抗菌肽知識(shí)系列大講堂（八）

輕松由我

國內(nèi)外研究前沿進(jìn)展情況（一）

對抗菌肽作用機(jī)制的研究：Shahabuddin研究發(fā)現(xiàn)昆蟲抗菌肽對感染蚊子的瘧原蟲發(fā)育的不同時(shí)期有不同的作用，主要對瘧原蟲的卵囊期和子孢子期造成明顯的損傷。國內(nèi)外已對抗菌肽殺傷腫瘤細(xì)胞的作用進(jìn)行了廣泛研究，發(fā)現(xiàn)抗菌肽對體外培養(yǎng)的癌細(xì)胞的作用主要是使癌細(xì)胞膜上形成孔洞，內(nèi)容物外泄，線粒體出現(xiàn)空泡化，嵴脫落。核膜界限模糊不清，有的核膜破損，核染色體DNA斷裂，并抑制染色體DNA的合成，細(xì)胞骨架也受到一定程度的損傷。通過對荷瘤小鼠的研究證實(shí)，抗菌肽能顯著抑制ECA腹水瘤荷瘤小鼠腹水的積累;對S180肉瘤和U14宮頸癌的抑瘤率亦達(dá)30－50抗菌肽還可以調(diào)動(dòng)機(jī)體的免疫機(jī)能，從體液免疫方面來反抗癌瘤的入侵。
抗菌肽基因的融合表達(dá)： 謝維等合成了家蠶抗菌肽CMIV基因，并將其克隆到金黃色葡萄球菌A蛋白和IgG親合的結(jié)構(gòu)域ZZ的融合表達(dá)載體中，得到Pezz318－CMIVV質(zhì)粒，以此質(zhì)粒轉(zhuǎn)化EcoliHB101，得到ZZ－CMIV融合表達(dá)的蛋白，用CBr切割后，得到CMIV肽。李秀蘭等對天然抗菌肽CMIV的氨基酸序列作了50的改動(dòng)，根據(jù)Ecoli偏愛的密碼子人工合成了肽基因片斷，重組到測序載體，再將此片斷重組到表達(dá)載體Pet28上進(jìn)行表達(dá)，融合蛋白經(jīng)CNBr裂解后，具有與天然抗菌肽相同的生物活性。吳映雅等將柞蠶抗菌肽Ｄ基因連接在牛成纖維細(xì)胞生長因子cDNA的上游，在酵母中成功地得到了表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物具有抗菌活性和牛成纖維細(xì)胞生長因子的抗原性。Kevin等HNP和CEME分別與GST、ORRF、IgG結(jié)合序列及SPA在Ecoli或Saureus中融合表達(dá)，結(jié)果在Saureus中雖實(shí)現(xiàn)了與SPA的融合分泌表達(dá)，但表達(dá)產(chǎn)量較低;Zhang等選擇RepA蛋白的序列作為抗菌肽的融合表達(dá)伴侶，并插入Histag等序列作為純化親和位點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)了在Ecoli中的融合表達(dá)。Christsnen B等研究中得到的融合抗菌肽的抗菌活性比其任何一個(gè)供體抗菌肽的活性都高。
抗菌肽轉(zhuǎn)基因研究 王志興等把大麥α－淀粉酶的信號(hào)肽序列和抗菌肽Cecropin B基因或Hhiva A基因構(gòu)成嵌合基因，并把此基因?qū)腭R鈴薯，結(jié)果加信號(hào)肽序列的Cecropin B轉(zhuǎn)基因植株發(fā)青枯病延遲，病情指數(shù)降低。Yarus等用顯微注射法將牛氣管抗菌肽基因轉(zhuǎn)入小鼠，轉(zhuǎn)基因鼠在牛氣管抗菌肽基因控制序列的驅(qū)動(dòng)下成功的表達(dá)了牛氣管抗菌肽，在鼠乳中的牛氣管抗菌肽對大腸桿菌具有抗菌活性。Reed等研究了以IL－2啟動(dòng)子/增強(qiáng)子控制轉(zhuǎn)基因鼠中抗菌肽的合成及隨后對布氏桿菌的抑制作用。Reed構(gòu)建了這樣一個(gè)DNA片斷：Shivala片斷，SV40多腺苷酸化/剪切信號(hào)肽基因片斷，此片斷加到鼠IL－2基因5’側(cè)－593─ 110區(qū)域。在受精卵精前核時(shí)將此融合基因注入受精卵，得到26系小鼠。RT－PCR檢測：有兩系轉(zhuǎn)基因鼠，當(dāng)其脾淋巴細(xì)胞置于325mg/kg的conA時(shí)，可以誘導(dǎo)產(chǎn)生成熟的Shivalam RNA。用一定量的布氏桿菌接種時(shí)，有兩系小鼠遭到攻擊。四星期后，在轉(zhuǎn)基因鼠脾臟組織布氏桿菌比非轉(zhuǎn)基因鼠少得多。David Winder等把編碼Ceropin或Melittin的基因放置在MLV的啟動(dòng)子下，轉(zhuǎn)染到EJ細(xì)胞，然后把這些細(xì)胞注入到裸鼠內(nèi)，發(fā)現(xiàn)這些腫瘤細(xì)胞停止生長或生長減弱David Winder等用PCR擴(kuò)增，Prepromelittin，Premelittin和Prececroppin三種核酸片斷，均置于MLV啟動(dòng)子下構(gòu)建融合基因轉(zhuǎn)染進(jìn)EJ細(xì)胞。三種類型的EJ細(xì)胞分別注入裸鼠后，測定50d后的腫瘤生長情況，無抗菌肽基因片斷的EJ細(xì)胞致瘤率為70，帶Cecropin基因片斷的EJ細(xì)胞致瘤率只有39，PPM為50，PM為65，其抑制腫瘤的效果明顯。

love51

好資料，樓主繼續(xù)繼續(xù)

hahachina

就目前的生產(chǎn)成本，限于藥用。

jiang102197

問題核心是，這個(gè)能夠給養(yǎng)殖戶帶來什么效益

四季

抗菌肽在生產(chǎn)實(shí)際中應(yīng)用效果怎么樣？是藥品還是保健品？

輕松由我

回復(fù) 4# jiang102197


   抗菌肽以其獨(dú)特的作用機(jī)制，結(jié)構(gòu)的優(yōu)勢，是新型抗生素替代品的最佳候選者

輕松由我

回復(fù) 5# 四季


    抗菌肽在醫(yī)藥研究中，效果顯著，多處于臨床三期階段，國外對此研究較多。在畜牧養(yǎng)殖業(yè)，作為飼料添加劑的應(yīng)用多由報(bào)道，且效果顯著，不過目前看來作為動(dòng)物保健性產(chǎn)品較多，對于抗菌和調(diào)節(jié)免疫力效果佳。

四季

抗菌肽是抗生素的替代品嗎？

任我自由飛

回復(fù) 4# jiang102197

大家最關(guān)心的當(dāng)然還是投入和產(chǎn)出比問題，這才是關(guān)鍵！

使用抗菌肽，最主要的優(yōu)勢一個(gè)是能夠代替抗生素，不會(huì)產(chǎn)生藥殘；另一個(gè)是能夠廣譜抗菌、抗病毒、抗真菌、抗原蟲、抗霉菌等病原微生物等。

在豬場里，一個(gè)顯著地表現(xiàn)就是經(jīng)過一段時(shí)間的使用，豬群穩(wěn)定，能夠有效預(yù)防惡性傳染病的發(fā)生，同時(shí)提高母豬生產(chǎn)性能、小豬成活率、促進(jìn)中大豬的快速增重，縮短出欄時(shí)間等。