轉(zhuǎn)載霉形體

jufengs · 發(fā)表于 2010-1-10 11:46:31

第二十五章霉形體（Mycoplasmas）

第一節(jié)
概述

霉形體又稱支原體，是一類沒有細胞壁的原核細胞型微生物。細胞膜含固醇，能通過0.45um濾菌器；但呈二分裂繁殖，含DNA與RNA。霉形體是目前所知能在無生命培養(yǎng)基中繁殖的最小微生物。過去曾稱為類胸膜肺炎微生物(pleuropneumonia-likeorganism，PPLO)，由于它們能形成有分枝的長絲，故稱之為支原體。霉形體因其沒有細胞壁故歸屬于柔膜體綱（Mollicute)的支原體目(Mycoplasmatales)。下分3個科：支原體科(Mycoplasmataceae)；無膽甾原體科(Acholeplasma-taceae)，生長時不需要外源性膽固醇；螺原體科(Spiroplasmataceae)，生長至一定階段呈螺形。在支原體科中又分支原體(Mycoplasma)和脲原體(Ureaplama)2個屬。支原體屬現(xiàn)知有64個種，而脲原體屬僅2個種。

一、歷史

1898年法國人Nocard
Roux
從患有胸膜肺炎的病牛中分離到一種病原體。既不同于細菌也不同于病毒，將該病原體稱為胸膜肺炎微生物（Pleuropneumonia
organism，ppo）。后來許多學者從廣泛的宿種分離到相似的微生物，盡管它們不引起胸膜肺炎病變，但在形態(tài)、培養(yǎng)特性等方面均與ppo極相似。因此，就統(tǒng)稱為類胸膜肺炎微生物（Pleuropnemonia
Like
organisms，PPLO）。

1956．Edward
和Freundt
提出“霉形體”。

目前，在醫(yī)學上譯作“支原體”。在獸醫(yī)學上，譯為“霉形體”。

二、形態(tài)及染色

霉形體是原核細胞生物中最小的介于細菌和病毒之間的一類微生物，無細胞壁，具有可塑性，大小125-250nm，很少超過1.0μm。由于個體小，細胞膜又具有彈性，故往往能通過0.45μm濾膜，甚至還能通過比自己還小的濾器，G染色弱陰性，一般用姬姆薩染色（菌體呈淡紫色）。

霉形體最外層是細胞膜，由蛋白質(zhì)與脂質(zhì)組成的三層結(jié)構(gòu)。內(nèi)、外二層主要是蛋白質(zhì)，中間層為脂質(zhì)。在脂質(zhì)中固醇約占36%。凡能作用于固醇的物質(zhì)，如二性霉素B、皂素、毛地黃苷等能引起霉形體細胞膜的破壞而死亡。有的霉形體在細胞膜外還有一層由多聚糖構(gòu)成的莢膜，有毒性，是霉形體的一種致病因素。

霉形體以二分裂繁殖為主，也見出芽、分枝或由球體延伸成長絲，然后分節(jié)段成為許多球狀或短桿狀的顆粒。

有的霉形體有一種特殊的頂端結(jié)構(gòu)，能使霉形體粘附在宿主上皮細胞表面。這與霉形體在粘膜上的定植和致病有關(guān)。有些霉形體能運動，在霉形體內(nèi)有許多微絲組織成網(wǎng)，和運動有關(guān)。在前進方向微絲成束，向前突出。也有認為頂端結(jié)構(gòu)在表面上呈交替粘附和釋放，造成霉形體在表面滑動。

霉形體和其他原核生物一樣，基因組是一個環(huán)狀雙鏈DNA。分子量較小，只有大腸埃希菌的1/5，故其合成和代謝很有限。霉形體用普通染色不易著色，用Giemsa法染色著色很淺。革蘭染色陰性。

三、培養(yǎng)特性

1．幾種基質(zhì)

在人工培養(yǎng)基上能生長，霉形體的營養(yǎng)要求比一般細菌高。除無膽甾原體外，培養(yǎng)基中必須加入10%~20%人或動物血清。

血清主要用于提供固醇和其他長鏈脂肪酸，不但是細胞膜合成需要，且具穩(wěn)定細胞膜的作用。為抑制細菌生長，常加入青霉素、醋酸鉈、疊氮鈉等藥物。

霉形體一般在pH7.8~8.0間生長，低于7.0則死亡。但溶脲脲原體最適的pH為6.0~6.5，因在培養(yǎng)時溶脲脲原體分解尿素產(chǎn)氨，可使培養(yǎng)基pH升高。當培養(yǎng)基指示劑變色即需移種，否則將迅速死亡。霉形體一般為兼性厭氧，僅個別菌株專性厭氧。有氧條件生長良好，在5％CO2和95％N2的環(huán)境中，生長為佳。適宜溫度為36℃。霉形體生長緩慢，在含1.4%瓊脂的固體培養(yǎng)基上孵育2~3d（有的需要2周）后才長出低倍顯微鏡下可見的微小菌落（10-600um）。典型的菌落呈荷包蛋樣，核心較厚，向下長入培養(yǎng)基，周邊為一層薄薄的透明顆粒區(qū)。有的整個菌落呈顆粒狀。肺炎霉形體的菌落較大，直徑100~150μm。溶脲脲原體的菌落最小，僅10~40μm，故曾稱“T”株(tinystrain)。霉形體的菌落小，宜在低倍鏡下觀察。

液體培養(yǎng)基：成份要求復(fù)雜，且生長緩慢，一般都需要幾天，在液體培養(yǎng)基中霉形體的生長量較少，且個體小，一般不易見到混濁，只有小顆粒沉于管底或混或者根本不變混濁。溶脲脲原體在生長量最大時每ml不超過106~107個菌落形成單位（CFU），故液體清亮。霉形體在固體和液體培養(yǎng)基中生長達高峰后，若繼續(xù)培養(yǎng)，則很快死亡。在低溫下可延長存活時間。在液體培養(yǎng)基中生長時，只有加入一些基質(zhì)后，根據(jù)顏色變化來判斷有無霉形體生長。加入的基質(zhì)一般有葡萄糖、精氨酸等，加入0.002%酚紅作為指示劑（四氮唑中不加入）。

霉形體在不同基質(zhì)中的生長表現(xiàn)

基質(zhì) 指示劑培養(yǎng)基pH值顏色（培養(yǎng)基）霉形體生長后pH變化顏色變化

葡萄糖酚紅
7.8
紅
7.8-6.8
紅-----黃

精氨酸酚紅
7.0
微紅
7.0-7.8
微紅—紅

尿素酚紅
6.5
黃
6.5-7.4
黃-----紅

四氮唑無
7.6
無色
7.6-6.8
無色-----紅

（TTC）

（某些霉形體能還原培養(yǎng)基中的TTC，形成重氮化合物）

根據(jù)霉形體對基質(zhì)的要求不同而選用不同的培養(yǎng)基，一般一種霉形體只分解葡萄糖或Arg、尿素，尿原體只分解尿素，不分解其它基質(zhì)，但亦有分解葡萄糖，Arg或二者均不分解的。

2．菌落特點：在固體培養(yǎng)基上，長成油煎蛋狀或臍狀的菌落。中心生長點色暗，周邊生長點色淡，圓形，菌落很小，必須在顯微鏡下才能看清，一般為50-500um不等，尿原體菌落更少，10-200um。

中心生長點是怎樣形成的呢？

接種于瓊脂表面的霉形體進入瓊脂間隙，然后呈集團狀生長，一旦突出于瓊脂表面，則以較快的速度在瓊脂表面蔓延生長，成為中心生長點及周邊生長區(qū)。

四、抵抗力

由于無細胞壁，所以對青霉素有抵抗力，此外對醋酸鉈（1/2000-1/8000）有抵抗力，故常用青霉素、醋酸鉈為抑菌劑來分離霉形體。青霉素主要作用于G+菌，醋酸鉈主要作用于霉菌及一些芽胞菌。

本菌對泰樂菌素、林肯霉素、鏈霉素、氟哌酸等敏感。

對外界環(huán)境的抵抗力很弱，對滲透壓敏感。

五、分布及致病性

自然界分布極為廣泛，各種家畜、家禽、小動物、人類，陰溝污水，土壤等都存在有，其中許多能使人、畜禽致病。

常感染動物呼吸道、泌尿生殖道、乳腺、眼、腹膜、關(guān)節(jié)滑液囊膜等。主要營寄生生活，單獨感染癥狀輕微，當細菌或病毒等繼發(fā)感染或受外界不利因素的作用，引起疾病。

疾病特點是潛伏期長，呈慢性經(jīng)過，地方性流行。致病菌主要有豬肺炎霉形體，禽敗血霉形體、滑液囊霉形體，牛羊霉形體（牛肺疫、肺炎、關(guān)節(jié)炎、乳房炎）等。

如：人---原發(fā)性非典型肺炎（肺炎霉形體）

牛、山羊：傳染性胸膜肺炎豬：地方性肺炎（喘氣?。?/font>

雞：慢性呼吸道病（CRD）

植物中：也發(fā)現(xiàn)了大量的霉形體，如：柑桔的黃病、立枯病等以前認為是病毒，現(xiàn)已確診為是霉形體引起的，水稻黃銹病等。有些病原體已經(jīng)分離出，有的在電鏡下看到了霉形體顆粒，稱為類霉形體微生物“MLOS”（現(xiàn)已改稱為植原體）。

國內(nèi)已經(jīng)觀察到了許多“MLOS”，但尚未分離出霉形體。從牛瘤胃分離到一類霉形體，嚴格厭氧稱為厭氧原體，美國從自燃過的煤中分離到一類霉形體，能耐熱（56℃），耐低pH1-2，稱為熱原體。

六、分類

原核生物門軟皮體綱。1972，1979年頒布建議描述軟皮體綱內(nèi)新種的最低標準。1995，ISTM再次提出了最新的分類標準的建議。

原來軟皮體綱僅有1目。最近國際細菌系統(tǒng)分類委員會---軟皮體分類分會（ICSB-ISTM）對軟皮體綱內(nèi)的霉形體進行了重新分類。

[可參閱：修正的描述軟皮體綱內(nèi)新種的最低標準]。

目前軟皮體綱內(nèi)有4目，5科，8屬共158個成員。

熱原體（thermoplasma）分類位置未定。其分類命名如下：

霉形體目---霉形體科---霉形體屬、尿原體屬

昆蟲形體目---昆蟲形體科---昆蟲形體屬、中間形體屬

---螺旋形體科---螺旋形體屬

無膽甾形體目---無膽甾形體科---無膽甾形體屬

厭氧形體目---厭氧形體科---厭氧形體屬、無膽甾厭氧形體屬

分類的依據(jù)

1．綱：此綱微生物的主要特征---①缺乏細胞壁，②在固體培養(yǎng)基上形成油煎蛋狀菌落，③能通過200-450nm的細菌濾器，④基因組富含AT，⑤在適宜的條件下，無細胞壁的菌株不能回復(fù)為具有細胞壁的細菌。

2．目、科、屬的分類是依據(jù)形態(tài)學、宿主來源、最適生長溫度、培養(yǎng)特性及生化特性。

七、
細生物學

1．
細胞超微結(jié)構(gòu)

① 細胞膜
單位膜（單層細胞膜）

在結(jié)構(gòu)上與一般動物細胞膜差別不大，均為三層結(jié)構(gòu)，中層為脂質(zhì)層，又稱為電子透明層（因電子致病度稀?。?，形成兩暗夾一明的結(jié)構(gòu)。

化學成分：蛋白質(zhì)、脂、糖等，是細胞生物學研究生物膜的最好材料。

（原因：a膽固醇含量
b類胡蘿卜素）

② 遺傳物質(zhì)：核酸（RNA，DNA）游離于細胞質(zhì)或附于細胞膜上。加：DNA：雙股環(huán)狀?；蚪M大小為5×108道爾頓，所含的遺傳信息量要比細菌少得多，是大腸桿菌的1/5，是原核生物中最小的DNA.G+C含量為23%-30%左右，也比細菌低。

從進化論角度看，越原始，G+C%含量就越低。越進化，G+C%含量就越高。

③ 核糖體位于膜及細胞質(zhì)中。

④ 酶系統(tǒng)：ATP酶、脫氫酶。

2．繁殖：一般二等分裂----（出芽、絲狀斷裂等）。一般認為小球狀細胞是霉形體增殖的基礎(chǔ)，也稱為最小繁殖單體。

3．霉形體與其它原核生物的關(guān)系：

霉形體也是一種原核生物，但與細菌、立克次氏體、衣原體及其它微生物明顯不同。如：細菌，三層結(jié)構(gòu)的單位膜，70s核糖衣體，典型的環(huán)狀染色體。

但霉形體是目前已知能生活在無細胞培養(yǎng)基上的最小的微生物。由于缺乏細胞壁，就決定了它們特征的菌落形態(tài)，濾過性染色特征，生長能被特異性抗體抑制，對多種抗菌素有抵抗力等。

目前，有兩種假設(shè)來解釋霉形體與其它微生物的關(guān)系：一種假設(shè)是霉形體是一類真正的生物，是通過生物進化演變而來；另一種假設(shè)是霉形體來源于細菌，細菌脫去細胞壁后發(fā)生了不可逆變異。

霉形體與細菌L型形態(tài)極為相似，都沒有細胞壁，形體柔軟，形態(tài)多樣，都能通過細菌濾器，對作用于細胞壁的抗菌素有抵抗力。那么，如何區(qū)別霉形體與細菌L型？（從7個方面加以區(qū)別）。

霉形體與細菌L型的區(qū)別

形態(tài)	霉形體	細菌L型
形態(tài)	固有生命形態(tài)	細菌變異形態(tài)
無抗生素培養(yǎng)基	恒定、保持固有形態(tài)	可恢復(fù)原來細菌形態(tài)
對甾醇的需要	除不需甾醇科外，均需甾醇	一般不需要
DNA中G+C%	含量比細菌低	含量高，與細菌相同
對洋地黃皂苷的作用	敏感	有抵抗性
抗體抑制試驗	能抑制生長	無抑制作用
菌落	光亮、透明、中心深埋于培養(yǎng)基中	較暗，不透明，生長于基質(zhì)表面，易于刮割
狄乃氏菌落染色	明顯著色，不退色	著色淺、迅速退色

八、霉形體的分離和鑒定

培養(yǎng)方法：人工培養(yǎng)基，雞胚接種，攻毒(本動物和實驗動物)

1、取材：無菌采取呼吸道、泌尿生殖道材料或乳汁、關(guān)節(jié)液、淋

巴結(jié)等作檢查。

組織塊、分泌物、液體（乳汁、關(guān)節(jié)液）、淋巴結(jié)等立即接種：① 生長培養(yǎng)基。② 不能立即接種生長培養(yǎng)基，應(yīng)先接種運輸培養(yǎng)基（注：應(yīng)將液體培養(yǎng)基中的醋酸鉈去掉，因為醋酸鉈可以抑制尿原體生長）。

2、培養(yǎng)基：不同霉形體其成分不一樣。

（1）PPLO肉湯。

（2）血清：常用的是馬血清和豬血清，馬血清不滅活，豬血清滅活。

（3）酵母浸出汁或自溶物：提供促生長因子（主要是Vit B族—輔基、輔酶的主要成分。

（4）抑菌劑：青霉素1000u/ml
醋酸鉈1/4000

（5）基質(zhì)：葡萄糖、Arg、尿素或四氮唑。

（6）特殊需要：NAD（輔酶I）煙酰胺鳥嘌呤二核基酸。

3、pH 7.6-7.8

4、氣體及溫度、濕度

CO2，37℃（霉形體，尿原體），25℃（無膽甾原體）

5、霉形體在不同基質(zhì)中的生長表現(xiàn)（見前面相關(guān)內(nèi)容）

6、各種培養(yǎng)基形式

按基質(zhì)不同可分為：葡萄糖培養(yǎng)基
Arg培養(yǎng)基

尿素培養(yǎng)基四氮唑培養(yǎng)基

按作用不同可分：分離培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)基

保存培養(yǎng)基運輸培養(yǎng)基

按培養(yǎng)基形式不同：液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基

半固體培養(yǎng)基雙相培養(yǎng)基

7、幾種常用的培養(yǎng)基

①
馬丁肉湯（瓊脂）（牛、羊）

②
FM-4培養(yǎng)基（固體和液體）（禽類）

③
Goodwin
Frii`s 培養(yǎng)基（豬）

④Edward 培養(yǎng)基

⑤Hayflick培養(yǎng)基
⑥尿原體培養(yǎng)基

九、霉形體的鑒定主要是通過血清學及生化特性來鑒定。

按照國際細菌分類委員會霉形體分委會的規(guī)定，種的鑒定血清學方法包括生長抑制試驗（GI），代謝抑制試驗（MI）和表面免疫熒光法（epi-IMF）或瓊脂平板免疫熒光法。

1、生長抑制試驗在軟皮體綱新種的血清學特性鑒定中，生長抑制試驗是最有用的技術(shù)。

依據(jù)是加入抗血清的固體培養(yǎng)基可以抑制相應(yīng)霉形體的生長。

2、代謝抑制試驗：原理是基于抗血清能抑制相應(yīng)霉形體某些代謝活性（如：葡萄糖發(fā)酵、精氨酸水解或尿素分解等），其抑制活性是以阻止pH值變化來顯示的。

3、表面免疫熒光法（瓊脂平板免疫熒光法）：直接熒光法和間接熒光法。原理: 生長在瓊脂平板上的霉形體菌落表面菌體抗原或分與同源抗體

反應(yīng)，再與熒光標記的抗抗體結(jié)合后，在落射式熒光顯微鏡下可觀察到菌落熒光。

國內(nèi)畢丁仁（1986）首次用直接表面免疫熒光法對禽源霉形體進行了鑒定。

十、生化特性：根據(jù)對糖類分解能力，分為兩群。一群能分解多種糖類產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，稱發(fā)酵型；另一群不能分解糖，稱為非發(fā)酵型，但能利用精氨酸作為碳素和能量來源。

某些菌株在含血液的培養(yǎng)基中其菌落周圍可形成β型或α型溶血。

禽敗血霉形體、肺炎霉形體的菌落能吸附禽類紅細胞。

1、葡萄糖發(fā)酵：是在需氧和厭氧兩種培養(yǎng)條件下估價該霉形體分解葡萄糖產(chǎn)酸的能力。

2、精氨酸水解：產(chǎn)生氨而使pH值升高。

3、β-D-葡萄糖苷酶的檢測

各種無膽甾原體的β-D-葡萄糖苷酶水平可能是區(qū)分種的有效方法。

對該酶的檢測是以七葉苷或楊梅苷的水解為基礎(chǔ)。

第二節(jié)
豬的霉形體

從豬體內(nèi)已分離到近二十多種霉形體，有一部分是非致病性的，有些是致病性的。主要是豬肺炎霉形體、豬鼻霉形體、豬滑液霉形體、絮狀霉形體、顆粒無膽甾原體等，確認有病原性主要有三種（前三種）。

一、豬肺炎霉形體---引起喘氣?。ㄘi地方流行性肺炎）

在豬肺炎中起主要作用，屠宰豬，肺炎病高達30-60%，其中絕大多數(shù)是由于豬肺炎霉形體引起。主要引起的經(jīng)濟損失是飼料報酬降低，成本增高，因而每年養(yǎng)豬場所引起的損失是相當巨大的。

（一）形態(tài)

多形態(tài)，如環(huán)狀、燈泡狀、球狀、兩極桿菌狀等，0.2-0.4um左右，常有幾個集聚成團。

（二）培養(yǎng)

營養(yǎng)要求苛刻，兼性厭氧，對營養(yǎng)要求更高，因而一直未分離到病原，直到1965年國外才分離成功（主要是美國和丹麥的兩個實驗室?guī)缀跬瑫r分離到，我國是1973年由上海所最先分離到）。

1、肉湯：酵解葡萄糖產(chǎn)酸，用酚紅作指示劑pH從7.8-6.8，顏色由紅變黃，表明可能有霉形體生長，一般需3-5天，但接種量大時，可縮短變色時間，接種量少時變色延長，有時可能達20天以上。

2、固體培養(yǎng)基：在A26的液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)2-10d可長成直徑25-100um的菌落，但不呈“煎荷包蛋狀”。一般不顯示中心臍狀，表面呈顆粒狀。培養(yǎng)環(huán)境要濕潤，需要加5-10% CO2。

（三）抵抗力對外界環(huán)境的抵抗力較弱，存活一般不超過26h。病原體在-15℃可保存45d，在甘油中0℃可保存8個月。經(jīng)冷凍干燥的培養(yǎng)物在4℃可存活4年。

對常用化學消毒劑敏感。對泰樂菌素、螺旋霉素、林可霉素敏感；青霉素、鏈霉素、紅霉素和磺胺對其無效。

（四）致病性：能引起豬喘氣病（Enzootic Pneumoniae of pigs，Epp）。

僅感染豬，引起豬地方流行性肺炎。幼豬最為易感。不良的環(huán)境因素和繼發(fā)感染，常使病情加劇。

經(jīng)呼吸道直接接觸傳播，多呈慢性經(jīng)過，主要癥狀為咳嗽、喘氣、患病豬肺中含有很高量的感染粒子，一般每克肺含107個感染劑量，但在野外條件下，大多數(shù)感染豬呈不顯臨床癥狀的隱性感染。只是在屠宰時可見有心葉、尖葉、膈葉前沿呈膠樣變。病肺組織致病性很強，但一經(jīng)在培養(yǎng)基中傳代幾次（可能10次）即失去致病能力。但回歸豬后，毒力可返強（只需2-3代）。

（五）微生物學診斷

一般根據(jù)臨床癥狀、病理刻檢，結(jié)合流行病學即可確診。x光檢查具有重要診斷價值。必要時可進行微生物學診斷。

1、取材：病肺組織或呼吸道分泌物。

可以直接用病肺組織與健康組織交界處作觸片，然后用姬姆薩染色觀察菌體。

2、分離培養(yǎng)：要注意以下幾個問題。

① 所用器材、試劑必須與組織培養(yǎng)要求一樣。

② 用液體培養(yǎng)基分離（因為到目前為止，還沒有發(fā)現(xiàn)哪一個實驗是用固體培養(yǎng)基分離到這種霉形體）。

③ 要采取抑制豬鼻霉形體生長的措施。因為豬呼吸道的豬鼻霉形體很普通，也很容易生長。一旦混有豬鼻霉形體，由于快速生長將掩蓋豬肺炎霉形體的生長?？梢圆扇∫韵聨追N方法來抑制豬鼻霉形體的生長：

a：加豬鼻霉形體的抗血清。

b：向培養(yǎng)基中加抗菌素如硫酸卡那霉素或環(huán)絲氨酸，對豬鼻霉形體有選擇性的抑制作用。

c：將血清濃度提高至適合豬肺炎霉形體生長而不適合豬鼻霉形體生長的范圍（如27%）。

④ 即使有了合適的培養(yǎng)基及培養(yǎng)技術(shù)，也不是完全有把握能分離到豬肺炎霉形體。

分離方法：用Frii`s培養(yǎng)基或Goodwin氏培養(yǎng)基。

病料采集、處理、洗滌、碾碎、用培養(yǎng)液稀釋。10倍稀釋至10-5或10-8，37℃培養(yǎng)。也可能高稀釋度生長而低稀釋度反而不生長。

可能需要盲目傳代，傳代適應(yīng)后可接入固體培養(yǎng)基，分離到以后用GI、MI或IMF法進行鑒定。

3、動物接種：可用敏感的小豬接種，用病料經(jīng)呼吸道（肺、氣管、鼻腔）接種。

4、血清學診斷：間接血凝感染率從20-80%不等。

ELISA
檢查群體感染水平凈化

（六）免疫

病愈后有免疫力，但還可帶菌，即所謂傳染性免疫。體內(nèi)有菌時，可以抵抗再感染，一旦無菌則無抵抗力。

康復(fù)豬具有較堅強的免疫力。中監(jiān)所通過近20多年努力已制成了疫苗，保護率達70%以上。

（七）凈化（豬喘氣病的凈化）

凈化對象：1、并發(fā)其他細菌感染的喘氣病豬群；2、在SPF豬場中喘氣病豬群。

凈化措施：1、要選取大于10月齡的后備母豬，最好選擇經(jīng)產(chǎn)母豬且至少選取后10天不出現(xiàn)分娩者；2、全群每天投給相應(yīng)的抗生素，如將泰妙靈（6mg/kg體重）拌入飲水中，配制相當于100-200ppm的濃度；3、將所有的豬舍和豬欄徹底沖洗和消毒，在凈化期間，應(yīng)持續(xù)一年監(jiān)控。（臨床觀察、血清學檢測、初乳檢樣、接觸感染試驗）。

二、豬滑液霉形體

1、形態(tài)特征：與豬肺炎霉形體類似，0.3-0.6um，球狀。

2、培養(yǎng)：在肉湯培養(yǎng)中能形成顆粒狀沉淀，生長能被豬胃粘蛋白或酵母自溶物刺激，水解精氨酸，不酵解葡萄糖，固體培養(yǎng)基上呈現(xiàn)典型的油煎蛋狀外觀。

3、抵抗力：較弱，在蓋玻片上干燥后30天還存活。

4、病原性：主要是關(guān)節(jié)炎，3-6月齡易感，瘦肉豬更敏感，通常突然發(fā)病，急性跛行，持續(xù)3-10天，大多數(shù)都逐漸恢復(fù)，有些豬跛行漸重，不能站立，一般為非化膿性關(guān)節(jié)炎，涉及到跗關(guān)節(jié)、肩關(guān)節(jié)和肘關(guān)節(jié)，有些關(guān)節(jié)由于肌肉豐滿而未發(fā)現(xiàn)，感染關(guān)節(jié)內(nèi)有淡黃色液體，有些是纖維素性，滑膜增重。

流行特征：a. 年齡：3-6月齡；b. 瘦肉型豬；c. 伴隨引種而爆發(fā)；d.發(fā)病率高，可達30-80%不等；e. 典型的臨床特征是跛行，大多能恢復(fù)；f.成年豬隱性帶菌很普通。

5、微生物學診斷

分離: 急性期，即發(fā)病的前7天，從忠病關(guān)節(jié)中分離到豬滑液霉形體，在精氨酸肉湯中產(chǎn)堿，葡萄糖不產(chǎn)酸，能被豬胃粘蛋白刺激生長，菌落呈油煎蛋狀，血清學鑒定主要用GI、MI等。

三、絮狀霉形體

比豬肺炎霉形體更難分離，營養(yǎng)要求更高，自病變肺可分離到，但病原性很輕微，重要的是這種霉形體與豬肺炎霉形體有共同抗原。

四、豬鼻霉形體：仔豬呼吸道特別是鼻腔的正常寄居菌，也能從患喘氣病豬中分離到，但一般認為是繼發(fā)入侵者，能使葡萄糖培養(yǎng)基迅速產(chǎn)酸。

致病性：

1、正常情況下并不引起任何臨床癥狀，但有小部分幼豬可引起漿膜炎，病程約10-14天后恢復(fù)，死亡率低。但胸膜、心包膜和腹膜粘連以及可發(fā)生關(guān)節(jié)炎，實驗接種可引起多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎以及輕微的致肺炎作用。

2、世界范圍的組織細胞的污染問題。

五、顆粒無膽甾原體：為豬鼻腔的正常寄居菌，無病原性。

第三節(jié) 禽霉形體

目前，從禽類共分離到25種霉形體，其中霉形體21種，無膽甾原體3種，尿原體1種，最重要的有三個成員是：雞毒霉形體（MG）、滑液霉形體（M.S）和火雞霉形體（MM）。有的將此三種霉形體稱為致死性霉形體，此外還有衣阿華霉形體。

一、雞毒霉形體（Mycoplasma gallisepticum .MG）

又名禽敗血霉形體，是引起雞和火雞等多種禽類慢性呼吸道病(CRD)或火雞傳染性竇炎的病原。

（雞）臨床癥狀：以呼吸羅音、咳嗽、鼻漏為特征?；痣u：常見竇炎。

1、形態(tài)：球形，直徑250-500nm，G-，姬姆薩染色著色良好。

2、培養(yǎng)：需氧和兼性厭氧，對營養(yǎng)要求較高。

最常用的是修改的FM-4培養(yǎng)基（其中加有青霉素、醋酸鉈）最適pH：7.8，T：37-38℃。

在含馬血清或滅活雞、豬血清的培養(yǎng)基中生長良好，一般常用牛心浸出液培養(yǎng)基，用前加入10％-20％馬血清，為了抑制雜菌的生長需加入醋酸鉈(1：4000倍)和青霉素1000IU/mL，調(diào)pH 7.8-8.0。

在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)3-7天可觀察到菌落，呈典型油煎蛋狀外觀，能凝集雞和火雞的紅細胞。

在液體培養(yǎng)基中，37℃經(jīng)2-5d可呈現(xiàn)輕度渾濁，在固體培養(yǎng)基上經(jīng)3-10d，可形成圓形露滴樣小菌落，直徑約0.2-0.3mm。

在5-7d齡雞胚卵黃囊內(nèi)繁殖良好，并可使雞胚在接種后5-7d內(nèi)死亡。

3、生化：能發(fā)酵葡萄糖和麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。

4、抵抗力：不強。

對理化因素的抵抗力不強，一般的化學消毒劑均能將其殺滅。在肉湯培養(yǎng)物中-30℃能存活2-4年，凍干后在-4℃能存活7年。在卵黃中37℃能存活8周，在孵化的雞胚中45.6℃經(jīng)12-24h可被滅活。對青霉素和醋酸鉈有抵抗力，對泰樂菌素、紅霉素等敏感。

5、致病性：

本菌主要感染雞和火雞，引起CRD。病原體存在于病雞和帶菌雞的呼吸道、卵巢、輸卵管和公雞精液中，帶菌雞胚可垂直傳遞給后代。

應(yīng)激因子可協(xié)同作用，使病情惡化、癥狀明顯。大腸桿菌特別是O78、O2、Ol株繼發(fā)感染。

常見竇炎、氣管炎、氣囊炎。

成年雞群：最具有特征的自然發(fā)病癥狀是氣管羅音、流鼻涕、咳嗽和氣囊炎、食量減少、體重減輕。

產(chǎn)蛋雞群：可使產(chǎn)蛋率下降10-40%，種蛋孵化率下降10-21%，角膜結(jié)膜炎（Nunoya等報道）。

肉用仔雞群：癥狀通常比成年雞群中觀察到的明顯疾病爆發(fā)大多在4-8周齡。生長明顯受阻，體重減少38%，飼養(yǎng)期延長，飼料轉(zhuǎn)化率降低21%。

本病一年四季均可發(fā)生，以寒冷季節(jié)較為嚴重。

火雞感染主要表現(xiàn)為竇炎、竇部腫脹、少數(shù)病例不出現(xiàn)竇炎，以嚴重的下呼吸道癥狀為主。

其它的致病微生物（如NDV、IBV、E.coli等）與MG并發(fā)感染常導(dǎo)致疾病的嚴重程度增加和病期延長。

無并發(fā)癥，死亡率低，有并發(fā)癥可達30%。

6、微生物學診斷

分離不易，主要靠血清學試驗快速診斷。

血清學診斷常用平板凝集試驗、試管凝集試驗等。抽樣檢查，檢出抗體陽性雞，判為陽性雞群。

① 分離病原

取材：氣管或氣囊的滲出液、鼻甲骨、肺的懸浮液或鼻竇的滲出液。

分離培養(yǎng)：一般來說，一份病料同時接種液體和固體培養(yǎng)基進行分離，有助于提高分離率。

接液體培養(yǎng)基后應(yīng)隔日盲目傳代一次，（以免細菌的快速生長而掩蓋霉形體的分離，固體培養(yǎng)基至少應(yīng)在37℃培養(yǎng)5-7天確認無霉形體菌落生長才能判為陰性而丟棄。

②血清學診斷

常規(guī)：血清平板凝集試驗
SPA

血細胞凝集抑制試驗

種的鑒定：GI、MI、IMF，
Dot-ELISA（1989），
ELISA（1985）May。

7、免疫防制：弱毒苗滅活苗

對鏈霉素、土霉素、紅霉素、螺旋霉素、泰樂菌素、林肯霉素敏感。

發(fā)達國家對雞毒霉形體病十分重視。如：美國“全國家禽改進計劃”中規(guī)定的MG控制方案要求，作為正常的無MG雞群的子代群，在大于4月齡時必須對全群中至少10%的雞（不少于300只）進行血液檢查，其血清學檢查MG為陰性，則證實無MG感染。隨后在不超過90天的時間內(nèi)，對雞群至少隨機抽樣150只進行血清學檢查，陽性者不留作種用。

二、滑液囊霉形體（M.Synoviae MS）

致雞和火雞傳染性滑液囊炎，并可通過蛋傳播。營養(yǎng)要求更高。

1、形態(tài)和染色：與MG相似，直徑為200-400mm，在姬姆薩染色片中表現(xiàn)為多形態(tài)的球狀體。

2、生長需要：

① 需要煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD，輔酶I）。

② 必須要血清才能生長，豬血清較好（10%）

最適生長溫度為37℃。

瓊脂上的生長可通過將平板置于密封的罐中來完成，這樣就可以避免瓊脂干燥。

3、生化特性：能發(fā)酵葡萄糖和麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。

有些菌株可凝集雞或火雞的紅細胞。

4、微生物學診斷

① 分離鑒定：采取急性病雞的關(guān)節(jié)滲出液、肝、脾等材料，分離培養(yǎng)。菌落壓片用熒光抗體、酶標抗體檢查鑒定。

培養(yǎng)基
FM-4（加NAD）

② 血清學檢查：血清平板凝集試驗

第四節(jié) 牛霉形體

牛霉形體在霉形體研究歷史上具有特殊的位置。Nocard（1898）所培養(yǎng)的霉形體就是被人們所認識的第一個霉形體，這種霉形體被稱為絲狀霉形體絲狀亞種（Myaplasna Mycoides Subsp myeoides）。

目前已從牛分離到近20多種霉形體。

1、
病原性：是牛傳染性胸膜肺炎（CBPP）的病原菌，是牛的僅次

于牛瘟的傳染病。病變特征是間質(zhì)性、纖維素性肺炎、肺水腫、間質(zhì)增寬，病原存在于肺、縱膈淋巴、胸腔滲出液中，隨氣管，鼻腔排出體外，此病廣泛存在并流行，但亞洲只有部分地區(qū)有報道。近幾十年來該病在歐洲的一些地區(qū)亦存在（在歐洲南部有CBPP流行）。目前，很多學者認為CBPP的存在狀況在歐洲和非洲區(qū)別很大，在歐洲，CBPP構(gòu)成的死亡率很低。甚至比因為環(huán)境氣候變化，飼養(yǎng)管理不當引起的損失還小。

《國外獸醫(yī)學---畜禽傳染病》P5.1P47-48《牛傳染性胸膜肺炎在歐洲

的流行和研究現(xiàn)狀》。

我國解放前及解放初期有流行，目前沒有確切的病例報告。

2、生物學特性：利用葡萄糖，不利用精氨酸和尿素。菌體呈多形態(tài)，菌落呈典型的油煎蛋狀外觀，有大菌落型（LC）及小菌落型（SC）兩種類型。小菌落型對牛的毒力很強，對羊毒力很弱，大菌落型相反。LC型與SC型血清學上不易區(qū)分。

3、診斷牛肉湯+馬血清

① 分離用馬丁肉湯加血清或者用胃肝湯加血清

② 病原鑒定：用GI、 MI、 IMF

③ 血清學診斷：a：用補反（CFT）；b：聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（PCR）---檢測剖檢牛的肺樣和胸腔積液的特異性DNA；c：免疫斑點技術(shù)（一種ELISA法），但任何單一的方法不可能確切地檢出CBPP，只有將上述的方法有效地結(jié)合使用才確保診斷的可靠性和準確性。

4、免疫

用弱毒菌苗牛的兔化弱毒苗效果很好

我國已基本上消滅了此病，但近年來我國有些地區(qū)（如云南、新疆、西藏等）可能有發(fā)生。

二、牛霉形體