精液品質(zhì)檢查

大器晚成

目前在全世界范圍內(nèi)，牛的人工授精已普遍采用冷凍精液輸精。因此，在奶
牛人工授精中的精液品質(zhì)檢查，主要是指在輸精前后，對解凍后的精液進(jìn)行檢查。
國內(nèi)外公牛的冷凍精液都有嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，用戶對其質(zhì)量的檢查主要是進(jìn)一步核
實(shí)其質(zhì)量，了解或發(fā)現(xiàn)操作中的問題。

一、
精子解凍活率檢查

（一）顆粒冷凍精液
取消毒并封裝于安瓿內(nèi)的稀釋液（一般為2．9％檸檬酸
鈉1毫升），放于40℃的溫水中，待其溫度接近40℃時，打開安瓿放入顆粒冷凍精液1粒，輕輕搖動，使其融化，即可取樣在高倍顯微鏡下觀察其活率。
檢查時顯微載物臺的溫度應(yīng)保持在37℃左右。在評定活率時，要注意上、中、下三個層次精
子活率的變化，左、右、上、下四個方位視野的差異，才能做出較準(zhǔn)確的判斷。活
率在0．3以上即為合格精液。

（二）細(xì)管冷凍精液
可直接投入40℃溫水中，待其融化后，立即取出，剪去棉塞一端，取樣檢查。

二、
死活精子比例檢查
先將精子死活染色液分裝于容量為0．5毫升左右的指形玻璃小管中，染色液
為伊紅。苯胺黑溶液（含5％水溶性伊紅和1％苯胺黑溶液），染色前先放入37℃恒
溫箱或水浴箱中預(yù)熱，滴入解凍精液2～3滴，混勻后再放入溫箱，3 分鐘后即可制做抹片，待抹片風(fēng)干革命后在油鏡下觀察。死精子為紅色，活精子不
著色或只在頭部的核環(huán)處呈淡紅色。隨機(jī)觀察200個精子并計(jì)算出死、活精子的比例。
用這種方法所得到的活精子百分?jǐn)?shù)要高于精子的活率。對于活率觀察，技術(shù)熟練、估計(jì)準(zhǔn)確的人
員可不做精子死活染色的檢查。

三、
密度檢查
對精子密度檢查的最簡單方法是，取1滴解凍精液在低倍顯微鏡下憑經(jīng)驗(yàn)粗略
地估計(jì)其密度是否符合輸精的要求。
較精確的方法是采用血球計(jì)數(shù)裝置，進(jìn)行精確的計(jì)算，具體方法在這里不作
介紹。以此為基礎(chǔ)建立起來的光電比色法測定精液中精子密度，已經(jīng)被大型公牛站廣泛應(yīng)用。
通過密度的檢查可以計(jì)算出被檢精液每毫升所含的精子數(shù)，再根據(jù)解凍后的
活率可得每毫升精液中的有效精子數(shù)（即呈直線前進(jìn)運(yùn)動的精子數(shù)），最后乘以輸精劑量（顆粒冷凍精液為0．1±0．01毫升；細(xì)管冷凍精液為0．5毫升或0．25毫升）
計(jì)算出每個輸精劑量的有效精子數(shù)（顆粒冷凍精液為1200萬以上；細(xì)管冷凍精液為 1000萬以上）。

四、
其他方面的檢查
包括畸形精子的比例、頂體完整率、生存指數(shù)等方面的檢查。在一般生產(chǎn)條件下是不進(jìn)行的，只有在輸精后母牛的受胎率明顯下降又很難找到確切的原因時，才送交有關(guān)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行這些項(xiàng)目的檢查。
第三節(jié)
奶牛精液的冷凍保存
到目前為止，在各種家畜中，牛的精液冷凍保存技術(shù)最為成功，已形成一套完整定型的工藝流程。
（一）、
冷凍稀釋液的選擇和配制

（1）稀釋液的選擇牛冷凍精液稀釋液的種類較多，
可根據(jù)自身的經(jīng)驗(yàn)和條
件選用并固定1～2個最適宜的稀釋液配方。

（2）稀釋液的配制原則
第一，配制稀釋液所使用的一切用具，必須經(jīng)認(rèn)真清洗和嚴(yán)格消毒。
第二，稀釋液要現(xiàn)用現(xiàn)配，保持新鮮，經(jīng)密封、消毒的稀釋液，允許在0～5℃
的冰箱中保存1周。但卵黃、抗生素、酶、激素等有生物活性的物質(zhì)，
必須在用前
臨時添加。
第三，稀釋用水應(yīng)為蒸餾水或重蒸餾水，要求保持新鮮、中性。
第四，配制稀釋液所用的化學(xué)制劑要純凈，一般要求化學(xué)純或分析純；稱量
要準(zhǔn)確無誤，經(jīng)充分溶解、過濾后進(jìn)行消毒（隔水煮沸或蒸氣消毒）。
第五、卵黃和奶類成分要求新鮮、無污染、無雜質(zhì)。
第六，抗生素等有生物活性的物質(zhì)，必須在稀釋液冷卻至室溫時加入，以免
失去活性。
（二）、精液的稀釋

（1）稀釋倍數(shù)的確定對原精液的稀釋倍數(shù)主要依據(jù)精液的精子密度和活率，
以及精子解凍后的活率來確定，雖無具體規(guī)定，但必須保證每個輸精劑量中，在解
凍后所含的有效精子（直線前進(jìn)運(yùn)動的精子）數(shù)達(dá)到規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。例如，60年代，
國外冷凍精液的稀釋倍數(shù)只有一個大致的范圍，英國不超過50倍，愛爾蘭10倍左右，
法國9～23倍，前蘇聯(lián)10～25倍，美國為30～50倍，保證每個輸精劑量有1500 萬有
效精子。
我國當(dāng)前在顆粒冷凍精液的生產(chǎn)中，由于顆粒體積的縮小和解凍后的再稀釋，
一般按原精液做1：2～4倍稀釋。滴凍顆粒為0．1毫升，解凍時每毫升的解凍液加
入一粒，即為一個輸精劑量。其中含有效精子不少于1000萬，仍可獲得理想的受胎
效果。實(shí)際上，其最終稀釋倍數(shù)是30倍左右。

(2）稀釋方法
甘油是牛精液冷凍保存的重要保護(hù)劑，但它對精子同時也具有性。為減低甘油對精
子的有害作用，多采用兩次稀釋，即采精后先用不含甘油的
第一液稀釋到最終稀釋倍數(shù)的一半，經(jīng)緩慢降溫（不少于60分鐘）至4～5℃的溫度
下，再加入同溫等量含甘油的第二液。第二液的加入方法有一次或多次加入，以及
緩慢滴入等方法。甘油的最終濃度通常為7％。
近年來，在試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，我國有的采用一次稀釋的方法。即采精后用同溫
的含甘油稀釋液一次稀釋完成，也取得了良好的冷凍保存效果。

（三）、精液的低溫平衡
平衡是指精液加入含甘油的稀釋液后，需在4～5℃的條件下放置的時間。在
此之前，首先要把采精后稀釋的精液緩慢降溫至4～5℃。具體做法是：將裝精液的
容器外面包以紗布、棉花，或放入同溫的水中，再放入0～5℃的冰箱中，經(jīng)1 小時即可達(dá)到降溫的目的。
牛精液在冷凍前各國采用的平衡時間差異較大，我國一般在2～4小時。

（四）、精液分裝和凍結(jié)

（1）分裝牛精液在冷凍前可采用玻璃安瓿、塑料細(xì)管和顆粒3種分裝方法。
目前應(yīng)用較多的是后面兩種，并且細(xì)管法日漸增多。顆粒法雖有容積小、操作簡單、
成本低、快速凍結(jié)效果好等優(yōu)點(diǎn)，但存在著不易標(biāo)記、易破損和污染以及解凍再稀
釋等問題。
細(xì)管法具有衛(wèi)生條件好、容積小、可快速冷凍、精子損耗少，、易標(biāo)記和適
于機(jī)械化生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。到目前為止，我國仍多采用顆粒法冷凍，但已逐步向細(xì)管法
過渡。
精液分裝前，塑料細(xì)管要用打印機(jī)作好有關(guān)標(biāo)記（公牛號、品種、生產(chǎn)日期
等），并在紫外線燈下照射消毒。
分裝是用專門的機(jī)械進(jìn)行的，分裝后即可放入0～5℃的。冰箱緩慢降溫和平
衡，時間與顆粒法相似。
凍結(jié)時，將平衡后的細(xì)管平放在紗網(wǎng)上，放置在距離液氮面2～3厘米處，停
留7～8分鐘，隨后浸入液氮。經(jīng)抽樣檢查合格后，即可按一定包裝規(guī)格包裝并在液
氮中長期保存。

（2）凍結(jié)
牛精液冷凍的冷源普遍應(yīng)用液氮。顆粒精液在經(jīng)液氮冷卻的氟板（聚四氟乙烯）、銅紗網(wǎng)、鋁板上滴凍。要使承
接精液的表面與液氮面保持一定的距離（1～2厘米）。在滴凍的過程中，要維持一 80～一120℃的溫度。滴凍前要將經(jīng)平衡的精液充分混勻。并檢查精子的活率。
滴要迅速，顆粒要均勻，每毫升經(jīng)過稀釋的精液滴10粒左右為宜。滴凍結(jié)束后，要
停留2～3分鐘，待所有顆粒已凍結(jié)立即投入液氮。經(jīng)抽樣檢查（一般隨機(jī)抽取2粒）
，解凍活率在0．3以上者，即可裝于紗布袋中，經(jīng)標(biāo)記后在液氮中保存。每滴凍完
一頭公牛的精液后，必須更換氟板等用具。
目前，細(xì)管的容量分0．25毫升和0．5毫升兩種，由無毒塑料（聚氯乞烯）制
成。管的一端填有棉塞和聚乙烯粉未，粉未遇水即固化自動封口，輸精時又成為推
送精液的活塞；另一端在注入精液后，可以聚乙烯粉或鋼珠（或塑料珠）封口，要
注意在封口處與精液間留有10～13毫米的空間，防止冷凍過程中咽膨脹引起細(xì)管爆裂。

二、精液貯存和解凍

（一）精液的貯存
牛的冷凍精液是以液氮做冷源進(jìn)行貯存的，需要時可隨
時取出。為防止溫度變化對精液品質(zhì)的影響，取放動作要迅速，盡量減少在空氣中
停留的時間。從貯存容器中提取冷凍精液時，精液不應(yīng)超過液氮容器的頸基部，避
免因溫度的回升造成精液解凍活率的下降。
牛的冷凍精液已有40多年的歷史。試驗(yàn)證明，保存至今的冷凍精液仍具有授精
能力。但一般認(rèn)為牛的冷凍精液隨保存時間的延長，精子的活力和授精能力逐漸降
低。牛冷凍精液長期保存的確切時限，尚需繼續(xù)研究和觀察。

（二）解凍
冷凍精液的解凍過程會影響精子的活力，要注意解凍的溫度和操作方法。
最初世界各國對解凍溫度的要求不同，大體可分為高溫40℃、室溫15～20℃和
冷水10℃3種。當(dāng)前認(rèn)為40℃左右解凍效果最好。隨著解凍溫度的降低，
精子活率
有逐漸降低的趨勢。
解凍方法：顆粒精液解凍多采用一定量的經(jīng)預(yù)熱至40℃的解凍液，將顆粒精液
投入其中，經(jīng)搖動至融化。解凍液可用2．9％的檸檬酸鈉溶液，也可用含葡萄糖3 ％和檸檬酸鈉1．4％的溶液。制成的解凍液，分裝于安瓿內(nèi)，經(jīng)滅菌和封口后可長
期使用。
細(xì)管精液的解凍應(yīng)將封口端向上，棉塞端朝下，投入40℃左右的溫水中，待細(xì)
管顏色一變立即取出用于輸精。解凍后的精液應(yīng)立即取樣檢查活率，凡在0．3以上
者即可使用。若一次輸精母牛頭數(shù)較多，也可在輸精前隨機(jī)抽樣檢查。
解凍后的精液其精子存活時間較短，幾乎均采用距輸精數(shù)分鐘至１小時之內(nèi)解
凍，才能保證較高的受胎率。
為了方便起見，國內(nèi)外一些人工授精員在到現(xiàn)場輸精前將細(xì)管冷凍精液裝入貼
身的衣袋內(nèi)、用體溫使其解凍后進(jìn)行輸精，這是一種簡便而有效的方法。

三.奶牛的輸精。

一、輸精時間的確定
奶牛的發(fā)情周期平均為21天左右，發(fā)情持續(xù)期較短，大約２0小時，排卵一
般發(fā)生在發(fā)情結(jié)束后10～16小時，因此，準(zhǔn)確的發(fā)情鑒定，適時輸精是提高受胎率
的有力保證。
奶牛輸精的實(shí)踐表明：在母牛接受爬跨（即站立發(fā)情階段的末期或浚情后期
的開始階段）；卵泡發(fā)育期的后期或卵泡成熟期輸精坷獲得最佳的受胎效果。
從母牛接受爬跨開始到排卵后的這段時間輸精的不返情率表明；在母牛接受
爬跨第八至二十四小時輸精的受胎率最高。
輸精人員應(yīng)掌握以下規(guī)律：母牛在早晨接受爬跨，應(yīng)在當(dāng)日下午輸精，若次
日早晨仍接受爬跨應(yīng)再輸精1次；母牛下午或傍晚接受爬跨，可推遲到次日早晨輸精。
如果輸精員由本場人員擔(dān)任，一般在第一次輸精后12小時做第二次輸精。如
果是個體飼養(yǎng)的小群奶牛，輸精時間應(yīng)更靈活些。

二、輸精部位和輸精次數(shù)

（一）輸精部位
大量的試驗(yàn)證明，采用子宮頸深部、子宮體、排卵側(cè)或排
卵側(cè)子宮角輸精的受胎率沒有顯著差異。當(dāng)前普遍采用子宮頸深部（子宮頸內(nèi)口）
輸精。

（二）輸精次數(shù)
冷凍精液輸精，除母牛本身的原因外，母牛的受胎率主要
受精液質(zhì)量和發(fā)情鑒定準(zhǔn)確性的影響。若精液質(zhì)量優(yōu)良，發(fā)情鑒定準(zhǔn)確，1 次輸精可獲得滿意的受胎率。由于發(fā)情排卵的時間個體差異較大，一般掌握在1～2次為
宜。盲目地增加輸精次數(shù)，不但不能提高受胎率，有時還可能造成某些感染，發(fā)生
子宮或生殖道疾病。

三、輸精方法
輸精方法有開張器輸精和直腸把握輸精兩種。

（一）開張器輸精法
借助開張器將母牛的陰道擴(kuò)大，借助一定的光源（手筒、額鏡、額燈等）找到子宮頸
外口，把輸精管插入子宮頸1～2厘米處，注入精
液，隨后取出輸精管和開張器。此法雖然簡單、容易掌握，但輸精部位淺，易感染，
受胎率低。因此，目前很少采用。
（二）直腸把握子宮頸輸精法與直腸檢查相似，一只手戴上薄膜手套，伸入
直腸，掏出宿糞，尋找子宮頸，并握住子宮頸的外口端，使子宮頸外口與小指形成
的環(huán)口持平（圖3一4）。用伸入直腸的手臂壓開陰門裂，另一只手持輸精器插入陰
門（插入時先斜上再轉(zhuǎn)成水平，切勿將輸精器插入尿道開口）。借助握子宮頸外口
處的手與持輸精器的手協(xié)同配合，使輸精器緩緩越過于宮頸內(nèi)側(cè)的皺褶（一般為42 個），然后注入精液，在把握子宮頸時，位置要適當(dāng)，才有利于兩手的配合，既不可靠前，也不可太靠后，否則難以將輸精器插入子宮頸深部。
直腸把握子宮頸法是國內(nèi)外普遍采用的輸精方法，具有用具簡單，
不易感染，輸精部位深和受胎率高的優(yōu)點(diǎn)。其受胎率比開張器法高出10%—20%，大幅度提高了
奶牛的繁殖率和經(jīng)濟(jì)效益。同時借助直腸觸摸母牛子宮和卵巢的變化，也可進(jìn)一步
判斷發(fā)情或妊娠情況，防止誤配或造成流產(chǎn)。
個人的授精技術(shù)對受胎率有很大影響，有經(jīng)驗(yàn)的人工授精員可獲得最佳的受胎
效果。在炎熱的氣候條件下，母牛的發(fā)情時間較短，全天進(jìn)行輸精都有效。在這種
條件下，奶牛飼養(yǎng)者自己進(jìn)行人工授精操作往往可獲得較好的結(jié)果，而受過一定人
工授精技術(shù)訓(xùn)練是獲得最佳效果的保證。經(jīng)常對人工授精人員進(jìn)行考核有助于評價
和改進(jìn)他們的輸精質(zhì)量和受胎效果。為了獲得良好的受胎效果，精液應(yīng)貯存于可定期檢查的容器內(nèi)。

四、產(chǎn)犢到第一次輸精最佳間隔的確定
雖然產(chǎn)犢后首次輸精時間提早可使母牛妊娠的時間提前，
但產(chǎn)犢后過早配種也
并非明智之舉，因?yàn)椋孩佼a(chǎn)后泌乳早期需要一段時間恢復(fù)身體；②一產(chǎn)青年母牛在
下次妊娠前尚未完成自身的發(fā)育；③產(chǎn)后早期妊娠率很低；④實(shí)踐證明奶牛的
產(chǎn)犢間隔少于365天并非有利；⑤更重要原因是產(chǎn)后過早配種其泌乳期達(dá)不到305天。
因此，許多生產(chǎn)者對一些高產(chǎn)牛都把產(chǎn)后第一次配種時間控制在產(chǎn)后85～95天。
五、母牛的再配種
很難做到所有的輸精都能成功地妊娠，有時經(jīng)多次輸精仍不妊娠；有些雖然能
正常妊娠，但有時會在妊娠后發(fā)生胚胎死亡和流產(chǎn)。通常把在妊娠初期她天內(nèi)的妊
娠失敗稱胚胎死亡；妊娠43～151天的妊娠中斷稱胎兒死亡；而把在此以后發(fā)生的
妊娠中斷叫流產(chǎn)。胚胎死亡可能無任何明顯外部癥狀，因此，母牛輸精后繼續(xù)進(jìn)行
發(fā)情觀察是十分重要的。特別是對輸精3周后無發(fā)情表現(xiàn)而被認(rèn)為妊娠的母牛更應(yīng)
注意。對輸精3～6周的母牛也應(yīng)繼續(xù)觀察，發(fā)現(xiàn)返情，應(yīng)及時再輸精，以避免時間
和經(jīng)濟(jì)的浪費(fèi)。最后一次輸精經(jīng)6～8周若無任何發(fā)情表現(xiàn)，應(yīng)該進(jìn)行妊娠診斷。如
果經(jīng)多次輸精仍不妊娠，就應(yīng)及時淘汰。若牛群中有多頭母牛出現(xiàn)類似問題，應(yīng)及時檢查和處理。實(shí)踐證明，上述問題常常是管理不善所致。

2008東北人

太專業(yè)了................