抗菌肽知識(shí)系列大講堂（九）

輕松由我

抗菌肽的基因工程表達(dá)（一）

  天然抗菌肽主要來(lái)自昆蟲(chóng)，但其提取過(guò)程甚為復(fù)雜。一般需將蟲(chóng)體研磨、離心，上清液再經(jīng)鹽析、葡聚糖凝膠層析等一系列步驟純化，才能去除其他雜蛋白，而產(chǎn)物濃度和回收率都不甚理想。用基因工程方法可以簡(jiǎn)化上述步驟，且產(chǎn)量可獲明顯提高。

  基因的構(gòu)建及表達(dá) ： 目的基因的獲得可以從動(dòng)物體中提取RNA，將其反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增后得到cDNA，利用此方法已經(jīng)得到豬抗菌肽PR-39基因；或根據(jù)抗菌肽氨基酸殘基種類(lèi)和其殺菌活性的相關(guān)性，替換某幾個(gè)氨基酸或?qū)?/font>2種抗菌肽基因結(jié)合構(gòu)造雜合肽。如將cecropin Bl5和17等位點(diǎn)的氨基酸替換后，其抗菌活性明顯提高；cecropin A N端1～7位和Milittin N端5～12位氨基酸雜合后，其產(chǎn)物具有熱穩(wěn)定性和高抑菌活性。

大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)基于大腸桿菌的原核表達(dá)系統(tǒng)是迄今在基因工程領(lǐng)域中應(yīng)用最多、也最完善的系統(tǒng)，但運(yùn)用該系統(tǒng)表達(dá)抗菌肽則遇到很多困難，主要表現(xiàn)在2個(gè)方面。一是抗菌肽的宿主細(xì)胞毒性。宿主細(xì)胞表達(dá)的抗菌肽會(huì)反饋性地抑制大腸桿菌等宿主細(xì)胞的增殖，從而影響抗菌肽的進(jìn)一步表達(dá)；二是容易被降解。由于抗菌肽本身帶有大量正電荷，因而對(duì)蛋白酶非常敏感，在表達(dá)胞中容易被降解，難以實(shí)現(xiàn)大量表達(dá)。融合表達(dá)是解決上述問(wèn)題的主要方法。xu等以pTRX為載體，在大腸桿菌BL21中以與硫氧還蛋白(TRX)融合的方式表達(dá)了38個(gè)氨基酸殘基的家蠅肽Mdmcec，目標(biāo)蛋白用腸激酶切割下來(lái)，再用HPLC進(jìn)行純化，最后獲得了11．2 mg／L的產(chǎn)量。但大腸桿菌表達(dá)產(chǎn)物均以包涵體的形式存在，需將細(xì)胞超聲破碎后透析純化，給后續(xù)處理帶來(lái)困難。

liukai721026

概念，炒作。

sherier

抗菌肽這東西好像一直居高和寡啊，還是老老實(shí)實(shí)用抗生素吧va

SZNM

還是不大成熟，微生態(tài)制劑多考慮一些吧

輕松由我

抗菌肽的應(yīng)用已經(jīng)較為廣泛，nisin已經(jīng)是國(guó)際公認(rèn)的一種。另外還有很多國(guó)際公司研發(fā)抗菌肽，其療效相當(dāng)好，例如拜耳公司等?？咕牡莫?dú)特性質(zhì)和活性使其在應(yīng)用中能夠替代抗生素發(fā)揮抗菌作用，并具有多種其他功效。詳見(jiàn)大講堂前幾期。
對(duì)于微生態(tài)制劑，確實(shí)是個(gè)很好的產(chǎn)品，但是微生態(tài)產(chǎn)品也只是衛(wèi)兵的作用，不能起到根本殺菌作用。
詳細(xì)請(qǐng)各位查閱相關(guān)資料。
下期將繼續(xù)講解抗菌肽的基因工程表達(dá)！謝謝關(guān)注~

xuguangcai

學(xué)習(xí)一下  多謝樓主

學(xué)習(xí)

沒(méi)有試驗(yàn)數(shù)據(jù)嗎？