人工授精室操作標(biāo)準(zhǔn)

田永勝 · 發(fā)表于 2010-7-9 21:23:48

　　1.采精：
　　1-1.采精前的準(zhǔn)備：準(zhǔn)備好消毒過的集精瓶、過濾紗布、假臺畜等所需物品
　　1-2.采精公豬的調(diào)教：
　　1-2-1公豬的采精調(diào)教，公豬采精調(diào)教人員要有足夠的耐性并掌握一定的技巧，先調(diào)教性欲旺盛的公豬采精，利用涂上其它公豬精液或尿液的采精架或發(fā)情母豬，逐步訓(xùn)練公豬騎在它們的背上。
　　1-2-2對性欲較弱的公豬，可將發(fā)情旺盛的母豬趕到假母豬旁邊，讓被訓(xùn)練的公豬爬跨，待公豬性欲旺盛時把母豬趕走，再引誘公豬爬跨假母豬，或直接將公豬由母豬身上搬到假母豬臺上采精。
　　1-2-3調(diào)教時，盡量模仿發(fā)情母豬的叫聲，可提高公豬的性欲。一旦爬跨成功，要連續(xù)幾天對該公豬進(jìn)行采精，以鞏固剛建立起來的條件反射。
　　1`-3
　　采精方法： 1-3-1 當(dāng)公豬性欲達(dá)到旺盛時，它將爬上母豬臺，并伸出陰莖龜頭來回抽動。右手抓住公豬陰莖的螺旋頭處，并順勢拉出陰莖，稍微回縮，直至和公豬陰莖同時運動，左手拿采精杯;若用左手采精時，則要蹲在公豬的右側(cè)，左手抓住陰莖，右手拿采精杯。
　　1-3-2無論用左手或右手，當(dāng)握住公豬的陰莖時，都要注意要用拇指和食指抓住陰莖的螺旋體部分，其余三個手指予以配合，象擠牛奶一樣隨著陰莖的勃動而有節(jié)律地捏動，給予公豬刺激。1-3-3采精時，握陰莖的那只手一般要戴雙層手套，最好是聚乙烯制品，用這種手套對精子殺傷力較小，當(dāng)將公豬包皮內(nèi)的尿液擠出后，應(yīng)將外層手套去掉，以免污染精液或感染公豬的陰莖。
　　1-3-4手握陰莖的力度，太大或太小都不行，應(yīng)以不讓其滑落并能抓住為準(zhǔn)。用力太小，陰莖容易脫掉，采不到精;用力太大，一是容易損傷陰莖，二是公豬很難射出精液。公豬一旦開始射精，手應(yīng)立即停止捏動，而只是握住陰莖，射精完后，應(yīng)馬上捏動，以刺激其再次射精。
　　1-3-5當(dāng)公豬射精時，一般射出的前面較稀的精清部分應(yīng)棄去不要，當(dāng)射出乳白色的液體時，即為濃精液，就要用采精杯收集起來，
　　1-3-6射精的過程中，公豬都會再次或多次射出較稀的精清，和最后射出的較為稀薄的部分、膠體都應(yīng)棄去不要。
　　1-3-7精液品質(zhì)的好壞，量的多少只是其中的一個衡量指標(biāo)，在相同的取舍方法下，關(guān)鍵要看精子的密度和活力的高低。，在相同的采精方法下，應(yīng)以精子密度、活力為主進(jìn)行評價，而精液量只是其中一個標(biāo)準(zhǔn)。
　　1-3-8采精杯上套的四層過濾用紗布，使用前不能用水洗，若用水洗則要烘干，因水冼后，相當(dāng)于采得的精液進(jìn)行了部分稀釋，既使水分含量較少，也將會影響精液的濃度。
　　2精液的處理
　　2-1.精液品質(zhì)的檢查:由采精室遞過來的精液，要馬上進(jìn)行鑒定，以便決定可否留用，從而保證母豬的受胎率和產(chǎn)仔數(shù)的提高。檢查精液的主要指標(biāo)有如下幾個：精液量、顏色、氣味、精子密度、精子活力、酸堿度、粘稠度、畸形精子率等。每一份經(jīng)過檢查的公豬精液，都要有一份詳細(xì)的檢查記錄，以備對比及總結(jié).檢查前，將精液轉(zhuǎn)移到在37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱的燒杯中，或直接將精液袋放入37℃水浴鍋內(nèi)保溫，以免因溫度降低而影響精子活力。整個檢查活動要迅速、準(zhǔn)確，一般在5～10分鐘內(nèi)完成。
　　2-1 -1精液量：后備公豬的射精量一般為150～200毫升，成年公豬的為200～300毫升，有的高達(dá)700～800毫升。精液量的多少因品種、品系、年齡、采精間隔、氣候和飼養(yǎng)管理水平等不同而不同。
　　2-1 -2、顏色：正常精液的顏色為乳白色或灰白色，精子的密度愈大，顏色愈白;越小，則越淡。如果精液顏色有異常，則說明精液不純或公豬有生殖道病變，如呈綠色或黃綠色時則可能混有化膿性的物質(zhì);呈紅色時則有新鮮血液;呈褐色或暗褐色時則有陳舊血液及組織細(xì)胞;呈淡黃色時則可能混有尿液等。凡發(fā)現(xiàn)顏色有異常的精液，均應(yīng)棄去不用，同時，對公豬進(jìn)行對癥處理、治療。
　　2-1 -3、氣味：正常的公豬精液含有公豬精液特有的微腥味，這種腥味不同于魚類的腥味，沒有腐敗惡臭的氣味。有特殊臭味的精液一般混有尿液或其它異物，一旦發(fā)現(xiàn)，不應(yīng)留用，并檢查采精時是否有失誤，以便下次糾正做法。
　　2-1 -4、酸堿度：可用PH試紙進(jìn)行測定。公豬精液的酸堿度一般呈弱堿性或中性，其酸堿度與精子密度呈負(fù)相關(guān)的關(guān)系，PH值越接近中性或弱酸性，則精子密度越大，但過酸過堿都會影響精子的活力。
　　2-1-5精子活力：精子活力的高低關(guān)系到配母豬受胎率和產(chǎn)仔數(shù)的高低，因此，每次采精后及使用精液前，都要進(jìn)行活力的檢查，以便確定精液能否使用及如何正確使用。精子活率的檢查必須用37℃左右的保溫板，以維持精子的溫度需要。一般先將載玻片和蓋玻片放在保溫板上預(yù)熱至37℃左右后，再滴上精液，在顯微鏡下進(jìn)行觀察。檢查前應(yīng)先將精液瓶上下輕輕翻轉(zhuǎn)使精液混勻，然后制作涂片，用顯微鏡100倍觀察精子活力，計算活精子和死精子的百分比。隨后再在400倍下觀察精子尾部擺動情況并記錄其活動情況。每次檢查精子活力，要進(jìn)行人工授精的精子活力質(zhì)量要求必須不低于70+++，異常精子不超過20%。
　　2-1-6精子密度：指每毫升精液中含有的精子量，它是用來確定精液稀釋倍數(shù)的重要依據(jù)。
　　2-1-6-1用精子密度儀計算精子密度：美國和歐洲等養(yǎng)豬業(yè)發(fā)達(dá)的國家多采用這種方法，它極為方便，檢查時間短，準(zhǔn)確率高，使用壽命長，但價格較貴，一般國外進(jìn)口都在一萬元人民幣以上，但若用國產(chǎn)分光光度計改裝，也較為適用。它有兩種類型：一是德國的精子密度儀，它是將原精液滴一滴在一個一次性的特制塑料板上，然后通過儀器直接測量精子的密度，這種方法一般要先進(jìn)密度儀的校正;另一種是利用光電比色法，以精子對光通透性差為依據(jù)，用分光光度計讀出一個數(shù)字，然后再根據(jù)事先準(zhǔn)備好的標(biāo)準(zhǔn)曲線確定精子的密度。這兩種類型都有一個缺點，就是會將精液中的異物按精子來計算。用精子密度儀檢查精子密度，將是國內(nèi)外豬人工授精人員較好的選擇。
　　2-1-6-2若達(dá)不到以上的設(shè)備要求，可用以下方法粗略測定精子密度：
　　2-1-6-2-1、白細(xì)胞稀釋吸管計數(shù)法：這種方法是用手動計數(shù)器和血細(xì)胞計數(shù)板來統(tǒng)計精子密度的。目前，在國內(nèi)應(yīng)用較多，成本低，計算較準(zhǔn)確，但所用時間多，使用效率低。
　　主要做法是先用紅血球稀釋吸管取精液到球下的0.5(稀釋200倍)或1.0刻度處(稀釋100倍)，然后再吸取注射用生理鹽水到膨大部上方的101刻度處，用兩指(拇指和食指或中指)緊緊壓住吸管的兩端進(jìn)行搖動混合均勻，吸取的過程中，不允許有空氣混入吸管，以免影響準(zhǔn)確度。搖均后，將吸管未端的液體擦干，并去掉前幾滴混合液，然后順著蓋有蓋玻片的血細(xì)球計數(shù)板的邊緣，讓混合液滲入到計數(shù)板內(nèi)，再通過顯微鏡觀察，用計數(shù)器點數(shù)，這種檢查一般為總精子數(shù)。然后利用公式計算每毫升精子的密度。精子密度的計算公式為：
　　全方格內(nèi)的精子數(shù)×10(厚度的倍數(shù))×稀釋倍數(shù)(100或200)×1000=精子數(shù)/毫升
　　2-1-6-2-2簡單檢查密度法：這種方法不用計數(shù)，用眼觀察顯微鏡下精子的分布，精子所覆蓋的面積大過空間面積的為“密”，小于空間面積的為“稀”，介于二者之間的為中等。一般只用密和中等的精液，稀的應(yīng)棄去。這種方法簡單，但對于不同檢查人員而言，主觀性強，誤差較大，只能對公豬進(jìn)行粗略的評價，故大型養(yǎng)豬場一般不采用這種方法，只適應(yīng)個體戶或人工授精數(shù)量少的豬場。
　　2-1-7畸形精子率：畸形精子指斷尾、斷頭、有原生質(zhì)、頭大的、雙頭的、雙尾的、折尾等精子，一般不能直線運動，雖受精能力較差，但影響精子的密度。若通過攝像顯示儀觀察，則很容易區(qū)分。若用普通顯微鏡觀察，則需染色;若用位相差顯微鏡，則可直接觀察。公豬的畸形精子率一般不能超過20%，否則應(yīng)棄去。
　　2-2.實驗設(shè)備的消毒處理：精液稀釋的成敗，與所用儀器的清潔衛(wèi)生有很大關(guān)系。所有使用過的燒杯、玻璃棒及溫度計，都要及時用蒸餾水洗滌，并進(jìn)行高溫消毒，是稀釋后的精液能保證適期保存、利用的重要條件。
　　2-3.稀釋液
　　2-3-1稀釋液的成分:
　　一般精液稀釋液包括有一種或多種保護(hù)劑。盡管目前采用的公豬精液稀釋液有多種多樣，但就其化學(xué)組成上來看主要有以下一些成分。
　　2-3-1-1.
　　代謝或營養(yǎng)物質(zhì)，以減少精子自身能量消耗，以便延長精子壽命，一般為單糖，如葡萄糖。
　　2-3-1-2.
　　適宜的緩沖體系，以保持精液的PH值及滲透壓的基本穩(wěn)定。
　　2-3-1-3.
　　大分子物質(zhì)，以保護(hù)精子免受降溫的不利影響，如牛血清白蛋白。
　　2-3-1-4. 抗生素，以阻止細(xì)菌的生長
　　2-3-2稀釋液的配制：稀釋液的配制種類很多，正在試驗尚未定型的更多，采用何種稀釋倍數(shù)應(yīng)根據(jù)其效果，保存方法和成分是否容易得到而定，配制時要注意下列事項：
　　2-3-2-1.
　　配制稀釋液所用的一切用具，必須徹底洗滌干凈，消毒后用前并經(jīng)稀釋液沖洗才能使用。
　　2-3-2-2.
　　稀釋液必須保持新鮮，要現(xiàn)配現(xiàn)用。
　　2-3-2-3.
　　所用的蒸餾水要求新鮮，PH值呈中性。
　　2-3-2-4.
　　配置稀釋液所用的藥品成分要純凈，稱量要準(zhǔn)確，充分溶解。
　　2-3-2-5.
　　抗生素必須在稀釋液冷卻至室溫時按用量準(zhǔn)確加入。
　　2-4精液的稀釋
　　2-4-1、精液稀釋頭份的確定
　　稀釋前，應(yīng)對自己所需稀釋的精液頭份進(jìn)行確定。稀釋頭份可按如下方法進(jìn)行計算：人工授精的正常劑量一般為30～50億個精子/1個劑量，體積為80～100ML，美國一般采用30億/80ML.頭份，我國一般采用40億左右/100ML.頭份，不過，這主要是根據(jù)實際情況而定。正常的公豬精液，假如密度為2億/ML，采精量為150ML，并計劃稀釋后密度為40億/100ML.頭份。則此公豬精液可稀釋150×2/40=7.5頭份，即需加(750150)ML=600ML稀釋液。不過，同一種稀釋液，精子密度越大，因所消耗能量多，保存時間也就越短。
　　2-4-2、精液的稀釋
　　2-4-2-1.采精后精液應(yīng)盡早稀釋，原精液放置的時間過長會影響其活力，一般最好在30分鐘以內(nèi)完成稀釋。
　　2-4-2-2.先進(jìn)行一倍稀釋(稀釋液溫度等同鮮精溫度)稀釋時將稀釋液緩慢注入，輕柔轉(zhuǎn)動混和均勻。放置30分鐘，按其質(zhì)量根據(jù)配種需求，再進(jìn)一步稀釋分裝，(每頭份100ml)
　　2-4-2-3.稀釋時使稀釋液沿精液瓶壁緩緩加入，防止將精液迅速倒入稀釋液內(nèi)，造成局部稀釋打擊。
　　2-4-2-4稀釋液的溫度與精液的溫度必須調(diào)整一致，溫差不超過1℃。
　　2-4-2-5稀釋后將精液瓶輕輕轉(zhuǎn)動使精液與稀釋液混合均勻，切忌劇烈震蕩。
　　2-4-2-6精液稀釋后即進(jìn)行鏡檢，如果活率下降，說明稀釋或操作不當(dāng)。
　　2-5、稀釋后精液的分裝
　　精液的分裝，有瓶裝和袋裝兩種，裝精液用的瓶子和袋子均為對精子無毒害作用的塑料制品。瓶裝的精液分裝時簡單方便，易于操作，但輸精時需人為擠、壓或瓶底開口，因瓶子有一定的固體形態(tài);袋裝的精液分裝一般需要專門的精液分裝機，用機械分裝、封口，但輸精時因其較軟，一般不需人為擠壓。瓶子一般上面均有刻度，最高一刻度為100ML，袋子一般為80ML。
　　分裝后的精液，要逐個粘貼標(biāo)簽，一般一個品種一個顏色，便于區(qū)分。注意要在上面標(biāo)明公豬耳號、采精處理時間、稀釋后密度、經(jīng)手人等，并將以上各項登記到記錄本上，以備查驗。
　　2-6、稀釋后精液的保存
　　2-5-1分裝后的精液，不能立即放入17℃左右的恒溫冰箱內(nèi)，應(yīng)先留在冰箱外1小時左右，讓其溫度下降，以免因溫度下降過快而刺激精子，造成死精子等增多。
　　2-5-2放入冰箱時，不同品種的公豬精液應(yīng)分開放置，否則匆忙中容易拿錯精液。不論是瓶裝的或是袋裝的，均應(yīng)平放，并可疊放。
　　2-5-3從放入冰箱開始，每隔12小時，要搖勻一次精液，因精子放置時間一長，會大部分沉淀。對于一般豬場來說，可在早上上班，下午下班時各搖勻一次。為了便于監(jiān)督，每次搖動的人都應(yīng)有搖動時間和人員的記錄。
　　2-5-4保存過程中，一定要時時注意冰箱內(nèi)溫度計的變化，以免因意想不到的原因而造成電壓不穩(wěn)而導(dǎo)致溫度升高或降低。
　　2-6、精液的運輸
　　2-6-1對于遠(yuǎn)距離購精液的豬場，運輸?shù)倪^程是一個關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。
　　2-6-2保溫或防暑條件做得好的，運到幾千公里之外，精子活力等還較強，使用效果還是很好，母豬受胎率和產(chǎn)仔數(shù)也仍很高;做得不好的，就是同一場內(nèi)不同時間、地點使用，死精率也是很高，使用效果很差。高溫的夏天，一定要在雙層泡沫保溫箱中放入水袋(17℃恒溫)，再放精液進(jìn)行運輸，以防止天氣過熱，死精太多，嚴(yán)寒的季節(jié)，要用保溫用的恒溫乳膠或棉花等在保溫箱內(nèi)保溫。