綿羊肺腺瘤病特異性PCR及套式PCR診斷方法的建立

junrluo

綿羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis, OPA )又名“驅(qū)趕病”（Jaagsiekte），是引起綿羊肺臟腫瘤的一種接觸性傳染病，也發(fā)生于山羊。主要病征為患羊咳嗽、呼吸困難、消瘦、大量漿液性鼻漏、Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞和無(wú)纖毛細(xì)支氣管上皮細(xì)胞腫瘤性增生[1,2,3]。OPA 與人的細(xì)支氣管-肺泡癌( bronchiolo-alveolar carcinoma, BAC) 在臨床癥狀、病理組織學(xué)特征及超微病變方面極為相似，為人類這一常見(jiàn)癌癥提供了研究模型[4]。
     本病1825年首次發(fā)現(xiàn)于南非。綿羊感染率40％～80％，發(fā)病率2％～30％，出現(xiàn)明顯臨床癥狀的羊病死率為100%[5]。1958年鄧普輝教授首次報(bào)道了我國(guó)屠宰羊群中的11個(gè)OPA病例[6]，以后，新疆、內(nèi)蒙古、青海等省區(qū)陸續(xù)有本病的報(bào)道[7]。現(xiàn)在，多數(shù)養(yǎng)羊業(yè)發(fā)達(dá)的國(guó)家和地區(qū)都有該病的發(fā)生和流行，該病嚴(yán)重威脅和影響著世界各國(guó)養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展。
     綿羊肺腺瘤病病毒（Jaagsiekte retrovirus, JSRV）為β反轉(zhuǎn)錄病毒?；蚪M為線性單股正鏈RNA，全長(zhǎng)7.4kb，編碼相互重疊的gag、pro、pol、env基因[8]，JSRV感染羊后，形成整合有外源性前病毒DNA(exJSRV)的肺腫瘤細(xì)胞。有趣的是，健康羊基因組攜有15～20拷貝，與JSRV密切相關(guān)的內(nèi)源性病毒DNA（enJSRV）。enJSRV是幾百萬(wàn)年前，JSRV形成前病毒DNA整合入羊生殖細(xì)胞，在羊與病毒漫長(zhǎng)的共進(jìn)化過(guò)程中固定下來(lái)，隨宿主細(xì)胞基因組遺傳復(fù)制并發(fā)揮一定的生理功能[9]。健康羊體內(nèi)，enJSRV表達(dá)的蛋白與JSRV 病毒粒子的蛋白高度一致，能與JSRV的受體結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)性阻斷JSRV的感染，并導(dǎo)致免疫耐受，使得感染羊無(wú)針對(duì)JSRV的循環(huán)性抗體。然而，患羊肺組織﹑淋巴網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)及外周血單核細(xì)胞均有前病毒DNA及JSRV的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物[4]。目前，我國(guó)對(duì)本病依賴于常規(guī)病理學(xué)診斷方法，尚無(wú)快速、特異、靈敏的實(shí)驗(yàn)室診斷方法。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)病原或前病毒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，通過(guò)對(duì)比enJSRV與exJSRV的序列差異，設(shè)計(jì)了兩套引物，成功排除了高拷貝數(shù)enJSRV的干擾，在國(guó)內(nèi)首次建立了針對(duì)exJSRV長(zhǎng)末端重復(fù)序列（long terminal repeat, LTR）的特異性PCR及套式PCR診斷方法[10]，可用于不同條件下的診斷檢測(cè)，對(duì)我國(guó)綿羊肺腺瘤病的診斷、流行病學(xué)調(diào)查及監(jiān)控種羊的進(jìn)口具有重要價(jià)值。

guangyaoxinyu

太高科技了。