黃芪多糖提取及含量測定的研究試驗

農(nóng)夫

黃芪為豆科植物，是蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，性微溫、味甘，具有補氣固表、利尿托毒、排毒斂瘡、利水消腫、增強免疫的功能，主要藥理成分是黃芪多糖和黃芪甙。黃芪多糖在醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)臨床上研究應(yīng)用較為廣泛，可作為免疫促進劑或調(diào)節(jié)劑，同時具有抗病毒、抗腫瘤、抗衰老、抗應(yīng)激、抗氧化等作用，因此黃芪多糖的提取具有重要意義。

目前黃芪多糖的提取主要采用水提取和CaO提取兩種工藝，水提取分離工藝不成熟，效率較差，提取成本較高，嚴(yán)重影響了黃芪多糖的研究開發(fā)利用。李紅民等（2000）報道，用pH9~10的CaO水溶液提取黃芪多糖，其得率顯著提高，成本下降。筆者用水提取法和CaO溶液提取法進行黃芪多糖的提取并測定含量，以便從中篩選出效果較好的提取方法，為生產(chǎn)實踐提供參考。

一、材料與方法

（一）材料與試劑

黃芪根：購自甘肅省平?jīng)鍪心持兴幉拈T市部。

葡萄糖、苯酚、濃硫酸、95%乙醇、丙酮，均為分析純。

721分光光度計（四川分析儀器廠），TN型托盤式扭力天平（上海第二天平儀器廠），容量瓶，水浴鍋，干燥器，粉碎機等。

（二）方法

黃芪多糖的提取

水提取法采用蒸餾水煮沸提取；CaO溶液提取法采用pH9~10的CaO溶液煮沸提取，濃縮時調(diào)至pH6.5左右,以后兩種方法步驟相同。

1.稱取黃芪根1千克，去掉雜質(zhì)和泥土，粉碎成粉末。

2.黃芪根粉末中加6~7倍的蒸餾水（或CaO溶液），煮沸1.5小時，用4層紗布過濾，濾渣用同樣方法煮沸3次。

3.合并濾液，調(diào)pH至6.5左右，加熱濃縮至一定量。

4.將濃縮液以2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，上清液中加3倍量95%乙醇沉淀。

5.傾去上清液，沉淀物中再加入95%的乙醇至濃度為80%，靜置，傾出上清。

6.濾渣用丙酮洗滌2次，過濾。將濾渣放入干燥器中，－20℃冷凍真空干燥，即得到黃芪多糖。

黃芪多糖的含量測定

1.標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 取經(jīng)105℃干燥至恒重的葡萄糖100毫克，置100毫升容量瓶中加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取10毫升，置10毫升容量瓶中，加水至刻度，搖勻，配成0.1毫克/毫升的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 準(zhǔn)確吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1~0.6毫升共6份,分別置25毫升容量瓶中，加蒸餾水補充至2毫升，再加入5%苯酚溶液1.0毫升，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0毫升，搖勻，放置5.0毫升，置80℃水浴中加熱15分鐘，取出，迅速冷卻至室溫。另以2.0毫升蒸餾水同上平衡操作作為空白對照，在490納米波長處測定吸光度，并求出回歸方程。

3.黃芪多糖含量測定 取提取并經(jīng)105℃干燥至恒重的黃芪多糖 50毫克，置于50毫升容量瓶中，加蒸餾水溶解至刻度，搖勻，準(zhǔn)確吸取10毫升，置100毫升容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，配成0.1毫克/毫升的黃芪多糖溶液。

吸取上述溶液0.5毫升，置25.0毫升容量瓶中，加蒸餾水補充至2毫升，依法測定吸光度值，并代入回歸方程計算，求得黃芪多糖的相對含量。

二、結(jié)果與分析

1.黃芪多糖的物理性狀

提取的黃芪多糖為灰白色粉末，易溶解于水，溶液呈乳白色，無雜質(zhì)。

2.黃芪多糖的收率

表1 不同提取方法黃芪多糖收率

從表1可見，水提取法黃芪多糖收率為3.6%~4.0%，平均為3.8%；CaO溶液提取法黃芪多糖收率為5.9%~7.75%，平均為7.05%；CaO溶液提取法比水提取法平均提高黃芪多糖收率85.5%。，差異極顯著（p＜0.01）。

3.黃芪多糖含量測定結(jié) 經(jīng)計算得標(biāo)準(zhǔn)回歸方程為：C=0.21216A－6.37×10-3,r=0.997057。

水提取法黃芪多糖含量為65.2%~67.8%，平均為66.5%；CaO溶液法黃芪多糖含量為78.6%~85.0%，平均為82.1%；CaO溶液提取法比比水提取法平均提高黃芪多糖含量15.6個百分點，差異顯著（p＜0.05）。

三、小結(jié)

黃芪多糖屬于極性大分子化合物，主要由D-葡萄糖、Ｄ-半乳糖和Ｌ-阿拉伯糖組成。研究發(fā)現(xiàn)，多糖的生物活性與分子量、溶解度、粘度、一級結(jié)構(gòu)和高級結(jié)構(gòu)有關(guān)，因此多糖提取時應(yīng)根據(jù)其有效成份的不同來設(shè)計工藝路線。黃芪多糖作為黃芪纖維質(zhì)的組成部分，黃芪多糖提取收率取決于黃芪纖維質(zhì)的溶脹作用和溶解性，纖維在水中的溶脹作用和溶解性差，因此水提取法收率低。在堿性溶液中的溶脹作用和溶解性顯著增加，纖維之間的酯鍵易斷裂而發(fā)生剝皮反應(yīng)，使更多的多糖得以游離而被提取出來，從而提高多糖收率。因此黃芪多糖多采用不同溫度水和弱堿溶液提取，盡量避免在酸性條件下提取。

目前黃芪多糖的提取主要采用水提工藝，多糖收率極低，約為2.5%左右。倪艷等（1998）采用直接水煎煮法提取黃芪多糖，多糖的收率為2.0%。李紅民等（2000）分別采用水提取、CaO溶液提取和Na2CO3溶液提取法制備黃芪多糖粗提取物，結(jié)果CaO溶液提取收率（11.7%）是水提取收率（3.6%）的3.25倍，是Na2CO3溶液提取收率（5.7%）的2.05倍。本試驗中CaO溶液提取法比水提取法平均提高黃芪多糖收率85.5%，差異極顯著，表明提取黃芪多糖時用較弱的堿溶液，能夠提高多糖收率。

黃芪多糖粗提物含量高低也是評價提取工藝的重要方法，多糖含量越高，說明提取越完全。倪艷等（1998）研究表明，黃芪多糖含量隨著因素變化差別較小，水提取法黃芪多糖含量為37.54%。李紅民等（2000）測定的黃芪多糖含量為水提取工藝92.2%，CaO溶液工藝89.1%，Na2CO3溶液工藝88.0%。本研究中水提法黃芪多糖平均含量（66.5%）比倪艷等（1998）高，CaO溶液提取法黃芪多糖平均含量（82.1%）基本與李紅民等（2000）相近，采用CaO溶液提取法比水提取法平均提高黃芪多糖含量15.6個百分點，差異顯著。

黃芪多糖含量受許多因素影響，封士蘭等（1997）發(fā)現(xiàn)黃芪多糖含量與工藝流程中的乙醇濃度、藥液濃度及干燥方法有關(guān)。陳芳艷等（2004）發(fā)現(xiàn)不同提取時間、不同提取溫度和不同溶比對黃芪多糖含量有影響，認(rèn)為提取溫度為100℃，溶比為1:6，提取時間60分鐘時，所得的黃芪多糖含量最佳。本試驗未探討影響黃芪多糖含量高低的因素，但是通過比較CaO溶液提取法法和水提取法所得黃芪多糖含量高低，初步認(rèn)為CaO溶液法比直接水提取法獲得的黃芪多糖含量高。

因此，采用CaO溶液提取法提取黃芪多糖，不僅能夠提高黃芪多糖收率，而且能夠提高黃芪多糖含量，值得推廣應(yīng)用。

作者簡介:劉瑞生（1968-），男，碩士，助理研究員，從事畜禽疾病防治研究工作。聯(lián)系地址：甘肅省平?jīng)鍪嗅轻紪|路143號省畜牧獸醫(yī)研究所。郵編：744000

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