然感染時(shí)更強(qiáng),也更難以控制。在目前應(yīng)用自家組織苗的豬場(chǎng)中,已知最起碼有一種疾病是由于使用滅活不徹底的自家組織苗而傳播的。副豬嗜血桿菌作為一種兼性厭氧菌, 對(duì)使用福爾馬林滅活的濃度要求很高, 雖然目前仍無(wú)法獲得在使用病料組織制作自家苗(疫苗中含有較多組織物質(zhì), 滅活濃度肯定要比細(xì)菌分離培養(yǎng)制苗時(shí)濃度要高)情況下,使副豬嗜血桿菌滅活所需甲醛含濃度的準(zhǔn)確數(shù)據(jù),但我場(chǎng)曾經(jīng)做過自家組織苗的攻毒試驗(yàn), 使用經(jīng)過0.4%甲醛溶液滅活的自家組織苗和未經(jīng)甲醛滅活, 但經(jīng)過殺菌處理(每1000 mL加入阿莫西林500 mg+氟苯尼考250 mg)過的自家組織苗,分別對(duì)健康豬作大劑量攻毒試驗(yàn)(每頭豬分左右頸部肌肉注射20 mL),都曾經(jīng)成功地誘導(dǎo)出典型的豬副嗜血桿菌癥狀。
1.2.2 誘導(dǎo)豬群產(chǎn)生免疫耐受
    低劑量的病毒感染,是免疫耐受的重要誘因。前面我們已經(jīng)分析過,豬瘟病毒使用甲醛溶液滅活,無(wú)法實(shí)現(xiàn)徹底滅活的目的。如果用于制作自家組織苗的病料中含有少量豬瘟病毒,這些病毒含量低至不足以引起豬瘟流行,但卻可能誘導(dǎo)豬群產(chǎn)生豬瘟免疫耐受,使豬瘟在豬場(chǎng)呈非典型和散發(fā)流行。目前,很多豬場(chǎng)豬瘟免疫效果都比較差,是疫苗質(zhì)量問題?免疫操作問題?還是由于使用滅活不徹底的自家組織苗所帶來(lái)的豬瘟免疫耐受問題? 值得我們進(jìn)一步探討。
2 科學(xué)決策
    正因?yàn)樽约医M織苗存在上述系列的風(fēng)險(xiǎn),所以,對(duì)于豬場(chǎng)是否應(yīng)該使用自家組織苗, 應(yīng)持非常慎重的態(tài)度, 并堅(jiān)持以下3條原則。
2.1 細(xì)菌性疾病不要使用自家組織苗
    通過細(xì)菌分離培養(yǎng)的辦法制作自家苗,不但成本低,而且可以克服自家組織苗的所有缺點(diǎn),所以,對(duì)于細(xì)菌性疾病,完全沒有必要采用采集病豬病變組織制作自家苗這種方法。
2.2 病毒性疾病一般不用自家苗
    對(duì)于病毒性疾病,如果市場(chǎng)有正規(guī)的,且免疫效果確切的疫苗供應(yīng),就不應(yīng)該選擇使用自家組織苗。豬瘟、豬偽狂犬病等烈性病毒性疾病,當(dāng)前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上都有免疫效果確切的疫苗供應(yīng),只要豬場(chǎng)從正規(guī)渠道選購(gòu), 并規(guī)范免疫操作,一般都不會(huì)出現(xiàn)這些方面的問題。目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上尚沒有正規(guī)的疫苗供應(yīng),或者雖然已有正規(guī)的疫苗供應(yīng),但免疫效果尚存在爭(zhēng)議的病毒性疾病,僅限于藍(lán)耳病和圓環(huán)病毒感染, 而且這2種疾病又是豬場(chǎng)最難以對(duì)付的疾病,所以自家組織苗的使用,大都僅限于針對(duì)這2種疾病的預(yù)防。
2.3 只有確證藍(lán)耳病或圓環(huán)病毒在豬場(chǎng)致病的情況下,才可考慮使用自家組織苗
    藍(lán)耳病病毒和圓環(huán)病毒雖然在豬場(chǎng)廣泛存在,但并不是在所有豬場(chǎng)都致病,很多豬場(chǎng)其實(shí)僅僅是豬群健康帶毒。那些自稱藍(lán)耳病或圓環(huán)病毒感染正在流行的豬場(chǎng),可能并不真正是藍(lán)耳病或圓環(huán)病毒感染?？梢钥隙ǖ氖?曾經(jīng)很多人都認(rèn)為是藍(lán)耳病的一些癥狀(如毛毛豬, 耳朵發(fā)紺等),其實(shí)是由豬副嗜血桿菌所引起的。
判斷豬場(chǎng)是否需要制作自家組織苗的依據(jù), 不是豬場(chǎng)是否存在藍(lán)耳病病毒或圓環(huán)病毒, 而是這些病原是否在豬場(chǎng)致病。確證藍(lán)耳病病毒或圓環(huán)病毒在豬場(chǎng)是否致病, 最直接和最有效的辦法, 就是獸醫(yī)學(xué)上常用的人工攻毒方法。按本文第3節(jié)所述的攻毒步驟, 對(duì)健康豬進(jìn)行攻毒試驗(yàn), 并認(rèn)真觀察攻毒豬的癥狀, 如果經(jīng)過7～10 d后, 攻毒豬出現(xiàn)藍(lán)耳病或圓環(huán)病毒感染癥狀, 說明這些病原在豬場(chǎng)確實(shí)致病, 需要制作自家組織苗。否則, 說明通過嚴(yán)格的飼養(yǎng)管理, 豬場(chǎng)完全可以控制這兩種疾病, 不需要制作自家苗。
3 制苗方法潛在的改良途徑
    理論上,現(xiàn)行自家組織苗存在的這些缺點(diǎn),是可以利用獸醫(yī)學(xué)的方法進(jìn)行改進(jìn)的。改進(jìn)的方法,就是人工攻毒提高病原含量, 具體步驟如下。
3.1 攻毒豬的選取
    選擇健康,且經(jīng)過2次以上豬瘟、口蹄疫、偽狂犬、流感等重要烈性傳染病免疫的小豬或中豬2～3頭,嚴(yán)格隔離飼養(yǎng),欄舍每天消毒,飼料中添加藥物預(yù)防細(xì)菌性疾病。
3.2 攻毒病料的選擇和制備
    選擇藍(lán)耳病或圓環(huán)病毒感染癥狀典型的病豬一頭,摘取病豬的肺,脾和淋巴結(jié),除去結(jié)締組織和病變不典型部分, 按照制作自家組織苗的步驟, 并按每300 g病料制苗1000 mL的比例, 對(duì)病料進(jìn)行搗碎,過濾和稀釋(有必要說明的是,很多豬場(chǎng)在制作自家組織苗時(shí),都忽視了一個(gè)細(xì)節(jié):搗碎機(jī)高速運(yùn)轉(zhuǎn),溫度上升很快,夏天溫度高時(shí),容器中的病料很容易超過40 ℃,使蛋白質(zhì)發(fā)生變性,破壞病原的免疫源性。故夏天制苗時(shí),病料加入搗碎機(jī)中的生理鹽水和用于水浴冷卻病料的冷水,都應(yīng)預(yù)先在冰箱中經(jīng)過冷凍),稀釋后的病料懸浮液不經(jīng)甲醛滅活, 而是每1000 mL加入氟苯尼考250 mg+阿奇霉素250 mg (應(yīng)該注意的是阿奇霉素禁止在獸醫(yī)臨床上應(yīng)用),充分?jǐn)嚢杈鶆?放入37℃恒溫箱中作用24 h,再放入冰箱中冷藏備用。
3.3 攻毒
    攻毒豬隔離飼養(yǎng)7 d后, 觀察無(wú)異常, 即可進(jìn)行攻毒。取3.2制備的攻毒病料, 每頭待攻毒豬分左右兩側(cè)頸肌注射攻毒病料各10 mL(即每頭豬20 mL)。
3.4 攻毒病料的提取
    已攻毒豬再經(jīng)隔離飼養(yǎng)7～10 d后, 開始出現(xiàn)癥狀, 此時(shí)即可解剖病豬提取病料。正常情況下, 從攻毒豬提取的病料, 比自然感染豬的病變更典型。特別是在從攻毒豬提取病料進(jìn)行再攻毒后,第2代和以后各代提取的病料,病變將更加典型,基本上都是理想的制作自家苗材料,而且每頭豬的病料基本都保持一致。
    通過人工攻毒方法產(chǎn)生的病料,由于攻毒劑量比自然感染時(shí)大,每頭豬的攻毒劑量又基本相當(dāng),故病豬發(fā)病典型,抗原量較多,而且每頭豬病料中抗原含量變異度小, 其免疫效價(jià)和穩(wěn)定性必然大大超過自然發(fā)病豬的病料。同時(shí),攻毒豬都經(jīng)過其他疾病的嚴(yán)格免疫,所提取的病料比自然發(fā)病豬更純凈,避免了污染其他病原而造成疾病擴(kuò)散和免疫耐受的風(fēng)險(xiǎn)。雖然要以健康豬作代價(jià),但一頭豬的病料可制作1000 mL以上的自家苗,保護(hù)300頭以上小豬, 經(jīng)濟(jì)上還是比較合算的。理論上,由于攻毒病料是從本場(chǎng)的病豬提取,并沒有外來(lái)的傳染源,只要對(duì)攻毒豬嚴(yán)格隔離飼養(yǎng)和消毒,一般不存在病原擴(kuò)散的問題。
    當(dāng)然,這種自家組織苗的制作方法,在生產(chǎn)實(shí)踐中是否會(huì)造成病原擴(kuò)散,仍有待有關(guān)專家進(jìn)一步論證和檢驗(yàn)。生產(chǎn)場(chǎng)要推廣應(yīng)用這種方法,必須嚴(yán)格執(zhí)行國(guó)家有關(guān)獸醫(yī)防疫的法律和法規(guī), 得到有關(guān)獸醫(yī)防疫和和食品安全部門的許可。

[ 本帖最后由 zhangxinlq 于 2008-6-26 16:01 編輯 ]

農(nóng)夫

想法不錯(cuò)，就是不知道效果如何？