如何做藥敏試驗

minlingang

   藥敏試驗根據(jù)美國臨床標準委員會（NCCLS）推薦的K-B瓊脂法進行，藥敏紙片選擇中國生物制品鑒定所藥敏紙片，試驗所選擇藥物必須包括下列抗生素：氨芐西林（AMP），阿莫西林/克拉維酸（AMC），頭孢噻吩（CFT），頭孢噻肟（CTX），慶大霉素（GEN），萘啶酸（NAL），環(huán)丙沙星（CIP），四環(huán)素（TBT），利福平（RFA），復方新諾明（SMZ）。藥敏結果判定標準按照NCCLs手冊2005版。

1. 操作方法：

（1）將待檢菌接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)16～18小時，然后挑取普通營養(yǎng)瓊脂平板上的純培養(yǎng)菌落，懸于3ml生理鹽水中，混勻后與菌液比濁管比濁。以有黑字的白紙為背景，調整濁度與比濁管（0.5麥氏單位）相同。

（2）用無菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上擠壓去掉多余菌液。用棉拭子涂布整個M-H培養(yǎng)基表面，反復幾次，每次將平板旋轉60度，最后沿周邊繞兩圈，保證涂均勻。

（3）待平板上的水分被瓊脂完全吸收后再貼紙片。用無菌鑷子取藥敏紙片貼在平板表面，紙片一貼就不可再拿起。每個平板貼5張紙片，每張紙片間距不少于24mm，紙片中心距平皿邊緣不少于15mm。在菌接種后15分鐘內貼完紙片。

（4）將平板反轉，孵育18～24小時后取出，用游標卡尺測量抑菌圈直徑，從平板背面測量最接近的整數(shù)毫米數(shù)并記錄（附表6）。抑菌環(huán)的邊緣以肉眼見不到細菌明顯生長為限。有的菌株可出現(xiàn)蔓延生長，進入抑菌環(huán)，磺胺藥在抑菌環(huán)內出現(xiàn)輕微生長，這些都不作為抑菌環(huán)的邊緣。結果判斷依據(jù)鑒定所藥敏紙片判定標準。

（5）每次藥敏試驗必須用ATCC 25922大腸桿菌做質控。只有當質控菌株的抑菌圈直徑在允許范圍內測試菌株的結果才可以報告。ATCC 25922的結果必須與測試菌株同時記錄和報告在附表6中。

0.5麥氏比濁管配制方法：

0.048M BaCL2 (1.17% W/V BaCL2 . 2H2O) 0.5ml

0.36N H2SO4 (1%, V/V) 99.5ml

將二液混合，置螺口試管中，放室溫暗處保存。用前混勻。有效期為6個月。

2. 注意事項：

(1) 制備MH瓊脂平板應用直徑90mm平皿，在水平的實驗臺上傾注。瓊脂厚為4±0.5mm（約25-30ml培養(yǎng)基），瓊脂凝固后塑料包裝放4℃保存，在5 日內用完，使用前應在37℃培養(yǎng)箱烤干平皿表面水滴。傾注平皿前應用pH計測pH值是否正確(pH應為7.3)。pH過低會導致氨基糖苷類，大環(huán)內酯類失效，而青霉素活力增強。

(2) 藥敏紙片長期儲存應于－20℃，日常使用的小量紙片可放在4℃，但應至于含干燥劑的密封容器內。使用時從低溫取出后,放置平衡到室溫后才可打開，用完后應立即將紙片放回冰箱內的密封容器內。
過期紙片不能使用, 應棄去。

(3) 不穩(wěn)定藥物如亞胺培南, 頭孢克洛, 克拉維酸復合藥等, 應冷凍保存, 最好在-40 ℃以下。

(4) 保證質控菌株不變異的簡便方法，將新得到的凍干菌株接種含血的M-H平板復活。然后每株細菌接種10支高層瓊脂管，放置冰箱保存。每月取出一支，傳出細菌供常規(guī)用。待用剩至最后一支，可傳種在M-H平板上，再接種一批高層瓊脂管備用。如此可保證原始菌種永不接觸抗菌素。

3.質量控制

質量控制方法 是用與常規(guī)實驗相同的操作方法，測定質控菌株的抑菌環(huán)。應使用新鮮傳代的菌種。接種菌液的涂布方法等均同常規(guī)操作，測定的抗菌素種類也應與常規(guī)測定的種類相同。

哨鴿

不錯，學習了，不過藥敏試紙的制作不是很詳細哦

哨鴿 于 2009-8-5 08:55 補充以下內容

不錯，學習了，不過藥敏試紙的制作不是很詳細哦

向日葵123

藥敏紙片可以買啊。有很多商品化的

tianxiangdi

哈哈，正好在做此類實驗
藥敏紙片的制作
　　紙片法中使用的藥敏紙片目前市場上已有較多廠家的產(chǎn)品銷售。但也可根據(jù)需要自制，具體自制的方法如下：
　　取質量較好的定性濾紙，用普通的打孔器打成直徑6mm的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔干燥的小瓶或小平皿中，以單層牛皮紙扎口或包扎。經(jīng)15磅15-20分鐘高壓滅菌后，置于37℃溫箱或烘箱中數(shù)天，使完全干燥。按每張紙片飽和吸水量為0.01ml計，在上述含有50片紙片的小瓶內加入藥液0.5ml，不時翻動，使濾紙片將藥液均勻吸凈，一般浸泡30分鐘即可。同時在記錄藥物名稱，于37℃溫箱過夜。在溫箱或烘箱中的時間不宜過長，以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素宜在低溫下真空干燥。干燥后即密封。切勿受潮，置陰暗干燥處或家用冰箱中保存，有效期4-6個月。