生殖激素在犬繁殖上的應(yīng)用

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生殖激素在犬繁殖上的應(yīng)用

1．母犬不育癥

1.5歲以上或以往能正常發(fā)情交配的母犬，在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)(10～24個(gè)月)不見發(fā)情，或發(fā)情不正常且屢配不孕的，均可認(rèn)為是不育癥。對(duì)于這樣的母犬可用孕馬血清、絨毛膜促性腺激素進(jìn)行治療。用量：血促性素為2OO單位／次，皮下或肌肉注射，1日1次，發(fā)情后肌肉注射絨促性素300單位。另外，對(duì)于卵巢機(jī)能不全或持久黃體存在的乏情犬，肌注FSH 20-50單位，每天一次，連用2-3次，也可誘導(dǎo)發(fā)情，此外，應(yīng)改善飼養(yǎng)管理?xiàng)l件。如仍不能交配受精，則不應(yīng)作種用。

2。公犬不育癥

    公犬不育癥主要表現(xiàn)公犬無性欲，見發(fā)情母犬陰莖也不能勃起 (陽萎)，或勃起后也不射精，檢查精液品質(zhì)不良。對(duì)于這樣的公犬應(yīng)改善飼養(yǎng)管理?xiàng)l件，給以足夠的營養(yǎng)物質(zhì)，以增強(qiáng)體質(zhì)。要加強(qiáng)體力鍛煉，配種要適度，防止過多或過少。同時(shí)配合激素治療，可肌肉注射PMSG或HCG，50-250單位，也可肌肉注射丙酸睪丸素(丙酸睪丸酮)20～50毫克／次。


2、不清楚半衰期，延長(zhǎng)用藥時(shí)間。有一牧羊犬，在發(fā)情季節(jié)乏情，獸醫(yī)用生殖激素誘導(dǎo)發(fā)情，他選用 PMSG 每次 300IU ，每天一次，連用 7 天。


PMSG就是孕馬血清， 它的生理功能是促進(jìn)卵泡發(fā)育。臨床上常用來治療卵泡靜止或超數(shù)排卵。但是，它的半衰期長(zhǎng)， 5 ～ 7 天在血液中還有有效濃度，每個(gè)療程注射一次就行，不用每天注射。


3、注射時(shí)間不合理。有些獸醫(yī)治療排卵延遲，選用促排三號(hào)，不發(fā)情就注射，配種時(shí)卻不注了，達(dá)不到促排效果。促排三號(hào)是促黃體釋放激素 D —色氨酸類似物，它的生理功能是促進(jìn)卵泡進(jìn)一步成熟、排卵和促進(jìn)黃體的形成。正確的使用方法是配種前 4 小時(shí)或配種時(shí)注射。


4、治療不孕癥用雌二醇。雌二醇是一種雌激素，它的生理功能是促使母畜發(fā)情表現(xiàn)和生殖道一系列生理變化，如母畜外陰紅腫，分泌物增加，鳴叫，接受爬垮等。它對(duì)卵泡發(fā)育不起作用，用它治療不孕癥沒有效果。



母犬交配全攻略


母犬發(fā)情周期介紹及注意事項(xiàng)

母犬的發(fā)情與配種是繁殖工作的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。只有正確地掌握母犬的性周期性變化和排卵時(shí)期，才能做到適時(shí)配種，提高受孕率和繁殖力。


一、母犬的性周期


在繁殖學(xué)上，根據(jù)犬的不同性生理變化，把犬性周期分為四個(gè)階段，即發(fā)情前期、發(fā)情期、發(fā)情后期和乏情期。


1、發(fā)情前期：從陰戶滴出帶有鮮血的粘液開始，到接受公犬爬跨，約8日左右（8.2土2.5日）。在這個(gè)時(shí)期，卵巢中上一個(gè)發(fā)情周期所產(chǎn)生的黃體逐漸萎縮，新的卵細(xì)胞開始生長(zhǎng)；子宮腺體略有生長(zhǎng)，生殖道輕微充血腫脹，腺體逐漸增加。其外部表現(xiàn)陰戶逐漸充血腫大，排尿次數(shù)增加而量少，尿液吸引公犬嗅聞。母犬興奮不安，喜歡接近公犬并與其戲耍，但無性欲表現(xiàn)（不接受公犬爬跨）。陰道涂片檢查時(shí)，主要有核上皮細(xì)胞和多量紅細(xì)胞和少量嗜中性白細(xì)胞。


2、發(fā)情期：從接受公犬爬跨開始到不接受爬跨為止，即從陰戶滴血的8－18日。母犬的外陰呈現(xiàn)充血腫脹狀態(tài)，隨著時(shí)間的增長(zhǎng)，充血腫脹程度逐漸加強(qiáng)，到發(fā)情盛期達(dá)到最高峰；子宮角和子宮體呈充血狀態(tài)，肌層收縮加強(qiáng)，腺體分泌活動(dòng)增加；子宮頸管道松弛；卵巢的卵泡發(fā)育很快，多數(shù)在發(fā)情中期排卵。從外部表現(xiàn)看，早期陰戶腫大，未期有所消退，滴出的帶血粘液減少，色由鮮紅變?yōu)榈t，母犬排出的氣味顯著誘惑公犬追逐和爬跨，當(dāng)公犬舔其陰戶或爬跨時(shí)，其四肢站立不動(dòng)，尾翹起并偏向一側(cè)，陰戶屢屢上提，出現(xiàn)性欲要求，交配易成攻。陰道涂片檢查時(shí)，主要為角質(zhì)化上皮細(xì)胞，缺乏嗜中性白細(xì)胞，紅細(xì)胞早期較多，末期減少。


3、發(fā)情后期：發(fā)情期過后，即進(jìn)人發(fā)情后期，約持續(xù)10日左右，母犬由發(fā)情的性欲激動(dòng)狀態(tài)逐漸轉(zhuǎn)入安靜狀態(tài)；子宮頸管道逐漸收縮，腺體分泌活動(dòng)漸減，粘液分泌量少而粘調(diào)；子宮內(nèi)膜逐漸增厚，表層上皮較高，子宮腺體逐漸發(fā)育，卵泡破裂，排卵后開始形成黃體。其外部表現(xiàn)為，陰戶滴出帶血粘液進(jìn)一步減少，色由淡紅變成暗紅或無色，腫大消退，多數(shù)犬不接受爬跨。陰道涂片檢查時(shí)，重新出現(xiàn)有核上皮細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞，缺乏紅細(xì)胞和角質(zhì)化細(xì)胞。


4、乏情期：指發(fā)情后期之后到下次發(fā)情前期之間，約6個(gè)月左右（7.0土1.5月）。此時(shí)母犬的性欲已完全停止，其精神狀態(tài)已完全恢復(fù)正常。在早期，子宮內(nèi)膜增厚，表層上皮呈高柱狀，子宮腺體高度發(fā)育，增大彎曲，腺體分泌活動(dòng)旺盛；在后期，增厚的子宮內(nèi)膜回縮，呈矮柱狀，腺體變小，分泌活動(dòng)停止；卵巢的黃體已發(fā)育完全，因此這個(gè)時(shí)期為黃體活動(dòng)時(shí)期。其外部表現(xiàn)為陰戶干癟，無帶血粘液滴出，不愿接近公犬，不容許公犬爬跨，公犬對(duì)其尿液和身體氣味不感興趣。陰道涂片檢查時(shí)，主要有核上皮細(xì)胞和少量嗜中性白細(xì)胞，缺乏紅細(xì)胞。


二、影響母犬性周期的因素


1、季節(jié)：犬有季節(jié)性繁殖的特點(diǎn)。一般情況下，母犬一年發(fā)情兩次，每次間隔約6個(gè)月左右。單養(yǎng)犬多數(shù)在春秋兩季發(fā)情（3－5月，9－11月）；群養(yǎng)犬（如比格犬）四季各階段都有發(fā)情，季節(jié)性不明顯，另外，據(jù) Marshall（1906）和 heape（1900）報(bào)道，在南美的野生犬和北極圈飼養(yǎng)的犬，也有一年發(fā)情一次的，季節(jié)性也不明顯。


2、年齡：由于年齡增大，老齡犬身體代謝機(jī)能下降，發(fā)情周期出現(xiàn)紊亂，往往使乏情期延長(zhǎng)，而發(fā)情前期和發(fā)情期縮短。


3、初情期：一般小型犬初情期來的早些（如比格犬初情期時(shí)間為6－7月齡），大型犬初情期晚些（如德國牧羊犬初情期則在8－10月齡）。初情的犬，發(fā)情前期和發(fā)情期都較長(zhǎng)。另外，營養(yǎng)和環(huán)境溫度也影響初情，營養(yǎng)水平高的較營養(yǎng)水平低的早，熱帶的較寒帶或溫帶的早。


4、營養(yǎng)：由于營養(yǎng)缺乏或過剩（肥胖），也會(huì)延長(zhǎng)乏情期或?qū)е庐惓０l(fā)情。


5、疾?。河捎诼殉材夷[、子宮蓄膿等生殖器官疾病往往導(dǎo)致乏情期時(shí)間過長(zhǎng)，或不發(fā)情。還有，上一窩產(chǎn)仔過多、連產(chǎn)幾窩等，母犬機(jī)體沒能很好地得到調(diào)整恢復(fù)，也會(huì)導(dǎo)致乏情期過長(zhǎng)。


6、母犬異常發(fā)情：（1）安靜發(fā)情。母犬缺乏發(fā)情表現(xiàn)，但其卵巢的卵泡仍發(fā)育成熟而排卵。一般當(dāng)連續(xù)兩次發(fā)情之間的間隔相當(dāng)于正常間隔的2倍或3倍時(shí)，即可懷疑中間有安靜發(fā)情。引起安靜發(fā)情的原因可能是由于有關(guān)生殖激素不平衡所致。例如當(dāng)雌激素分泌量不足時(shí)，發(fā)情表現(xiàn)就不明顯。促乳素分泌量不足或缺乏，引起黃體早期萎縮，于是孕酮分泌量不足，也會(huì)引起安靜發(fā)情，因?yàn)樵型置诹坎蛔?，就?huì)降低丘腦下部的中樞對(duì)外雌激素的敏感性。（2）短促發(fā)情。母犬的發(fā)情非常短，如不注意觀察，常易錯(cuò)過配種機(jī)會(huì)。其原因可能是由于發(fā)育著的卵泡很快成熟破裂而排卵，以致縮短了發(fā)情期，但也有可能就由于卵泡停止發(fā)育受阻而引起。（3）斷續(xù)發(fā)情。母犬發(fā)情時(shí)短時(shí)續(xù)，發(fā)情時(shí)間延續(xù)很長(zhǎng)（有的母犬發(fā)情30日還接交配并懷孕），這是因?yàn)槁雅萁惶姘l(fā)育所致，先發(fā)育的卵泡中途發(fā)生了退化，而另一新的卵泡又再發(fā)育，因此產(chǎn)生了斷續(xù)發(fā)情的現(xiàn)象。（4）孕后發(fā)情。母犬在懷孕時(shí)仍有發(fā)情的表現(xiàn)，稱為孕后發(fā)情或假發(fā)情。其主要原因就由于激素機(jī)能的混亂，亦即黃體分泌孕酮機(jī)能不足，而胎盤分泌雌激素的機(jī)能亢進(jìn)所致。


三、排卵時(shí)期與排卵數(shù)


1、排卵時(shí)期。母犬發(fā)情期，即從接受公犬交配開始，39－48小時(shí)，未排卵的犬仍占大多數(shù)，到90小時(shí)后，未排卵的犬就占少數(shù)了，排卵過程一直持續(xù)到96小時(shí)，才全部結(jié)束。左右卵巢在排卵時(shí)無時(shí)間差異?？傊?，母犬排卵時(shí)期從發(fā)情初期就開始，一般用以下兩點(diǎn)進(jìn)行判斷：①發(fā)情滴血第8－14日開始排卵（11.2土3.0天)，②從母犬接受公犬爬跨的第2日或第3日開始排卵。


2、排卵數(shù)。犬是多胎動(dòng)物，在一次發(fā)情中左右卵巢可排幾個(gè)到十幾個(gè)卵子（6.0士1.7）。小型犬排卵數(shù)少些，大型犬排卵數(shù)多些，老齡犬、過肥犬排卵數(shù)少些，青壯年犬排卵多些。犬的排卵數(shù)可根據(jù)出生胎兒數(shù)進(jìn)行推斷，也可通剖解檢查卵巢黃體位點(diǎn)，進(jìn)行準(zhǔn)確判斷。一般情況下，排卵數(shù)約89％受孕、妊娠，極少在受孕后胚胎死亡或融解。


四、適時(shí)配種


母犬發(fā)情后，要想做到適時(shí)配種，就必須掌握排卵受孕的最佳時(shí)期。據(jù)報(bào)道，在排卵前54－41小時(shí)交配，卵子受孕率為79％；在排卵開始到120小時(shí)之間交配，卵子受孕率為83％，這是卵子受精最佳時(shí)間。因此，交配時(shí)機(jī)不能過遲或過早。過遲卵子失去受精能力，過早精子失去活力或死亡。在母犬接受交配后2-4日間（即接受交配后60－108小時(shí)）交配，受孕率和產(chǎn)仔率最高。


五、母犬發(fā)情時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)


1、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，不能隨意散放，嚴(yán)防亂配，導(dǎo)致品種混雜。


2、加強(qiáng)衛(wèi)生消毒工作，保證周圍環(huán)境和陰戶衛(wèi)生，防止生殖道感染。


3、如果正在訓(xùn)練中的母犬發(fā)情，一般不宜再進(jìn)行訓(xùn)練，要停訓(xùn)半個(gè)月左右。因?yàn)榘l(fā)情的母犬興奮不安，尋求公犬，易產(chǎn)生外抑制，服從性也下降。


4、每日要認(rèn)真觀察記錄發(fā)情征候，準(zhǔn)確掌位發(fā)情進(jìn)入的階段，以便做到適時(shí)配種。


六、配種時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)


1、初情母犬一般不宜配種，因此時(shí)只是性成熟，身體未達(dá)到完全成熟，否則會(huì)導(dǎo)致自身生長(zhǎng)發(fā)育受阻，同時(shí)也會(huì)使繁殖力下降。


2、初配年齡。一般母犬為1.5歲（以第2次發(fā)情時(shí)交配為宜），公犬為2.0歲。


3、交配次數(shù)。母犬在一次發(fā)情中，配l－2次，兩次間隔以48小時(shí)為好。公犬一年配種40－6O次，一周之內(nèi)不超過2次為佳。


4、交配的時(shí)間與地點(diǎn)。南方夏季在早晚進(jìn)行，北方冬季應(yīng)上午或下午進(jìn)行。地點(diǎn)應(yīng)選擇清靜的環(huán)境，最好是公母犬都熟悉的地方，這對(duì)膽小的母犬尤為重要，避免人群影響交配。


5、性經(jīng)驗(yàn)。初配的母犬，由于缺乏性經(jīng)驗(yàn)，特別是從小單養(yǎng)的又沒接觸過公犬的，即使已到發(fā)情時(shí)，也不讓交配，這時(shí)只有主人輔助進(jìn)行（一手抓脖圈一手托下腹部）。初配的公犬，由于缺乏性經(jīng)驗(yàn)，一旦與母犬接觸，往往慌張猶豫，或不經(jīng)勃起即行爬跨，或出現(xiàn)不完全的性行為，經(jīng)過幾次才能進(jìn)行正常的性行為。為此應(yīng)溫和對(duì)待，否則容易造成性抑制。最好是先讓一頭有性經(jīng)驗(yàn)?zāi)?strong>犬與其配種。


6、公犬性抑制。營養(yǎng)和運(yùn)動(dòng)不足、性經(jīng)驗(yàn)缺乏、公犬連配數(shù)頭母犬等，都會(huì)導(dǎo)致公犬性抑制。除此之外，通常都是由于錯(cuò)誤或粗暴的管理導(dǎo)致性抑制。在采精時(shí)某些不正確的操作也會(huì)造成性抑制。因?yàn)樾砸种仆怯捎诮慌浠虿删珪r(shí)的恐懼、痛感和干擾引起的，結(jié)果還會(huì)變成陽萎。


7、配前性刺激。在交配前不久，通過感覺的性刺激對(duì)配種很有利。應(yīng)當(dāng)讓公母犬一塊游戲、追逐一段時(shí)間，適當(dāng)?shù)貭恐乒?strong>犬的性行為。幾次的空爬跨，不會(huì)因此引起性抑制，經(jīng)過5－10分鐘和4—6次這樣的起落的徒勞爬跨，最后反而能提高公犬的射精量和精液濃度，精子活力也良好。配前性刺激不但能提高射精的容量，改進(jìn)精子密度和活力，而且能引起釋放促黃體素，隨即提高血中膏酮的濃度。


8、三配三不配和一早一遲：有相同優(yōu)點(diǎn)、青年犬之間、公犬等級(jí)高于母犬的配；三不配：有相同或相反缺點(diǎn)的、老齡犬之間、公犬等級(jí)低于母犬的不配；一早一遲：老齡母犬宜早配（以滴血8-10日配），青年母犬宜遲配（以滴血12－14日配）。
母犬排卵時(shí)間的確定

母犬的發(fā)情周期及排卵時(shí)間與其他家畜有較大區(qū)別。尤其是排卵時(shí)間在發(fā)情期間的變化范圍較大，常常造成養(yǎng)犬愛好者難以確定其準(zhǔn)確的配種時(shí)間。下面就對(duì)母犬的發(fā)情周期及排卵時(shí)間的確定方法進(jìn)行簡(jiǎn)單的介紹。


1 性成熟及適宜的配種年齡


母犬的性成熟因品種、飼養(yǎng)管理?xiàng)l件及地理環(huán)境不同而異，一般來說，小型犬達(dá)到性成熟的年齡早，而大型犬達(dá)到性成熟的年齡要晚一些。達(dá)到性成熟的時(shí)間一般在6-13月齡的范圍內(nèi)，配種時(shí)間應(yīng)較性成熟的年齡晚些，在德國母犬配種的時(shí)間是由當(dāng)?shù)氐挠N協(xié)會(huì)決定的，通常在性成熟后的第2次發(fā)情時(shí)進(jìn)行配種。


2 發(fā)情周期


大多數(shù)母犬的發(fā)情周期持續(xù)6—8個(gè)月，有的母犬的發(fā)情周期持續(xù)12個(gè)月也被認(rèn)為是生理性的。發(fā)情周期分為發(fā)情前期、發(fā)情期、發(fā)情后期和間情期(休情期)。


從陰道內(nèi)開始排出血液至接受交配的時(shí)間為發(fā)情前期，持續(xù)7-13天。母犬接受交配的時(shí)間為發(fā)情期，持續(xù)時(shí)間為3-21天，平均為9天左右。


一般將黃體功能期視為發(fā)情后期。大多數(shù)母犬在發(fā)情后期的2(1—5)天內(nèi)仍然接受交配。發(fā)情后期的持續(xù)時(shí)間為9-12周，到這時(shí)黃體己完全溶解。但許多作者把發(fā)情后期并不定義為至黃體溶解時(shí)，而是至子宮內(nèi)分泌活動(dòng)完全停止時(shí)，此期持續(xù)時(shí)間為18-20周。發(fā)情后期至發(fā)情前期出現(xiàn)的一段時(shí)間為間情期，間情期內(nèi)母犬雖然沒有發(fā)情表現(xiàn)，但檢查發(fā)現(xiàn)，在間情期內(nèi)卵巢內(nèi)有3-4次的卵泡發(fā)育及退化過程，血液中也有輕度的雌激素水平升高，此期持續(xù)1-3個(gè)月，最終進(jìn)入發(fā)情前期。


卵泡發(fā)育期大約為10一12天，這期間雌激素水平不斷升高。雌激素通過血液循環(huán)到達(dá)靶器官，造成陰門、陰道、子宮和輸卵管的水腫及增生過程。黏膜上的血流量增多，子宮黏膜的血細(xì)胞滲出進(jìn)入子宮腔并與子宮的分泌物相混合。卵泡期的末期可在血液中測(cè)到最高濃度的17β雌二醇含量。伴隨著卵泡中雌激素合成的開始減少，在血液中出現(xiàn)由垂體前葉分泌的LH峰值，同時(shí)促卵泡素(FSH)也釋放(FSH分泌的調(diào)節(jié)機(jī)制在犬的發(fā)情周期中尚不能被完全解釋清楚)。LH峰值的出現(xiàn)與卵泡顆粒細(xì)胞黃體化的形成同時(shí)出現(xiàn)。大多數(shù)母犬在這個(gè)時(shí)候開始接受交配。LH峰值出現(xiàn)后的2天發(fā)生排卵。所排出的卵子2-3天后具有受精能力，伴隨著排卵過程開始形成黃體并不斷加強(qiáng)孕酮的產(chǎn)量。在孕酮的作用下，生殖道黏膜的腫脹情況開始減退，子宮血管壁開始變厚，進(jìn)入子宮內(nèi)分泌期。


表1 母犬發(fā)情各期的時(shí)間及主要特點(diǎn)


母大發(fā)情周期里激素的變化情況見圖1(略)。


3 最佳配種時(shí)間的確定方法


若能在母犬的排卵時(shí)間予以配種的話，則能收到最佳的妊娠效果。但遺憾的是到現(xiàn)在為止在臨床實(shí)踐中尚未找到一種非常可靠的確定母犬排卵時(shí)間的方法。不過用幾種方法進(jìn)行綜合判定常能取得較好的效果。間接確定母犬排卵時(shí)間的方法可通過觀察母犬陰道黏膜的顏色的變化。陰道細(xì)胞學(xué)檢查法及測(cè)孕酮的方法。若有好的B超診斷儀，亦可通過B超的方法觀察母犬卵巢的排卯時(shí)間。值得提出的是單靠某一種方法尚不能肯定說出母犬的確切的排卵時(shí)間。見表2略。


從表1可以看出，若僅以發(fā)情前期、發(fā)情期的表現(xiàn)去推斷母犬的排卵時(shí)間是很難確定的，因其變動(dòng)范圍很大。通過測(cè)陰道上皮的角質(zhì)化亦不甚理想。而觀察陰道黏膜細(xì)胞的浮冰樣堆積及測(cè)孕酮量顯得相對(duì)接近。但孕酮水平的開始升高，也有較難把握之處。因此，若想較難確的測(cè)定母犬的排卵時(shí)間，需要采取綜合判定的方法。


4 發(fā)僧檢查


4.1 陰道檢查 明道檢查法對(duì)于確定母犬的發(fā)情具有一定的說服力。此法一般在站立保定下進(jìn)行，需要大小適度的犬用開腔器及專用的光源。


首先用軟紙將陰門周圍擦干凈，然后用左手的大拇指和食指把陰門口輕輕的翻開，以保證開腔器的前端直接與陰道黏膜接觸。右手持已消毒完好的、與體溫接近的、澆上一些生理鹽水以保證潤滑的開腔器緩緩的插入陰道。起初開腔器的方向朝上，然后水平向前推。達(dá)到一定深度后，在專用光源的幫助下，觀察陰道黏膜顏色及分泌物等。


檢查結(jié)果與判定：判定母犬發(fā)情期的不同時(shí)期主要根據(jù)陰道黏膜的顏色變化、教膜的腫脹情況及分泌物的多少。判定標(biāo)難見表3略。


雌激素的增多是以上變化的主要原因。如陰道黏膜的水腫、增生及角質(zhì)化等。在間情期陰道黏膜上皮只有2-3層，故黏膜上血管明顯，呈玫瑰紅。而在發(fā)情期，由于雌激素的作用，陰道黏膜上皮達(dá)到15-20層，故陰道黏膜顏色變白及形成特有的浮冰樣堆積。


4.2 陰道細(xì)胞學(xué)檢查 陰道上皮的組織學(xué)構(gòu)建受雌激素的影響很大。在間情期陰道黏膜由2-3層非角質(zhì)化的扁平上反覆蓋。在雌激素的影響下細(xì)胞層增生且表層細(xì)胞角質(zhì)化，最大程度的細(xì)胞增生可以達(dá)到20層。角質(zhì)化的過程發(fā)生在發(fā)情期。從發(fā)情后期開始陰道上皮逐漸退化。陰道細(xì)胞學(xué)檢查的目的即在此基礎(chǔ)上達(dá)到認(rèn)識(shí)發(fā)情周期的時(shí)間、確定排卯時(shí)間及了解卵巢功能狀況等。


陰道細(xì)胞學(xué)檢查可在做陰道檢查的同時(shí)用無菌的棉拭子在陰道深處輕輕擦拭一下以采得陰道黏膜上皮(陰道前庭處的陰道黏膜上皮受雌激素的影響不大，故要在陰道深處采樣)，然后在載玻片上輕輕的滾一下。用帕帕尼科方法染色。但此法比較復(fù)雜，需要較多時(shí)間。目前德國漢諾威獸醫(yī)大學(xué)繁殖醫(yī)學(xué)院使用的是一種工廠化生產(chǎn)的專用染色劑，染色時(shí)非常方便，且效果非常好但其詳細(xì)成分不清。陰道黏膜上皮亦可用姬姆薩方法染色、陰道細(xì)胞染色的判定標(biāo)難主要是根據(jù)細(xì)胞的大小、形狀、細(xì)胞核與細(xì)胞漿成分的比例及核內(nèi)物質(zhì)的存在與否。見表4略。


在間情期看到的是基底細(xì)胞或副基底細(xì)胞為主，這些細(xì)胞在發(fā)情前期消失，形成中間細(xì)胞和淺層細(xì)胞。除上皮細(xì)胞之外，在發(fā)情前期還有大量的紅細(xì)胞滲出并能觀察到少量的白細(xì)胞。


在發(fā)情前期向發(fā)情過渡時(shí)，淺層細(xì)胞增多，且逐漸的角質(zhì)化。在接近排卵時(shí)看到的幾乎都是角質(zhì)化的表層細(xì)胞(80％-90％)，這些細(xì)胞單個(gè)的平位于載玻片上。檢驗(yàn)證明，大約75％的母犬在最大角質(zhì)化程度后的第1天發(fā)生排卵。最大角質(zhì)化程度持續(xù)1-6天，平均2.6天。


在發(fā)情期的后期表層角質(zhì)層細(xì)胞幾天之內(nèi)逐漸脫落，陰道細(xì)胞抹片的角質(zhì)化細(xì)胞相互連接。在這個(gè)再生過程中陰道黏膜層也出現(xiàn)了白細(xì)胞，在發(fā)情后期的2-4天內(nèi)陰道抹片上可見到大量的白細(xì)胞，同時(shí)重新出現(xiàn)深層細(xì)胞。


在發(fā)情后期的早期做陰道細(xì)胞抹片間或可見到泡沫細(xì)胞(空泡細(xì)胞)及發(fā)情后期細(xì)胞(限制性基底細(xì)胞，其細(xì)胞漿中含有中性粒細(xì)胞)。后一種細(xì)胞為發(fā)情后期的典型特征。但在陰道炎時(shí)也有類似的現(xiàn)象。個(gè)別母犬在陰道黏膜的再生過程中常伴有大量炎性細(xì)胞的產(chǎn)生，引起膿性細(xì)胞的排出，此點(diǎn)要與子宮疾病區(qū)別開來。發(fā)情周期中陰道細(xì)胞抹片不同細(xì)胞的分布情況，見表5略。


4.3 孕圍測(cè)定 到目前為止確定母犬排卵時(shí)間的范圍最可靠的方法是測(cè)定孕酮。因?yàn)樵型诎l(fā)情前期即將結(jié)束時(shí)開始升高，一般在達(dá)到5ng/ml時(shí)即可排卵。臨床實(shí)踐中通常這樣處理：母犬動(dòng)情之后(開始進(jìn)入了發(fā)情前期)可每2天進(jìn)行一次陰道黏膜及陰道細(xì)胞學(xué)檢查，只要陰道細(xì)胞角質(zhì)化達(dá)到了50％，即可采血進(jìn)行孕酮測(cè)定孕圍量達(dá)到4-5ng/ml時(shí)，即可對(duì)母犬配種。發(fā)情周期中孕酮濃度的變化，見表6略。


4.4 B超 B型超聲診斷技術(shù)亦可用于母犬的排卵鑒定。但對(duì)B超儀器的質(zhì)量要求及操作人員的技術(shù)要求均很高，在德國這種方法已經(jīng)作為一種排卵時(shí)間確定的重要輔助手段。

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