鹽酸甜菜堿安全性的初步評(píng)價(jià)

wlei908 · 發(fā)表于 2010-3-3 12:32:38

汪以真1，王友明1，傅劍云2

(1浙江大學(xué) 飼料科學(xué)研究所教育部動(dòng)物分子營(yíng)養(yǎng)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江杭州310029；2．浙江省衛(wèi)生防疫站，浙江杭州 3lOO08)

摘要：通過(guò)大鼠、小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)，大鼠蓄積毒性試驗(yàn)、致突變?cè)囼?yàn)(小鼠微核試驗(yàn)和小鼠精子畸形試驗(yàn))，探討了鹽酸甜菜堿作為畜禽飼料添加劑的安全性。結(jié)果表明，鹽酸甜菜堿屬實(shí)際無(wú)毒類物質(zhì)，無(wú)明顯蓄積作用，無(wú)致突變性，是一種安全的飼料添加劑。

關(guān)鍵詞：鹽酸甜菜堿；安全性；評(píng)價(jià)；飼料添加劑；小鼠；大鼠

甜菜堿的化學(xué)本質(zhì)是三甲基甘氨酸，在動(dòng)物體甲基代謝中起著非常重要的作用。它能促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)，降低胴體脂肪沉積，提高畜禽胴體品質(zhì)和肉的色、香和味。因而，廣泛用于畜禽飼料添加劑。甜菜堿的毒性較小，大鼠靜注2.4g/kg未見毒性產(chǎn)生,小鼠皮下注射LD50為l8.1 g/kg,但有關(guān)鹽酸甜菜堿的安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)尚未見報(bào)道。

l.材料與方法

1.1 受試物

　　鹽酸甜菜堿，浙江大學(xué)飼料科學(xué)研究所生產(chǎn)，樣品為白色晶體。

1.2 動(dòng)物

昆明種小鼠，浙江省藥檢所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證號(hào)：浙動(dòng)字第22-9601017)；SD大鼠，浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證號(hào)：浙實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量準(zhǔn)字96001號(hào))。

1.3 陽(yáng)性對(duì)照物
　　環(huán)磷酰胺，上海第十二制藥廣生產(chǎn)。

1.4 急性毒性試驗(yàn)
　　取健康小鼠、大鼠各4O只(小鼠體重18～22g，大鼠180～220g)，觀察1周后，隨機(jī)分成4個(gè)劑量組(每組10只，雌雄各半)，即2.15、4.64、10.00和21.50g/kg。樣品用蒸餾水配制，按等容量法(小鼠每10g體重0.2ml,大鼠每100 g體重2ml)灌胃接毒。采用24h一次經(jīng)口灌胃方式。染毒后，每日觀察動(dòng)物中毒癥狀和死亡情況．記下2周內(nèi)動(dòng)物數(shù)。采用Horn法計(jì)算LD50及其95%可信限。

1.5 蓄積毒性試驗(yàn)

取健康大鼠50只，體重(200土20)g，采用20d蓄積法按體重隨機(jī)分組，每組10只，雌雄各半。按1/20、1/10、1/5、1/2 LD50劑量，設(shè)樣品每公斤體重0.3、0.6、1.2、3.0g 4個(gè)劑量組和蒸餾水對(duì)照組。樣品用蒸餾水配制，經(jīng)口每天灌胃1次，連續(xù)20d，每4d稱重1次。

試驗(yàn)開始至染毒結(jié)束后7d．每天觀察大鼠的一般狀況、中毒癥狀和死亡情況。根據(jù)大鼠死亡情況確定蓄積毒性強(qiáng)度。用t檢驗(yàn)法檢測(cè)染毒4、8、12、16和2Od 以及停止染毒后第7天各劑量組與對(duì)照組大鼠體重的差異性。

1.6 骨髓微核試驗(yàn)
　　取健康小鼠5O只(體重22～26 g)，隨機(jī)分成5組，設(shè)樣品每公斤體重1.25、2.50和5.00 g 3個(gè)劑量組,另設(shè)空白對(duì)照(蒸餾水)和陽(yáng)性對(duì)照(環(huán)磷酰胺40mg/kg)。每組lO只小鼠,雌雄各半,樣品用蒸餾水配制,按每10 g體重0.1 ml計(jì)算灌胃量。采用間隔24 h
2次給樣品，第2次給樣后6 h處死動(dòng)物，取其胸骨骨髓制片，甲醇固定，Giemsa(pH=6.4)染色，鏡檢。每只動(dòng)物觀察1000個(gè)骨髓嗜多染紅細(xì)胞(PCE)，同時(shí)計(jì)數(shù)正染紅細(xì)胞(NCE)及含微核的嗜多染紅細(xì)胞(MNPCE)，計(jì)算微核千分率(MN‰)，以卡方檢驗(yàn)法檢測(cè)受試物劑量組與陰性對(duì)照組間差異的顯著性。

1.7 精子畸形試驗(yàn)

取健康雄性小鼠50只(體重23～27g)，如上1.6分組。樣品用蒸餾水配制,按每10g體重0.1m1計(jì)算灌胃量。每天灌胃1次，連續(xù)5d，對(duì)照組也同樣處理。在首次給樣品的第35天，頸椎脫臼處死小鼠，取兩側(cè)附睪，放入盛有生理鹽水的平皿中剪碎，經(jīng)4層擦鏡紙吸濾，直接涂片，自然干燥，甲醇固定，用1% 伊紅染色，高倍鏡下檢查精子形態(tài)。每只小鼠檢查完整精子1000個(gè)，記錄畸變精子的類型和數(shù)目，計(jì)算畸形率(%)。同樣以卡方檢驗(yàn)法檢測(cè)差異的顯著性。

2 結(jié)果與討論

2.1 急性毒性試驗(yàn)

見表1。經(jīng)Horn氏法計(jì)算，鹽酸甜菜堿對(duì)小鼠雌、雄性經(jīng)口LD50值為5.84g/kg,95%可信限為4.3O～ 7.94 g/kg；對(duì)雌性大鼠經(jīng)口LD50值為6.81g/kg,對(duì)雄性大鼠

經(jīng)口LD50值為5.84 g/kg,95%可信限為4.3O～7.94 g/kg。根據(jù)急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，該樣品為實(shí)際無(wú)毒類。

2.2 蓄積毒性試驗(yàn)

　　見表2,3。試驗(yàn)期間各組大鼠呈階段性增長(zhǎng)。在同一染毒時(shí)間中，各劑量組大鼠的體重與對(duì)照組比較無(wú)顯著差異性(P>0.05)，停止染毒后第7天，0.3、1.2和3.0g/kg劑量組雌性大鼠的體重分別比對(duì)照組增加明顯(P<0.05),但雄性大鼠各劑量組體重未見明顯增加。試驗(yàn)大鼠死亡情況無(wú)劑量反應(yīng)關(guān)系?？梢哉J(rèn)為鹽酸甜菜堿無(wú)明顯蓄積作用。

2.3 骨髓微核試驗(yàn)

　　見表4。陽(yáng)性對(duì)照物(環(huán)磷酰胺)可引起小鼠骨髓細(xì)胞微核率明顯升高，與陰性對(duì)照組比較，差異極顯著（P<O.01)。而在鹽酸甜菜堿各劑量組，中、低劑量組細(xì)胞微核率有所升高，但與陰性對(duì)照組比較．差異不顯著(p>0.05)，表明鹽酸甜菜堿小鼠微核試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

2.4 精子畸形試驗(yàn)

　　見表5。環(huán)磷酰胺可引起小鼠精子畸形率明顯升高，與陰性對(duì)照組比較差異極顯著(P<0.01)。3個(gè)劑量組精子畸形率與陰性對(duì)照組比較差異不顯著(p>0.05),表明鹽酸甜菜堿小鼠精子畸形試驗(yàn)為陰性。

參考文獻(xiàn)
略

Evaluation on Safety of Betaine Hydrochloride

WANG Yi- zhen1，WANG You-ming1，F(xiàn)U Jia- yun2 (1.Feed Science Institute,Zhejiang University,the Key Laboratory of Animal Nutrition and Feed of Chinese Agriculture Ministry，Hangzhou 310029，China；2.Zhejiang Health and Anti-epidemic Station，Hangzhou 310009，China)

Abstract：In order to evaluate the toxicology of safety of betaine hydrochloride，the general tests for acute，accumulative toxicity in
mice and rats:the special tests for effects on mutagenicity (the micronucleus test for cytogenetics analysis in mice and rats.the test for sperm abnormality in mice)were conducted．The results of above-mentioned tests showed that betaine hydrochloride have no toxicity,accumulation toxicity and mutagenicity and can be used as safe feed additive.

Key words：betaine hydrochloride;safety;evaluation;feed additive;mouse;rat