Ⅳ型鴨肝炎病毒雞胚化弱毒疫苗的研制

peteryuanfeng

Ⅳ型鴨肝炎病毒雞胚化弱毒疫苗的研制
鄭獻(xiàn)進(jìn)1 ,2  , 張大丙1  , 曲豐發(fā)1 ,3  , 丁春宇1 ,4
(1. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 農(nóng)業(yè)部預(yù)防獸醫(yī)學(xué)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室 , 北京 海淀 100094 ;
2. 大成萬(wàn)達(dá)(天津) 有限公司 , 天津 西青 300380 ; 3. 中國(guó)質(zhì)量認(rèn)證中心 ,北京 豐臺(tái) 100070 ;
4. 西班牙海博萊北京辦事處 ,北京 海淀 100086)
摘要: 將一株 Ⅳ型鴨肝炎病毒(D HV) 用雞胚傳代 ,培育出 Ⅳ型鴨肝炎病毒 63 代雞胚化弱毒疫苗株 E63 。該苗對(duì) 1 日齡
雛鴨安全無(wú)致病性 ,免疫劑量為 2. 5 ×105. 12 個(gè) ELD50 / 只。用 E63 免疫 1 日齡雛鴨 ,7 日齡時(shí)即可產(chǎn)生高峰期中和抗體 ,并可
完全保護(hù)雛鴨抵抗同型強(qiáng)毒的攻擊 ,此后中和抗體效價(jià)有所下降 ,但可持續(xù)至 4 周齡。疫苗在 -  20 ℃保存 3～6 個(gè)月后仍能保
持良好的免疫原性。
關(guān)鍵詞: 鴨肝炎病毒;  Ⅳ型; 弱毒疫苗
中圖分類(lèi)號(hào):S859. 79 　　　　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 　　　　文章編號(hào):052926005 (2007) 1220006202
Development of a chicken2embryo2adapted attenuated vaccine
of  duck hepatitis type
Ⅳvirus
ZH EN G Xian2jin , ZHAN G Da2bing , QU  Feng2fa , DIN G Chun2yu
( Key Laboratory of  Preventive Veterinary Medicine of  Ministry of  Agriculture , College of
Veterinary Medicine , China Agricultural University , Beijing 100094 , China)
Abstract : A  63rd   chicken2embryo2adapted  duck  hepatitis  type   Ⅳvirus  vaccine  ( named  E63)  was ob2
tained t hrough serial passages of D HV in chick embryo s.   The  E63 was confirmed to  be  nonpat hogenic to
ducklings.   The immunizing do se was determined to  be at  2. 5 ×105. 12    ELD50 .  For t he immunized one2day2
old ducklings , serum neutralizing antibody titers  reach  t he peak and t he immunizatio n p rovided co mplete
p rotectio n against challenge wit h t he  homologous virulent  strain 7  days po stinoculation.   The  serum anti2
body titers could last for 4 weeks wit h a little bit  decrease.   The immunogenicity of  E63 was remained 3 -
6 mont hs when stored at   -  20 ℃.
Key  words : duck hepatitis type  Ⅳvirus ; vaccine
Corresponding author :  ZHAN G Da2bing
　　鴨病毒性肝炎是雛鴨的一種急性高度致死性疾
病 ,其發(fā)生和流行嚴(yán)重威脅著我國(guó)養(yǎng)鴨業(yè)的健康發(fā)
展。其病原是鴨肝炎病毒 ( duck  hepatitis  virus ,
D HV)  ,分為 3 個(gè)血清型 ,即 Ⅰ型、Ⅱ型和 Ⅲ型[ 1 ]   ,野
外還存在一類(lèi)毒株 ,與 Ⅰ型僅有部分血清學(xué)相關(guān)性 ,
Sandhu 等(1992) 稱(chēng)之為 Ⅰa 型[ 2 ]  。1984 年 ,郭玉璞
和潘文石確定我國(guó)存在 Ⅰ型[ 3 ]   ,20 世紀(jì) 80 -  90 年
代 ,我國(guó)學(xué)者成功研制出良好免疫原性的 Ⅰ型
D HV 雞胚化弱毒疫苗[ 4 -  6 ]   ,該苗的推廣使用一度有
效地控制我國(guó) Ⅰ型鴨肝炎的流行。然而 ,近幾年來(lái) ,
在我國(guó)許多地區(qū) ,針對(duì) Ⅰ型 D HV 所進(jìn)行的主動(dòng)免
疫或被動(dòng)免疫并未能有效地控制鴨病毒性肝炎的暴
發(fā)。有學(xué)者認(rèn)為我國(guó)出現(xiàn)了 Ⅲ型或某種新型[ 7 -  10 ]   ,
亦有學(xué)者分離到與 Ⅰ型存在明顯抗原差異的 D HV
毒株[ 11 -  12 ]  。筆者的數(shù)據(jù)顯示 , Ⅰ型仍是我國(guó)主要流
行的血清型 ,但在一些養(yǎng)鴨地區(qū)業(yè)已流行一種 Ⅰ型
的變異株 ,這類(lèi)變異株與 Ⅰ型之間僅存在單向交叉
收稿日期:2006206207
作者簡(jiǎn)介:鄭獻(xiàn)進(jìn)(19792)  ,男 ,碩士 ,從事動(dòng)物病毒學(xué)研究
通訊作者:張大丙 ,  E2mail :zdb @cau. edu. cn
中和作用 ,頗似 Sandhu 等(1992) 提出的 Ⅰa 型[ 2 ]   ,
但由于未能獲得 Ⅰa 型參考毒株 ,故暫將這類(lèi)變異
株稱(chēng)為 Ⅳ型[ 13 ]  。因此 ,進(jìn)一步研制 Ⅳ型 D HV 疫苗
對(duì)于我國(guó)鴨病毒性肝炎的控制是非常必要的。
1 　材料與方法
1. 1 　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和雞胚 　1 日齡雛鴨和 9 日齡雞胚
分別購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所和中
國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院畜牧場(chǎng)。
1. 2 　毒株 ?、裥?D HV 雞胚化弱毒疫苗株 C80 和
強(qiáng)毒株 C1 H 。Ⅳ型 D HV 毒株 E3 ,2001 年從河北
某鴨場(chǎng)分離 ,用雛鴨將 E3 返強(qiáng) 4 代后作為攻毒用
強(qiáng)毒 ,命名為 E3 H 。
1. 3 　Ⅳ型 D HV 雞胚化弱毒株的培育 　將 E3 接種
于 9 日齡雞胚尿囊腔 ,收獲 24h 后死亡雞胚尿囊液 ,
再接種于雞胚 ,連續(xù)傳代至 63 代 ,命名為 E63 。收
獲 24～48 h 死亡雞胚的胚胎、尿囊液和絨毛尿囊膜
制成勻漿 ,加慶大霉素抑菌 ,經(jīng)無(wú)菌檢驗(yàn)后作為疫
苗 , -  20 ℃保存。按常規(guī)方法測(cè)定其 ELD50  。
1. 4 　安全性檢測(cè) 　取 1 日齡雛鴨 30 只 ,分為 3 組 ,
每組 10 只。兩組分別經(jīng)頸部皮下和腿肌接種未稀
6 中國(guó)獸醫(yī)雜志 2007 年(第 43 卷) 第12 期 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 Chinese Journal of  Veterinary Medicine 　　
© 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.    http://www.cnki.net
釋的疫苗毒1 mL/ 只 ,第 3 組為不接種對(duì)照組。1 周
后 ,對(duì)所有鴨只進(jìn)行剖檢。
1. 5 　免疫劑量的測(cè)定 　用滅菌生理鹽水將 E63 分
別進(jìn)行 10 倍、20 倍和 100 倍稀釋。取 1 日齡雛鴨
40 只 ,分為 4 組 ,每組 10 只。3 個(gè)組分別免疫上述
3 個(gè)稀釋度的疫苗 ,每只鴨均經(jīng)頸部皮下接種 0. 5
mL ,每只鴨的免疫劑量分別為 5  ×105. 12  、2. 5  ×
105. 12 和 5 ×104. 12    ELD50   ,第 4 組為不免疫對(duì)照組。
于 7 日齡時(shí)經(jīng)腿部肌肉注射強(qiáng)毒 E3 H ,0. 5 mL/ 只 ,
觀察 1 周。
1. 6 　中和抗體效價(jià)的測(cè)定 　取 1 日齡雛鴨 35 只 ,
分為 2 組。第 1 組 20 只按確定的免疫劑量經(jīng)頸部
皮下接種疫苗 ,0. 5  mL/ 只;第 2 組 15 只為不免疫
對(duì)照組。在雛鴨 1 、2 、3 、4 周齡時(shí)分別采血分離血
清。用固定血清2稀釋病毒的方法進(jìn)行雞胚中和試
驗(yàn) ,并計(jì)算中和指數(shù)。
1. 7 　疫苗的保存期測(cè)定 　用確定的免疫劑量免疫
1 日齡雛鴨 , 設(shè)不免疫對(duì)照組 , 7 日齡攻毒。檢測(cè)
-  20 ℃保存 3 個(gè)月和 6 個(gè)月的 E63 。
1. 8 　疫苗交叉保護(hù)試驗(yàn) 　用滅菌生理鹽水將 Ⅰ型
疫苗 C80 和 Ⅳ型疫苗 E63 分別進(jìn)行 20 倍稀釋。取
1 日齡雛鴨 60 只 ,分為 6 組 ,每組 10 只。第 1 組和
第 2 組免疫 E63 株 ,第 3 組和第 4 組免疫 C80 株 ,
均為頸部皮下接種 0. 5  mL/ 只 ,第 5 組和第 6 組為
非免疫對(duì)照組 ,隔離飼養(yǎng)。于 7 日齡時(shí) ,第 1 、3 、5 組
接種 Ⅳ型強(qiáng)毒株 E3 H ,第 2 、4 、6 組接種 Ⅰ型強(qiáng)毒株
C1 H ,均為腿部肌肉注射 0. 5 mL/ 只。觀察 1 周。
1. 9 　抗血清交叉保護(hù)試驗(yàn) 　按文獻(xiàn)[ 13 ]制備兔抗
C80 和 E63 的血清。取 1 日齡雛鴨 60 只 ,分為 6
組 ,每組 10 只。第 1 、2 組經(jīng)頸部皮下注射兔抗 E63
株血清 ,第 3 、4 組以同樣的途徑注射兔抗 C80 株血
清 ,每只均接種 0. 5 mL ;第 5 、6 組為對(duì)照組 ,不注射
血清。24 h 后 ,第 1 、3 、5 組經(jīng)腿部肌肉注射 Ⅳ型強(qiáng)
毒 E3 H ,第 2 、4 、6 組經(jīng)腿部肌肉注射 Ⅰ型強(qiáng)毒株
C1 H ,0. 5 mL/ 只。飼養(yǎng) 1 周。
1. 10 　計(jì)算保護(hù)指數(shù)(p rotective index ,  PI)  　按公
式 PI = (對(duì)照組死亡率 -  免疫組死亡率) / 對(duì)照組死
亡率 ×100 。
2 　結(jié)果
2. 1 ?、粜?D HV 雞胚化弱毒株 E63 的培育 　最初
幾代 ,雞胚在接種后 60  h 左右死亡 ,傳至 63 代 ,所
有接種雞胚均在 24 ～ 48  h  死亡 , 其 ELD50   為
10 -  6. 12 / 0. 1mL 。死亡雞胚的胚體表現(xiàn)為出血、水
腫、矮小化 ,部分雞胚肝臟有較明顯的壞死灶 ,有些
死亡雞胚的肝臟變綠。
2. 2 　E63 的安全性 　1 日齡雛鴨免疫疫苗原液后
無(wú)發(fā)病和死亡 ,剖檢未見(jiàn)肉眼可見(jiàn)的大體病變。
2. 3 　E63 的免疫劑量 　免疫 5 ×105. 12 個(gè) ELD50 和
2. 5 ×105. 12 個(gè) ELD50 的 E63 后 ,雛鴨可獲得完全保
護(hù) ,而免疫5 ×104. 12 個(gè) ELD50 的 E63 后 ,疫苗所產(chǎn)生
的保護(hù)指數(shù)有所下降 ,見(jiàn)表 1 。為了獲得 100 %的攻
毒保護(hù) ,在隨后的試驗(yàn)中 ,均以 2. 5 ×105. 12 個(gè) ELD50
作為免疫劑量。
2. 4 　E63 的保存期 　-  20 ℃保存 3 個(gè)月 , E63 能完
全保護(hù)雛鴨抵抗同源強(qiáng)毒的攻擊;保存 6 個(gè)月 , E63
仍能給雛鴨提供有效的保護(hù) ,但所產(chǎn)生的保護(hù)率和
PI 略有下降 ,見(jiàn)表 2 。
表 1 　疫苗株 E63 的免疫劑量
組別   免疫劑量( ELD50 / 只)   死亡數(shù)/ 攻毒數(shù)(只)      PI( %)
免疫組1 5. 0 ×105. 12
0/ 10
100
免疫組2 2. 5 ×105. 12
0/ 10
100
免疫組3 5. 0 ×104. 12
2/ 10
75
對(duì)照組 -
8/ 10
-
表 2 　疫苗株 E63 的保存期
組別     死亡數(shù)/ 攻毒數(shù)(只)        保護(hù)率( %) PI( %)
3 月 0/ 10
100
100
6 月 1/ 10
90
87. 5
對(duì)照組 8/ 10
-
-
2. 5 　中和抗體的產(chǎn)生 　雛鴨 1 日齡時(shí)免疫 E63 ,1
周齡、2 周齡、3 周齡和 4 周齡時(shí)的中和指數(shù)分別為
101. 90  、101. 7  、101. 51  、101. 15  。
2. 6  　Ⅰ型和 Ⅳ型弱毒疫苗的交叉保護(hù) ?、裥?br /> D HV 雞胚化弱毒疫苗株 C80 和 Ⅳ型 D HV 雞胚化
弱毒疫苗株 E63 均能完全保護(hù)雛鴨抵抗同型強(qiáng)毒
的攻毒。但用異型強(qiáng)毒攻毒的結(jié)果表明 , Ⅰ型和 Ⅳ
型之間僅存在單向低度交叉保護(hù) ,見(jiàn)表 3 。
表 3 　Ⅰ型和 Ⅳ型 D HV雞胚化弱毒疫苗的交叉保護(hù)試驗(yàn)
疫苗株      血清型
攻毒毒株(血清型)
C1 H ( Ⅰ型)
E3 H ( Ⅳ型)
C80
Ⅰ型       0/ 10 (100)
4/ 10 (55. 6)
E63
Ⅳ型       5/ 10 (37. 5)
0/ 10 (100)
對(duì)照 8/ 10
9/ 10
　　結(jié)果指死亡數(shù)/ 攻毒數(shù)( PI %)
2. 7 ?、裥秃?Ⅳ型抗血清的交叉保護(hù) ?、裥秃?Ⅳ型
抗血清均可完全保護(hù)雛鴨抵抗同型強(qiáng)毒的攻擊 ,但
針對(duì)異型強(qiáng)毒的攻毒只能產(chǎn)生單向低度交叉保護(hù)作
用 ,見(jiàn)表 4 。
表 4 ?、裥秃?Ⅳ型抗血清的交叉保護(hù)試驗(yàn)
抗血清      血清型
攻毒毒株(血清型)
C1 H ( Ⅰ型)
E3 H ( Ⅳ型)
C80
Ⅰ型       0/ 10 (100)
4/ 10 (55. 6)
E63
Ⅳ型       6/ 10 (25)
0/ 10 (100)
對(duì)照組         -
8/ 10
9/ 10
　　結(jié)果指死亡數(shù)/ 攻毒數(shù)( PI %)
3 　討論
檢測(cè)結(jié)果表明 , Ⅳ型 D HV 毒株 E3 經(jīng)過(guò) 9 日齡
雞胚傳代 63 代后 ,所獲得的雞胚適應(yīng)毒株 E63 是
一株具有良好免疫原性的雞胚化弱毒疫苗株。該苗
對(duì)雛鴨安全無(wú)致病性 , 免疫劑量為 2. 5 ×105. 12  個(gè)
ELD50   ,保存期為 -  20 ℃,3～6 個(gè)月。雛鴨 1 日齡時(shí)
經(jīng)頸部皮下注射雞胚化弱毒疫苗 E63 ,1 周齡時(shí)即
可產(chǎn)生高峰期的中和抗體 ,隨后抗體水平有所下降 ,
至 4 周齡時(shí)仍可檢測(cè)到一定水平的中和抗體。由于
鴨肝炎自然暴發(fā)時(shí) ,多發(fā)生于 3 周齡內(nèi)雛鴨 ,特別是
1～2 周齡的雛鴨 ,結(jié)合攻毒保護(hù)試驗(yàn)和中和抗體的
監(jiān)測(cè)結(jié)果 ,可認(rèn)為給1日齡雛鴨免疫雞胚化弱毒疫
7
　　Chinese Journal of  Veterinary Medicine 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 中國(guó)獸醫(yī)雜志 2007 年(第 43 卷) 第 12 期
© 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.    http://www.cnki.net
內(nèi)源性綿羊肺腺瘤病毒 NM 株 pol
基因的克隆與序列分析
王 　宇 , 劉淑英 , 韓 　敏 , 李建云
(內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與醫(yī)學(xué)學(xué)院 , 內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018)
摘要: 參照 GenBank 中內(nèi)源性綿羊肺腺瘤病毒 enJ S56A1 株 pol 基因序列設(shè)計(jì)了 2 對(duì)引物。應(yīng)用 PCR 技術(shù)特異性地?cái)U(kuò)
增出病毒的 pol 基因片段 ,將其克隆到 PMD192T 載體后測(cè)序。應(yīng)用計(jì)算機(jī)軟件將測(cè)定序列與內(nèi)源性南非代表毒株 enJ S56A1
(A F153615) 的 pol 基因序列比較 ,核苷酸同源性為 99. 3 % ,推導(dǎo)出的氨基酸同源性為 95. 0 %。與外源性南非代表株J SRV2
SA (M80216) 的 pol 基因序列比較 ,核苷酸同源性為 99. 0 % ,氨基酸同源性為 99. 3 %。這也是我國(guó)首次報(bào)道的內(nèi)源性綿羊肺
腺瘤病毒 pol 基因序列 ,為我國(guó)科研工作者進(jìn)行更深入的研究奠定基礎(chǔ)。
關(guān)鍵詞: 內(nèi)源性綿羊肺腺瘤病毒;  pol 基因; 克隆; 序列分析
中圖分類(lèi)號(hào):Q78 　　　　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 　　　　文章編號(hào):052926005 (2007) 1220008202
Cloning and sequence analysis of  pol gene of  the  Inner Mongolia strain
of endogenous jaagsiekte sheep retrovirus
WAN G Yu , L IU  Shu2ying ,  HAN  Min , L I Jian2yun
(College of  Animal  Science and Animal Medicine ,  Inner Mongolia Agricultural University ,  Huhhot 010018 , China)
　　收稿日期:2006207212
基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金(30560108)
作者簡(jiǎn)介:王宇(19812)  ,男 ,碩士 ,主要從事動(dòng)物臨床內(nèi)科學(xué)和動(dòng)
物毒物檢驗(yàn)學(xué)研究 , E2mail :hhhtwangyu @sina. com
通訊作者:劉淑英 , E2mail :liushuying_imau @126. com
苗 E63 ,能有效地保護(hù)雛鴨安全度過(guò)易感期。該疫
苗株與 Ⅰ型弱毒疫苗的抗體消長(zhǎng)曲線(xiàn)基本一致[ 5 ]   ,
但總體上 E63 所產(chǎn)生的抗體水平要低。因此 ,還需
進(jìn)一步提高其 ELD50 以獲得更高水平的中和抗體。
基于此 ,本試驗(yàn)暫未進(jìn)行 E63 的毒力返強(qiáng)試驗(yàn)。
交叉保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果表明 , Ⅰ型和 Ⅳ型 D HV 的
雞胚化弱毒疫苗或高免血清均能有效地保護(hù)雛鴨抵
抗同型強(qiáng)毒的感染 ,但對(duì)異型強(qiáng)毒的攻毒缺乏足夠
的交叉保護(hù)。本實(shí)驗(yàn)室于 2001 -  2005 年間從北京、
河北、山東、江蘇、內(nèi)蒙古、重慶等地分離到 10 株
DHV ,血清型鑒定結(jié)果表明 ,來(lái)自?xún)?nèi)蒙和山東的 2 株
屬于Ⅰ型 ,來(lái)自河北、江蘇和重慶的 4 株屬于 Ⅳ型 ,而
北京地區(qū)的 4 株病毒中既包括Ⅰ型 ,也包括 Ⅳ型。結(jié)
合已有的研究成果[11 -  12 ]   ,可以認(rèn)為 ,從上世紀(jì)末至
今 ,Ⅰ型D HV 在我國(guó)仍呈普遍流行的趨勢(shì) ,但至少在
10 年前我國(guó)就已存在Ⅰ型 D HV 的抗原變異株 ,且變
異株業(yè)已廣泛流行于我國(guó)北京、河北、重慶、江蘇、福
建、廣東等地 ,因此 ,在這些地區(qū) ,若僅針對(duì)Ⅰ型 D HV
進(jìn)行被動(dòng)免疫或主動(dòng)免疫 ,免疫效果勢(shì)必表現(xiàn)為不確
實(shí)。結(jié)果提示 ,進(jìn)一步研制Ⅰ型和 Ⅳ型二價(jià)疫苗對(duì)于
有效控制我國(guó)雛鴨病毒性肝炎的發(fā)生和流行是至關(guān)
重要的 ,而對(duì)于暴發(fā)鴨病毒性肝炎的鴨群 ,必需注射Ⅰ
型2 Ⅳ型二價(jià)抗體 ,方可獲得較好的治療效果。
參考文獻(xiàn):
[ 1 ] 　Saif  Y M.  禽病學(xué) [ M ] .  高福 ,蘇敬良 ,索勛 , 譯.  11 版.  北
京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社 ,2004 : 3762384.
[ 2 ] 　Sandhu  T S , Calnek B W , Zeman L .  Pat hologic and serologic
characterization of a variant of duck hepatitis type  Ⅰvirus[J ] .
Avian Dis , 1992 , 36 : 9322936.
[ 3 ] 　郭玉璞 , 潘文石.  北京鴨病毒性肝炎血清型的初步鑒定 [J ] .
中國(guó)獸醫(yī)雜志 , 1984 , 10 (11) : 223.
[ 4 ] 　潘文石 , 胡壽文 , 陳永南 , 等.  鴨肝炎病毒的研究( Ⅱ)  —鴨肝
炎病毒的雞胚化弱毒株(D HV241) [J ] .  北京大學(xué)學(xué)報(bào):自然科
學(xué)版 , 1980 , 4 : 83291.
[ 5 ] 　張衛(wèi)紅.  雛鴨病毒性肝炎弱毒疫苗的研究 [ D ] .  北京: 中國(guó)農(nóng)
業(yè)大學(xué) , 1989.
[ 6 ] 　徐克勤 , 郭美玲 , 吳連根 , 等.  鴨肝炎病毒弱毒株的研究[J ] .
中國(guó)獸醫(yī)雜志 , 1990 , 16 (1) : 47249.
[ 7 ] 　程安春 , 汪銘書(shū) , 陳孝躍 , 等.  發(fā)現(xiàn)于我國(guó)的 Ⅲ型雛鴨肝炎病
毒的分離、鑒定及其特性研究[ C]/ / 中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)
分會(huì)第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集.  成都:  中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)
禽病學(xué)分會(huì) , 2002 : 620.
[ 8 ] 　蘇敬良 , 黃瑜 , 賀榮蓮 , 等.  新型鴨肝炎病毒的分離及初步鑒
定[J ] .  中國(guó)獸醫(yī)科技 , 2002 , 32 (1) : 15216.
[ 9 ] 　許力干 , 趙武 , 陳澤祥 , 等.  廣西部分地區(qū)鴨肝炎流行及防治
現(xiàn)狀調(diào)查[J ] .  廣西農(nóng)業(yè)科學(xué) , 2002 , 3 : 142.
[ 10 ]  黃安國(guó) , 蔣玉雯 , 白安斌 , 等.  新型鴨肝炎病毒的分離與初步
鑒定[J ] .  廣西畜牧獸醫(yī) , 2003 ,  (5) : 1982199.
[ 11 ]  林世棠 , 黃瑜 , 黃紀(jì)銓 , 等.  一種新的鴨傳染病研究:1.  流行
情況與初步診斷[J ] .  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào) , 1996 ,  (4) : 14217.
[ 12 ]  陳建紅 , 張濟(jì)培 , 司興奎 , 等.  標(biāo)準(zhǔn)鴨肝炎 Ⅰ型血清對(duì)鴨肝炎
野毒株的免疫保護(hù)試驗(yàn)[ J ] .  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào) ,  2001 ,  21 ( 3) :
2312234.
[ 13 ]  鄭獻(xiàn)進(jìn) , 張大丙 , 曲豐發(fā) , 等.   Ⅰ型鴨肝炎病毒變異株的鑒定
[J ] .  中國(guó)獸醫(yī)雜志 , 2006 , 42 (5) : 15216.
8 中國(guó)獸醫(yī)雜志 2007 年(第 43 卷) 第12 期 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 Chinese Journal of  Veterinary Medicine 　　
© 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.    http://www.cnki.net

haiwuya

四型鴨肝炎？暫時(shí)還沒(méi)聽(tīng)說(shuō)過(guò)