有關(guān)大腸桿菌工業(yè)發(fā)酵

mondl

有誰有大腸桿菌工業(yè)發(fā)酵的資料的

轉(zhuǎn)基因大腸桿菌，通過基因工程手段，設(shè)計(jì)一段核苷酸序列移植入大腸桿菌，用于生產(chǎn)所需的目的蛋白 。想了解下有誰做過這方面研究的，能不能分享下。

或者發(fā)到我郵箱：mondl@163.com

謝謝了

mondl 于 2009-9-12 09:55 補(bǔ)充以下內(nèi)容

希望知道的朋友幫下忙，或者開貼出售，不過窮人，不要太貴:haoa:

孤世才子

期待高手回答，，，，，，，，，，

mondl

目的產(chǎn)品用于飼料方面，不是醫(yī)藥、食品，相對要求要松點(diǎn)，望達(dá)人不吝賜教

葉赫娜蘭.孤城

我們實(shí)驗(yàn)室的課題啊。（微生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國家糖工程技術(shù)研究中心）在國內(nèi)差不多是專長。

你說那一塊啊，是菌株構(gòu)建還是發(fā)酵過程優(yōu)化??？

mondl

發(fā)酵過程優(yōu)化吧

菌種是別人提供的，沒接觸過這個(gè)，要寫相關(guān)內(nèi)容不知道如何入手。。。。

提供者是實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，說實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵跟工業(yè)發(fā)酵相差比較大，他對工業(yè)發(fā)酵也不了解

mondl

引用自葉赫娜蘭-孤城 發(fā)表于 2009-9-18 10:58的內(nèi)容
我們實(shí)驗(yàn)室的課題啊。（微生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國家糖工程技術(shù)研究中心）在國內(nèi)差不多是專長。

你說那一塊啊，是菌株構(gòu)建還是發(fā)酵過程優(yōu)化??？

現(xiàn)在的轉(zhuǎn)基因菌種是人為移植一段編寫的核苷酸序列段，設(shè)計(jì)核苷酸序列在菌體中表現(xiàn)為蛋白質(zhì)（目標(biāo)小肽不斷重復(fù)），在體內(nèi)蛋白酶酶解為目標(biāo)小肽.
不知道這個(gè)發(fā)酵過程怎么控制的好

煩李博士幫幫忙了

葉赫娜蘭.孤城

1,菌株構(gòu)建好沒有，目前表達(dá)量多少？可以進(jìn)入優(yōu)化程序了嗎？
2，菌株穩(wěn)定性如何？使用整合到基因組還是質(zhì)粒？
3，誘導(dǎo)機(jī)制？
4，用大腸桿菌？是包涵體嗎？如不是，似乎用酵母表達(dá)更合理些。
5，這個(gè)短肽是什么？

望認(rèn)真回答一下，我看能幫您些什么。

mondl

引用自葉赫娜蘭-孤城 發(fā)表于 2009-9-21 08:48的內(nèi)容
1,菌株構(gòu)建好沒有，目前表達(dá)量多少？可以進(jìn)入優(yōu)化程序了嗎？
2，菌株穩(wěn)定性如何？使用整合到基因組還是質(zhì)粒？
3，誘導(dǎo)機(jī)制？
4，用大腸桿菌？是包涵體嗎？如不是，似乎用酵母表達(dá)更合理些。
5，這個(gè)短肽是什么？

1. 菌株構(gòu)建好了的，目前實(shí)驗(yàn)室表達(dá)量是12g/L。目的蛋白占總蛋白的40%左右。
2. 實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵菌株穩(wěn)定性達(dá)到要求，Gn多聚體核苷酸序列是克隆到pET2a質(zhì)粒上的。
3. 這個(gè)不懂。。。。。原文寫下來吧：將pR-12Gn多聚體核苷酸序列克隆到pET32a質(zhì)粒上，獲得原核表達(dá)載體pET-12Gn，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3），經(jīng)陽性克隆檢測并測序證明序列正確后，在IPTG誘導(dǎo)下進(jìn)行蛋白表達(dá)。
4. 這個(gè)我也不是很清楚，是別人實(shí)驗(yàn)室提供的數(shù)據(jù)。。。。他們貌似選過不少菌種，最后選擇大腸桿菌做母體。（根據(jù)大腸桿菌偏愛合成含特異胰蛋白酶和胃蛋白酶酶切點(diǎn)的Gly-Gln二肽核苷酸序列Gn，并克隆至pRSET A質(zhì)粒中，采用串聯(lián)重復(fù)策略獲得pR-12Gn重組質(zhì)粒。）
5. 這個(gè)短肽是Gly-Gln二肽，不是直接表達(dá)，在菌體獲取聚合蛋白，經(jīng)酶切后獲取小肽。

葉赫娜蘭.孤城

這個(gè)水平（12G）可以轉(zhuǎn)入發(fā)酵了。想做到什么水平呢？

是發(fā)文章的水平還是工業(yè)水平。如是前者，要有代謝流分析和比較時(shí)髦點(diǎn)的算法----也就是先做試驗(yàn)，自己做出明確目標(biāo)后，把算法湊上----就行了。
如是后者，則要傳統(tǒng)分析結(jié)合代謝流分析，選擇工藝路線等等一步一步往下走。

不管怎樣，要做N批發(fā)酵，必須要有比較先進(jìn)的發(fā)酵罐。

mondl

這個(gè)按照你的經(jīng)驗(yàn)，理論上用什么類型的發(fā)酵罐跟按照什么樣的發(fā)酵流程比較合理？

主要作用是在于寫文章，但是沒接觸過工業(yè)發(fā)酵，對這方面一竅不通。。。實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵跟工業(yè)發(fā)酵相差也比較大，可比性不高。。。。