偽狂犬病防制技術規(guī)范

寧衡

偽狂犬病防制技術規(guī)范

偽狂犬?。≒seudorabies,Pr 又名Aujeszky’s disease,AD）。是由皰疹病毒科豬皰疹病毒I型（偽狂犬病毒PrV）引起的各種家畜和野生動物以發(fā)熱、奇癢（豬除外）及腦脊髓炎為特征的急性傳染病。除豬以外的其它動物發(fā)病均以死亡而告終，但呈散發(fā)形式或地方疫源性疾病。該病對養(yǎng)豬業(yè)的危害最大，在豬呈爆發(fā)流行，常引起妊娠母豬發(fā)生流產、死胎、木乃伊胎、新生仔豬大量死亡，育肥豬發(fā)生嚴重的呼吸道癥狀和增重滯緩、種豬不育，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。世界動物衛(wèi)生組織（Wold Organisation for Animal Health，簡稱OIE）將其列為B類動物疫病，我國將其列為二類動物疫病。
為了預防、控制和消滅偽狂犬病，依據(jù)（中華人民共和國動物防疫法）和共他相關法律法規(guī)，特制定本技術規(guī)范。
1．適用范圍
本規(guī)范適用于中華人民共和國境內一切從事哺乳動物飼養(yǎng)、經(jīng)營、使用、屠宰、加工、運輸?shù)认嚓P活動中的動物疫病防治工作。
2．診斷
根據(jù)流行特點，臨床特征和病理變化，結合乳膠凝集試驗（LAT）和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）作出初步診斷。確認需進一步做病毒中和試驗（NT）或病毒分離鑒定或動物接種試驗或聚合酶鏈反應（PCR）。
2．1 流行特點
本病與其他皰疹病毒病不同，宿主范圍廣，豬、牛、羊、犬、貓最易感，寒冷季節(jié)多發(fā)，本病在豬呈爆發(fā)流行，豬是偽狂犬病毒儲存者和傳染源，病豬、隱性感染豬和康復豬可以長期帶毒。病毒在豬群中主要通過空氣傳播，通過呼吸道和消化道感染，也可通過胎盤感染胎兒，除豬以外的其它動物感染偽狂犬病毒后，發(fā)病均以死亡告終，但呈散發(fā)形式或地方疫源性疾病。
2．2 臨床表現(xiàn)：
2．2．1 潛伏期一般為3-6天
2．2．2 牛、羊、犬、貓、兔等動物感染本病后以發(fā)熱、興奮、奇癢、腦脊髓炎癥狀，結果均以死亡轉歸。
2．2．3 母豬感染偽狂犬病毒后常發(fā)生流產、產死胎、弱仔、木乃伊胎。青年母豬和空懷母豬常出現(xiàn)返情、屢配不孕或不發(fā)情；公豬常出現(xiàn)睪丸腫脹、萎縮、性能下降、失去種用能力；新生仔豬大量死亡，15日齡內死亡率為100%；斷奶仔豬發(fā)病20-30%，死亡率為10-20%；仔豬癥狀病初高燒、腹瀉、嘔吐、精神不振，隨后出現(xiàn)轉圈、震顫、鳴叫、昏睡等神經(jīng)癥狀；育肥豬出現(xiàn)嚴重呼吸道癥狀，生長滯緩，飼料報酬降低。
2．3 病理變化：
病理組織學呈現(xiàn)非化膿性腦炎變化，剖檢腦膜瘀血、出血，腎臟布滿針尖樣出血點，其它大體剖檢特征不明顯。
2．4 實驗室診斷：
2．4．1 病原學診斷：
2．4．1．1 動物接種：
采取病豬扁桃體，嗅球、腦和肺，用生理鹽水或PBS（磷酸鹽緩沖液）制成10%懸液，反復凍融三次后離心取上清液接種于家兔皮下或者小鼠腦內，（用于接種的家兔和小白鼠必須事先用乳膠凝集試驗或ELISA檢測偽狂犬病毒抗體陰性者才能用），家兔經(jīng)2-5天或者小鼠2-10天發(fā)病死亡。家兔發(fā)病時先用舌舔接種部位，以后用力撕咬接種部位，使接種部位被撕咬傷、鮮紅、出血，持續(xù)4-6小時，病兔衰竭，倒臥于一側，痙攣，呼吸困難而死亡。小鼠不如家兔敏感，但明顯表現(xiàn)興奮不安，神經(jīng)癥狀，奇癢和四肢麻痹而死亡。
2．4．1．2 雞胚接種：
取上述上清液接種9-10日齡雞胚絨毛尿囊腔，經(jīng)3-4天后形成特征性痘皰樣白斑，死亡的雞胚神經(jīng)系統(tǒng)出血導致胚胎顱腔突出，取尿囊液做病毒中和試驗，進行病毒鑒定。
2．4．1．3 用細胞培養(yǎng)分離病毒，見附件一。
2．4．1．4 聚合酶鏈反應（PCR）診斷，見附件二。
2．4．1．5熒光抗體試驗（見附件三）
2．4．2 血清學診斷（抗體檢測）
2．4．2．1 微量中和試驗（固定病毒、稀釋血清）見附件四
2．4．2．2 酶聯(lián)免疫吸附試驗（見附件五）
2．4．2．3 乳膠凝集試驗（見附件六）
2．4．2．4 瓊脂擴散試驗（見附件七）
2．4．2．5 區(qū)分強弱毒感染鑒別乳膠凝集試驗（見附件八）
2．4．2．6 區(qū)分強弱毒感染鑒別ELISA（見附件九）
3．疫情報告
凡發(fā)現(xiàn)疑似疫情的單位和個人，均應及時報告所在地基層動物防疫組織或動物防疫監(jiān)督機構。
接到報告后的基層防疫組織和動物防疫監(jiān)督機構，按《動物疫情報告管理辦法》的規(guī)定上報。
4．疫情處理
4．1 緊急免疫接種：對發(fā)病種母豬、種公豬，用gG單基因缺失滅活疫苗作緊急免疫接種注射，第一次注射后間隔4-6周后再加強免疫一次，以后按種豬免疫程序進行，對正在發(fā)病的豬場，仔豬采用TK-/gG-雙基因缺失弱毒疫苗作超前免疫，即滴鼻或注射一頭份劑量。對正在發(fā)病的仔豬用TK-/gG-雙基因缺失弱毒疫苗滴鼻或肌肉注射作緊急預防接種可收到很好的效果。同時對所有的其它種豬用gG單基因缺失滅活疫苗注射，仔豬和肥豬用TK-/gG-雙基因缺失弱毒疫苗注射。
4．2 消毒：對欄舍、場地、道路等用2%的氫氧化鈉溶液1-3%的漂白粉液。1:300的消毒靈或1:300的復合酚溶液噴灑；對金屬器具用0.5%的次氯酸鈉薰蒸消毒；工作人員服裝、鞋帽等用消毒液浸泡、高壓滅菌法消毒。
4．3 嚴格禁止狗、貓、雞、鳥類等動物進入豬場，加強滅鼠。
4．4 嚴格限制和減少豬場外來人員和外來車輛進入場內，同時要限制場內飼養(yǎng)員和工作人員在各豬舍互相來往和串門，以免人為擴散原病。
4．5 對病死動物尸體、剖檢動物、死胎、流產物及其它污染物和排泄物作銷毀無害化處理或者按《病死動物及產品深埋處理技術規(guī)范》深埋處理。
4．6 進行緊急免疫注射見效果后，以后按偽狂犬病根除計劃方案中偽狂犬病陽性場根除方案進行偽狂犬病的根除計劃（見5、6偽狂犬病根除計劃方案），直到最終消滅此病。
5．預防與控制：
5．1養(yǎng)畜場（含種畜場）的選址和布局要符合《動物防疫法》和國家畜牧獸醫(yī)主管部門規(guī)定的防疫條件，并取得動物防疫監(jiān)督機構頒發(fā)的《動物防疫合格證》。
5．2 經(jīng)常保持場（戶、舍）的清潔衛(wèi)生、嚴格滅鼠，嚴禁其它動物和鳥類進入場內，避免因動物帶毒傳播。
5．3 新進動物必須來源于非疫區(qū)（非疫場），并進行嚴格檢疫，偽狂犬抗體陰性或強毒感染陰性的豬才能引進。對出場、廠（戶）種畜由動物防疫監(jiān)督人員進行檢疫、監(jiān)測陰性的方出具檢疫合格證明，準予出場、廠（戶）；或經(jīng)動物防疫監(jiān)督機構檢疫，并持有檢疫合格證明。
5．4 免疫預防：對飼養(yǎng)動物（特別是豬）進行定期免疫。免疫用疫苗首選基因缺失苗，種豬選用gG-或gE-單基因缺失標志滅活疫苗、仔豬和育肥豬選用TK-/gG-或TK-/gE-雙基因缺失弱毒疫苗，注射劑量、部位和方法及疫苗保存、運輸方法等按生產廠的說明書要求進行。
免疫程序：種豬第一次免疫后，間隔4-6周后加強免疫一次，以后每6個月免疫一次，產仔前一個月加強免疫一次，經(jīng)過前面規(guī)則免疫后的種豬所產仔豬，其母源抗體可以維持到60日齡左右，因此后備種豬可在60-70日齡首免。間隔4-6周后加強免疫一次作為基礎免疫，以后按種豬的免疫程序進行免疫，育肥豬是經(jīng)過前述規(guī)則免疫后所產的仔豬，應在60-70日齡用基因缺失弱毒疫苗免疫一次，間隔4-6周后加強免疫一次，直到出欄。如果是沒有規(guī)則免疫母豬所產的仔豬，可提前到斷奶時注射一次，間隔4-6周后加強免疫一次，直到出欄。
5．5 監(jiān)測：對種豬場、育肥豬場要定期進行該病的監(jiān)測。監(jiān)測方法采用乳膠凝集試驗或ELISA方法，種畜場每年監(jiān)測2次，商品場每年監(jiān)測一次，監(jiān)測時種公豬（含后備種公豬）應100%，種母豬（含后備種母豬）按20%的比例抽檢，商品豬按5%的比例不定期進行抽檢；對有流產、產死胎、產木乃伊胎等癥狀的種母豬100%進行檢測。
5．6 偽狂犬病根除計劃方案：
    根據(jù)不同的豬場、不同情況和實驗室檢測情況，選擇不同的方案與措施。
種豬與種豬場
    偽狂犬病毒是屬于高度潛伏感染的病毒，而且這種潛伏感染隨時都有可能被體內外和環(huán)境變化的應激因素刺激而引起疾病爆發(fā)，同時基因缺失弱毒疫苗注射帶有野毒潛伏感染的動物時，由于活病毒之間發(fā)生基因交換和重組的可能性，加上種豬飼養(yǎng)的時間長（3-4年），因此這種可能性和機率就會增大，而且國內外都有因注射弱毒疫苗而引起偽狂犬病爆發(fā)的例子。因此在西方發(fā)達國家如德國嚴格規(guī)定種豬只允許使用滅活疫苗。美國在其偽狂犬病的根除計劃中，也規(guī)定種豬只允許使用滅活疫苗。根據(jù)以上這些特點，因此建議在我國種豬也只能使用基因缺失滅活疫苗。華中農業(yè)大學專門研制了針對種豬用的單基因缺失濃縮滅活疫苗。尤其是gG單基因缺失滅活疫苗對病毒的免疫原性幾乎完全沒有什么影響。因為gG是病毒的非結構蛋白基因，gG蛋白是病毒繁殖時分泌到細胞培養(yǎng)的上清中與病毒免疫原性無關；該基因缺失后，對病毒的免疫原性沒有什么影響，但又可以作為鑒別診斷。鑒于國內外已大量使用gE缺失疫苗，為了與國際接軌，我們也研制了gE單基因缺失滅活濃縮疫苗。
    育肥用的仔豬和架子豬可以使用雙基因缺失的弱毒疫苗。華中農大研制的TK-/gG-和TK-/gE-雙基因缺失弱毒疫苗都是缺失了偽狂犬病毒的主要毒力基因TK，該基因缺失疫苗可用作于新生仔豬（未吃初乳）的超前免疫，尤其是TK-/gG-缺失疫苗可用于發(fā)病仔豬的緊急預防接種，具有明顯的急救和預防效果。也可用于斷奶仔豬和生長育肥豬的免疫，可預防各種年齡豬的偽狂犬病，具有明顯的促生長作用。由于育肥豬的生長周期短（6個月左右），因此不存在病毒重組變異和返強的危險。
    5．6．1 種豬及種豬場的根除計劃
    5．6．1．1 在沒有使用過疫苗的豬場，先作普遍血清學檢查，如果發(fā)現(xiàn)血清學陽性豬，最好是能將血清學陽性豬與血清學陰性豬分群飼養(yǎng)。然后將血清學陽性豬和血清學陰性都用基因缺失滅活濃縮疫苗注射，所有豬普遍注射一次疫苗后，間隔4-6周再加強免疫一次。以后血清學陰性豬群按每半年注射一次，血清學陽性豬群每4個月注射一次，然后每半年進行一次血清學鑒別檢查，凡是注射疫苗血清學陽性的豬歸為健康群，凡是野毒感染血清學陽性豬歸為另一群，逐步縮小和有計劃的淘汰野毒感染豬群，逐步達到完全健康無野毒感染的豬群。直到最后根除消滅偽狂犬病。
    5．6．1．2 對已經(jīng)注射過疫苗的豬場，首先將疫苗完全換成濃縮單基因缺失滅活疫苗。免疫程序按每4個月注射一次。每半年進行一次血清學鑒別檢查，逐步開始分群將基因缺失疫苗免疫血清學陽性豬視為健康群分開飼養(yǎng)，將野毒感染血清學陽性豬分為另一群分開飼養(yǎng)，逐步淘汰和縮小野毒感染豬群，最后建立完全健康無野毒感染的豬群。
    5．6．1．3 以上述經(jīng)過規(guī)則免疫后的種豬所生仔豬留作種用的仔豬在100日齡時作一次偽狂犬病普通血清學檢查，凡是抗體陰性者留作種用。對檢出的抗體陽性者作進一步的鑒別血清學檢查，對野毒感染陰性者同樣可用作種用，對強毒感染陽性者淘汰作為肥豬用，不能作為種豬用。對偽狂犬病抗體檢測陰性豬和野毒感染陰性豬等留作種用的仔豬用偽狂犬病濃縮單基因缺失滅活疫苗在100-110日齡接種一次，再到130-140日齡時加強免疫一次，以后按種豬的免疫程序每半年注射一次濃縮基因缺失滅活疫苗。同時每半年抽血樣進行一次鑒別血清學檢查，如發(fā)現(xiàn)野毒感染血清學陽性豬應及時隔離淘汰處理，以保持豬群無野毒感染，安全健康。
    5．6．1．4 對種用仔豬經(jīng)上述檢測，發(fā)現(xiàn)和分群隔離的野毒感染血清學陽性豬，立即注射滅活疫苗或基因缺失疫苗，最好是間隔4-6周注射2次，作為育肥豬飼養(yǎng)出欄。
    5．6．1．5 以上是在種豬群和種豬場進行偽狂犬病根除計劃的最佳方案。但考慮到我國養(yǎng)豬業(yè)的實際情況，一般豬場的養(yǎng)豬數(shù)量都已達到滿負荷的程度，豬舍和欄圈都比較緊張，對采取隔離分群有困難時，此種情況在沒有注射過疫苗的場先進行抗體檢測，確定有無感染存在，或是已經(jīng)注苗的場先將疫苗更換為濃縮單基因缺失滅活疫苗，再按前述的種豬及種豬場的免疫程序進行免疫。即抗體陰性豬首先作兩次基礎免疫，其間隔4-6周。然后每半年注射一次。如是野毒感染陽性豬群先作兩次基礎免疫后，再每4個月免疫一次，直至野毒感染抗體消失后，改為每半年一次。對已經(jīng)免疫過的豬群，則將疫苗更換成濃縮單基因缺失疫苗就行。然后按每半年抽血檢查一次。逐步縮小野毒感染的豬。這就是要比前述的采取分群隔離的措施達到凈化根除的目的要慢一些。
    5.6．1．6 對正在爆發(fā)偽狂犬病的豬場，種豬除進行兩次間隔4-6周基礎免疫外：種豬應在配種前注射一次，產前一個月加強免疫一次，均使用濃縮的單基因缺失的滅活疫苗。育肥豬用基因缺失弱毒疫苗進行兩次免疫。如仔豬發(fā)病用基因缺失疫苗緊急預防接種效果顯著。
    5．6．1.7 對新引進的種豬，要進行嚴格的檢疫，最好是要引進偽狂犬病抗體陰性豬或野毒感染抗體陰性豬，引到本場后，隔離飼養(yǎng)2個月，抽血樣檢查，抗體或野毒感染抗體為陰性者再與本場其它豬混群飼養(yǎng)。與其它豬群一樣，每半年作一次檢查。對于檢測出的野毒感染陽性豬要嚴格隔離，注射疫苗后，看情況能否作為種用，最好是將其淘汰不作種豬用。
    5.6．1．8 豬場要進行定期嚴格的消毒管理措施，最好是使用2%的氫氧化鈉（燒鹼）溶液或酚類消毒劑。豬舍、欄圈的清洗消毒，最要選擇氣候干燥和具有陽光照射下進行效果最佳。
5.6．1．9豬場嚴格禁止養(yǎng)狗、養(yǎng)貓、養(yǎng)雞，嚴格禁止狗、貓、雞和其它鳥類及動物進入豬舍。在豬場內要進行嚴格的滅鼠措施。消滅鼠類帶毒傳播疾病的危險。
5.6．1．10 要嚴格禁止人員和車輛等進入豬場，避免因人員和機械帶毒傳播疾病。
5．6．1．11在5公里方圓范圍內的相關豬場都必須統(tǒng)一采取同樣措施，因為偽狂犬病可在方圓5公里范圍內通過空氣傳播。
5．6．2育肥豬場偽狂犬病的根除計劃
上述種豬及種豬場的根除計劃措施完全適用于育肥豬場。育肥豬場種豬的偽狂犬病根除計劃措施與上述的種豬的根除計劃措施是完全一樣的。不同的只是在育肥豬方面，首先應對育肥豬群在70-100日齡的豬進行偽狂犬病血清學檢測，如發(fā)現(xiàn)有抗體陽性或野毒抗體陽性豬，所有的豬只都應注射疫苗。經(jīng)過規(guī)則免疫的種豬所生的仔豬，一般在60-70日齡注射一次基因缺失弱毒疫苗，間隔4-6周后再加強免疫一次。一般情況下在育肥豬場種豬育肥豬都應進行免疫。如只免疫種豬，大量的育肥感染病毒，在那里大量增殖病毒并向豬舍內排毒，直接威脅著種豬，因而種豬的免疫效果受到影響。此外育肥豬感染偽狂犬病毒后，雖不表現(xiàn)出典型的臨床癥狀和發(fā)生死亡，但可明顯的引起呼吸道癥狀，增重遲緩，飼料報酬降低，推遲出欄，其間接經(jīng)濟損失也是巨大的。經(jīng)實驗室的動物實驗和臨床上的觀察證實，感染了偽狂犬病毒的育肥豬群，注射疫苗與不注苗其增重相差約1/3。即注射疫苗豬比未注射疫苗豬在同等飼養(yǎng)條件下多增1/3，可見育肥豬應該進行偽狂犬病免疫的重要性。
6．無病標準：
首先要配合我國無特定病原區(qū)的建設的工作計劃，劃定一定的區(qū)域，對區(qū)域內的豬場進行血清學調查，了解和掌握偽狂犬病豬場和豬群陽性感染率的情況，制定偽狂犬病的免疫預防計劃與措施。按照前述偽狂犬病的根除計劃方案，實施強制性免疫計劃，配合強有力和有效的區(qū)分強弱毒感染的監(jiān)測，建立健康群，通過有計劃的免疫，使豬群偽狂犬病強毒感染率降到10%左右時，就可以采取捕殺或淘汰野毒血清學陽性豬，建立健康豬群。最后要在一定的區(qū)域范圍內或甚至是全國范圍內，經(jīng)過較長時間的監(jiān)測沒有再發(fā)現(xiàn)野毒感染豬。在穩(wěn)定控制標準的基礎上，停止注苗后，連續(xù)3年無臨床病例出現(xiàn)，由國家指定的專門實驗室到該區(qū)域內的豬場隨機抽血樣檢測偽狂犬病毒抗體為陰性，沒有陽性豬出現(xiàn)，才算消滅或根除了偽狂犬病。

馮春偉

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