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zzy8604

我是學生，準備做有關牛的瘤胃微生物的論文，老師叫我先看下有關[color=red]亨蓋特厭氧培養(yǎng)[/color][color=black]的資料，在網上也找不到太多，希望各位有相關的資料共享下。謝謝！隨便可以提供[/color][color=red]亨蓋特管[/color][color=black]的銷售的單位不？我的郵箱是[url=mailto:zzy8604@163.com]zzy8604@163.com[/url].非誠勿擾~~?。/color]

矮子

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[size=4][color=#800080][font=Times New Roman]感覺屬于厭氧微生物計數(shù)。[/font][/color][/size]
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[size=4][color=#800080][font=Times New Roman]1 目的 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]1.1 了解厭氧微生物的生長特性 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]1.2 觀察厭氧微生物（雙歧桿菌）的形態(tài)特征 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]1.3 掌握厭氧微生物的滾管分離、培養(yǎng)與計數(shù)技術 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]2 原理 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]目前培養(yǎng)厭氧微生物的簡便而又有效的技術包括有：厭氧箱培養(yǎng)技術；厭氧罐培養(yǎng)技術；厭氧袋培養(yǎng)技術；亨蓋特厭氧滾管技術。這里介紹的是亨蓋特厭氧滾管技術。[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]亨蓋特厭氧滾管技術是美國微生物學家亨蓋特（Hungate）于1950年首次提出并應用于瘤胃厭氧微生物研究的一種厭氧培養(yǎng)技術。以后這項技術又經歷了幾十年的不斷改進，從而使亨蓋特厭氧技術日趣完善，并逐漸發(fā)展成為研究厭氧微生物的一整套完整技術。而且多年來的實踐已經證明它是研究嚴格、專性厭氧菌的一種極為有效的技術。[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]亨蓋特厭樣滾管培養(yǎng)技術不僅可用于有益厭氧菌如雙歧桿菌等的分離、與活菌培養(yǎng)計數(shù)，還可以用于有害腐敗菌（如酪酸菌）或病原菌（如肉毒梭狀芽孢桿菌）的分離與鑒定。 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]3 材料 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]3.1 樣品 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]雙歧酸奶（液體）、雙歧桿菌制劑（固體）。[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]3.2 培養(yǎng)基 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]改良MRS培養(yǎng)基，PTYG培養(yǎng)基。[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]3.3 儀器和器具 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]亨蓋特厭氧滾管裝置一套，厭氧管，厭氧瓶，滾管機，定量加樣器 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]4 流程 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]銅柱除氧→預還原培養(yǎng)基→稀釋用液制備→稀釋樣品→滾管→培養(yǎng)→計數(shù)[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]5 方法 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]5.1銅柱系統(tǒng)除氧 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]銅柱是一個內部裝有銅絲或銅屑的硬質玻璃管。此管的大小為40—400mm，兩段被加工成漏斗裝，外壁繞有加熱帶，并與變壓器相連來控制電壓和穩(wěn)定銅柱的溫度。銅柱兩端連接膠管，一端連接氣鋼瓶，一端連接出氣管口。由于從氣鋼瓶出來的氣體如N2、CO2和H2等通常都含有O2，故當這些氣體通過溫度約360℃的銅柱時，銅和氣體中的微量O2化合生成CuO，銅柱則由明亮的黃色變?yōu)楹谏?。當向氧化狀的銅柱通入H2時，H2與CuO中的氧就結合形成H2O，而CuO又被還原成了銅，銅柱則又呈現(xiàn)明亮的黃色。此銅柱可以反復使用，并不斷起到除氧的目的。當然H2源也可以由氫氣發(fā)生器產生。[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]5.2 預還原培養(yǎng)基及稀釋液的制備 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]制作預還原培養(yǎng)基及稀釋液時，先將配制好的培養(yǎng)基和稀釋液煮沸驅氧，而后用半定量加樣器趁熱分裝到螺口厭氧試管中，一般瓊脂培養(yǎng)基裝4.5-5ml，稀釋液裝9ml，并插入通N2氣的長針頭以排除O2。此時可以清楚地看到培養(yǎng)基內加入的氧化還原指示劑—刃天青由藍到紅最后變成無色，說明試管內已成為無氧狀態(tài)，然后蓋上螺口的丁烯膠塞及螺蓋，滅菌備用。[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[size=4][color=#800080][font=Times New Roman]5.3 雙歧桿菌樣品不同稀釋度的制備 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]在無菌條件下準確稱取1g固體或用無菌注射器吸取1ml混合均勻的液體樣品，而后加入裝有預還原生理鹽水的厭氧試管中，用震蕩器將其震蕩均勻，制成10-1稀釋液。用無菌注射器吸取1ml 10-1稀釋液至另一支裝有9ml生理鹽水的試管中，制成10-2稀釋液。按此操作方法依次進行10倍系列稀釋至10-7，制成不同濃度的樣品稀釋液。通常選10-5、10-6、10-7三個稀釋度進行滾管培養(yǎng)計數(shù)。[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]5.4厭氧滾管培養(yǎng)法[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]將盛有融化的無菌無氧瓊脂培養(yǎng)基試管放置于50℃左右的恒溫水浴中，用1ml無菌注射器分別吸取10-5、10-6、10-7三個稀釋度的稀釋液各0.1ml于融化了的瓊脂培養(yǎng)基試管中，而后將其平放于盛有冰塊的盤中或特制的滾管機上迅速滾動，這樣帶菌的融化培養(yǎng)基在試管內壁立即凝固成一薄層。每個稀釋度重復3次，而后置于37℃（酸奶樣品42℃）恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。一般培養(yǎng)24—48小時后，即可在厭氧管的瓊脂層內或表面長出肉眼可見的菌落。[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]5.5 雙歧桿菌活菌（分離）計數(shù) [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]選擇分散均勻，數(shù)量在幾十~幾百個菌落的厭氧試管進行活菌計數(shù)，即可得出每克或每毫升樣品中含有的雙歧桿菌數(shù)量。[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]5.6 計算 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]雙歧桿菌的活菌數(shù)量cfu/g(ml)樣品=0.1ml滾管計數(shù)的實際平均值×10×稀釋倍數(shù) [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]6 結果 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]6.1 觀察雙歧桿菌形態(tài)，描述其形態(tài)特征。[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman] [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]6.2 計算每克或每毫升樣品中含有的雙歧桿菌數(shù)量，記錄結果。[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]7 思考 [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]1 比較平板活菌計數(shù)和滾管活菌計數(shù)的異同？[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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[/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]2 實驗中通過哪些措施和方法保持細菌的厭氧狀態(tài)？ [/font][/color][/size][size=4][color=#800080][font=Times New Roman]
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