畜禽組織中三聚氰胺的測定

天高云淡哥哥 · 發(fā)表于 2009-4-10 11:08:12

畜禽組織中三聚氰胺的測定

Determination of melamine in livestock and poultry tissues

2008-12-26發(fā)布 2009-01-01實施

四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布

前言

1 范圍

2 規(guī)范性引用文件

3 方法1：高效液相色譜法

4 方法2：氣相色譜質(zhì)譜法

附錄A （資料性附錄）三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)圖譜

前言

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為資料性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T.1.1-2000《標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則》和GB/T.1.2-2002《標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)范性技術(shù)要素內(nèi)容的確定方法》要求進(jìn)行編制。

本標(biāo)準(zhǔn)由四川省畜牧食品局提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)由四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)。

本標(biāo)準(zhǔn)由四川省畜產(chǎn)品安全檢測中心負(fù)責(zé)起草。

本標(biāo)準(zhǔn)起草人：林順全、張靜、李云、高慶軍、廖峰、趙立軍。

畜禽組織中三聚氰胺的測定

1　范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定畜禽組織中三聚氰胺的含量的高效液相色譜法(HPLC)和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)，其中GC-MS法為確證法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于畜禽肌肉及內(nèi)臟中三聚氰胺的測定。

本標(biāo)準(zhǔn)中HPLC法最低定量限為2.0mg/kg，GC-MS法最低定量限為0.05mg/kg。

2　規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

3　方法1：高效液相色譜法

3.1　原理

試樣經(jīng)乙醚脫脂后用三氯乙酸溶液提取，提取液離心后經(jīng)混合型陽離子交換固相萃取柱凈化，洗脫物吹干后用甲醇溶液溶解，用高效液相色譜儀進(jìn)行測定。

3.2　試劑與材料

除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑和符合GB/T6682的三級水，色譜用水符合GB/T6682一級水的規(guī)定。

3.2.1　甲醇：色譜純。

3.2.2　乙腈：色譜純。

3.2.3　氨水：濃度25%～28%。

3.2.4　混合型陽離子交換固相萃取柱：60mg，3mL。

3.2.5　三氯乙酸溶液10g/L：稱取10g三氯乙酸加水至1000mL。

3.2.6　氨水甲醇溶液：量取5mL氨水，用甲醇定容至100mL。

3.2.7　乙酸鉛溶液：取2.2g乙酸鉛用約30mL水溶解后定容至100mL。

3.2.8　濾膜：0.45µm，有機(jī)相。

3.2.9　甲醇溶液：200mL甲醇(3.2.1)加入800mL一級水，混勻。

3.2.10　流動相：稱取2.16g辛烷磺酸鈉和2.10g檸檬酸于1L容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度。取該溶液900mL加入100mL乙腈(3.2.2)。

3.2.11　三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品(純度>99%)。

3.2.12　三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液

3.2.12.1　標(biāo)準(zhǔn)儲備液：稱取100mg(精確到0.1mg)的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶液(3.2.9)溶解并定容于100mL容量瓶中，該溶液濃度為1mg/mL，于4℃冰箱內(nèi)貯存，有效期3個月。

3.2.12.2　標(biāo)準(zhǔn)中間液：吸取標(biāo)準(zhǔn)儲備液5.00mL，于50mL容量瓶內(nèi)，用甲醇溶液(3.2.9)定容至50mL，該溶液三聚氰胺濃度為100μg/mL，于4℃冰箱內(nèi)貯存，有效期1個月。

3.2.12.3　標(biāo)準(zhǔn)工作液：用移液管分別移取標(biāo)準(zhǔn)中間液2mL、5mL、10mL、15mL、20mL于5個100mL容量瓶內(nèi)，用甲醇溶液(3.2.9)定容，該溶液三聚氰胺濃度為2.0μg/mL、5.0μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL。于4℃冰箱內(nèi)貯存，有效期1周。

3.3　儀器與設(shè)備

3.3.1　高效液相色譜儀，配有二極管陣列檢測器或紫外檢測器。

3.3.2　離心機(jī)：10000r/min。

3.3.3　渦旋混合器。

3.3.4　帶蓋塑料離心管：50mL

3.3.5　氮吹儀，可控溫至60℃。

3.3.6　固相萃取裝置。

3.3.7　實驗室用絞碎機(jī)。

3.3.8　震蕩搖床。

3.4　試樣制備

豬肉、豬肝：取適量新鮮或冷凍的空白或供試組織，絞碎并使均勻。

試樣放入聚乙烯瓶中-16℃～-20℃條件下保存。

3.5　測定步驟

3.5.1　提取

稱取2g試樣(精確至0.01g)于帶蓋塑料離心管（3.3.4），加入約25mL乙醚，搖床上振蕩20min，棄去乙醚，準(zhǔn)確加入18mL三氯乙酸溶液(3.2.5)和2mL乙酸鉛溶液(3.2.7)，搖勻，渦旋提取2min，在10000r/min離心機(jī)上離心5min，上清液備用。

3.5.2　凈化

分別用3mL甲醇，3mL水活化混合型陽離子交換固相萃取柱，準(zhǔn)確移取10mL上清液分次上柱，控制過柱速度在1mL/min以內(nèi)。再用3mL水和3mL甲醇洗滌混合型陽離子交換固相萃取柱，抽近干后用氨水甲醇溶液(3.2.6)6mL洗脫。洗脫液50℃氮氣吹于，準(zhǔn)確加入甲醇溶液(3.2.9)1.0mL，渦旋振蕩30s，過0.45µm濾膜，上機(jī)測定。

3.5.3　液相色譜條件

色譜柱：C18柱，柱長150mm，內(nèi)徑4.6mm，粒度5μm；或性能相當(dāng)?shù)纳V柱。

柱溫：30℃。

流動相流速：1.0mL/min。

檢測波長：240nm。

3.5.4　測定

按照保留時間進(jìn)行定性，試樣與標(biāo)準(zhǔn)品保留時間的相對偏差不大于2%，單點或多點校正外標(biāo)法定量。待測樣液中三聚氰胺的響應(yīng)值應(yīng)在工作曲線范圍內(nèi)。

3.6　結(jié)果計算和表述

3.6.1　試樣中三聚氰胺的含量X，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)毫克每千克(mg/kg)表示，單點校正按式(1)計算