小肽飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的評(píng)價(jià)方法

llppaa · 發(fā)表于 2010-9-17 10:28:40

小肽飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的評(píng)價(jià)方法
郭玉東* 張洋張均國(guó)
（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究所，哈爾濱，150030）
摘要：小肽一般是指二肽或三肽，小肽飼料就是通過化學(xué)或生物方法將本來不適合動(dòng)物利用的蛋白原料分

解，制成的含有大量小肽的飼料產(chǎn)品。小肽飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值在于小肽的吸收優(yōu)勢(shì)和其自身的質(zhì)量。根據(jù)影

響小肽營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的因素可以選取小肽的總含量、平均肽鏈長(zhǎng)度、特定小肽的含量、特定氨基酸的含量作為

評(píng)價(jià)小肽飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的指標(biāo)。目前的測(cè)定方法主要有雙縮脲法、福林-酚法、三氯乙酸法、甲醛滴定法

、凱氏定氮法、紫外光吸收法、消光系數(shù)法、考馬斯亮蘭法、層析比色法、高效凝膠色譜法、高效液相色

譜法和CE-ESI-MS聯(lián)用法。
關(guān)鍵詞：小肽，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，評(píng)價(jià)指標(biāo)

The evaluation method for nutrition of small peptide feed
Guo Yudong Zhang Yang Zhang Junguo
(Institute of Animal Nutrition, Northeast Agricultural University, Harbin 150030)

Abstract:
Generally, small peptide includes depeptide and tripeptide. Small peptide feed, which

contains a lot of small peptide, is produced with bad protein material by chemical or

biological technique. The nutritional value of small peptide feed includes its advantage in

absorption and its quality. Based on the facts which affect the small peptide feed’s value,

we choose total content of small peptide, average peptide length(APL), content of special

peptide, and content of special amino acide as the index to evaluate the small peptide feed.

The main assay methods include Biuret method, Lowry method, trichloroacetic acid method,

formol-titration method, Kjeldahl determination method, UV absorption Spectrum, extinction

coefficient method, Bradford method, chromatography and spectrophotometry, HPGC, HPLC and

CE-ESI-MS.

Key words: small peptide, nuturition, assessment index

傳統(tǒng)的代謝模型認(rèn)為蛋白質(zhì)必須水解成氨基酸后才能被吸收利用，飼料中氨基酸比例符合理想蛋白質(zhì)模型

就能獲得最大的營(yíng)養(yǎng)效果。但近些年的研究表明，不同來源的飼料氨基酸利用率存在差異，而且在給動(dòng)物

喂以按理想氨基酸模式配制的純合日糧或低蛋白質(zhì)氨基酸平衡日糧時(shí)，不能獲得最佳生產(chǎn)性能[1,2]?，F(xiàn)

代研究認(rèn)為，蛋白質(zhì)在動(dòng)物消化酶作用下的水解終產(chǎn)物大部分是由2或3個(gè)氨基酸殘基組成的小肽，它們以

完整的形式被吸收進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)而被組織利用。以此理論為基礎(chǔ)，很多飼料企業(yè)開發(fā)了小肽飼料，做為飼

料添加劑應(yīng)用于動(dòng)物飼料中。但是到目前為止，小肽市場(chǎng)仍十分混亂，小肽產(chǎn)品良莠不齊，這歸根結(jié)底是

由于缺乏小肽營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。而科學(xué)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)價(jià)方法是營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)的前提，本文對(duì)制定合適的小肽營(yíng)養(yǎng)價(jià)值

評(píng)價(jià)方法進(jìn)行了一些探索，綜述了評(píng)價(jià)小肽營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的的指標(biāo)和測(cè)定方法。
1小肽和小肽飼料的概念
評(píng)價(jià)小肽飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，首先要對(duì)小肽和小肽飼料的概念有一個(gè)明確的定義。肽是氨基酸的線性聚合物

，含氨基酸殘基50 個(gè)以上的通常稱為蛋白質(zhì)，低于50 個(gè)氨基酸殘基的稱為肽。最簡(jiǎn)單的肽由兩個(gè)氨基酸

組成，稱為二肽（dipeptide），其中含一個(gè)肽鍵。含三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)等氨基酸殘基的肽分別稱為三肽

、四肽、五肽等。通常把含幾個(gè)至十幾個(gè)氨基酸殘基的肽鏈統(tǒng)稱為寡肽（oligopeptide），更長(zhǎng)的肽鏈稱

為多肽（polypeptide）。有的學(xué)者把超過12個(gè)而不多于20個(gè)殘基的稱寡肽，含20個(gè)以上殘基的稱為多肽

[3]。在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)上一般認(rèn)為“含2或3個(gè)氨基酸殘基的肽為小肽”[4,5]。小肽飼料是一種功能營(yíng)養(yǎng)性添

加劑，也稱為小肽營(yíng)養(yǎng)素。小肽飼料的產(chǎn)生是基于現(xiàn)代營(yíng)養(yǎng)學(xué)的研究成果?，F(xiàn)代研究認(rèn)為，蛋白質(zhì)在消化

道中的消化終產(chǎn)物的大部分往往是小肽而不是游離氨基酸(FAA)[6]。小肽能完整地通過腸粘膜細(xì)胞而進(jìn)入

體循環(huán)[7]。小肽的吸收具有轉(zhuǎn)運(yùn)速度快、耗能低、載體不易飽和等優(yōu)點(diǎn)且各種肽之間轉(zhuǎn)運(yùn)無競(jìng)爭(zhēng)性與抑

制性[8]。小肽也是組織內(nèi)氨基酸的重要來源之一，動(dòng)物組織可以直接利用小肽中的氨基酸合成組織蛋白

[9,10,11]。根據(jù)這些研究結(jié)果，可以確定小肽是一種更優(yōu)質(zhì)的氮源。于是人們開始研究如何生產(chǎn)小肽飼

料。在當(dāng)前的生產(chǎn)工藝下，小肽飼料就是通過化學(xué)或生物方法將本來不適合動(dòng)物利用的蛋白原料分解，制

成的含有大量小肽的飼料產(chǎn)品。現(xiàn)在生產(chǎn)小肽飼料的方法主要有酸解法、酶解法、微生物發(fā)酵法三條途徑

。酸解法通過強(qiáng)酸、強(qiáng)堿的作用分解大分子蛋白為小分子肽, 由于強(qiáng)酸強(qiáng)堿具有腐蝕性, 該法會(huì)帶來大量

的污染；酶解法利用酶的定向分解的特性將大分子蛋白分解為小分子肽；微生物發(fā)酵法是利用微生物的生

化反應(yīng)將蛋白轉(zhuǎn)化為肽。僅就制備小肽來說還有化學(xué)合成法、重組DNA法等，但目前仍不適合商業(yè)化生產(chǎn)

。
目前市場(chǎng)上很多小肽飼料并不符合小肽的定義，簡(jiǎn)單的把寡肽甚至分子量較小的多肽稱為小肽，這樣做忽

略了小肽和寡肽、多肽的區(qū)別。肽鏈的長(zhǎng)度是影響肽吸收的原因之一，肽轉(zhuǎn)運(yùn)主要限于二肽、三肽, 對(duì)長(zhǎng)

鏈肽大量轉(zhuǎn)運(yùn)的可能性很少，這樣的飼料產(chǎn)品其實(shí)并不具有小肽在吸收方面的特點(diǎn)。
2影響小肽飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的因素
作為一種飼料產(chǎn)品，小肽飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值一方面在于小肽在吸收方面相對(duì)于FAA的巨大優(yōu)勢(shì)，另一方面取

決于飼料本身的質(zhì)量。
2.1影響小肽吸收的因素
1 肽鏈的長(zhǎng)度
目前的研究認(rèn)為，二肽和三肽能完整的吸收，但三肽以上的寡肽是否能完整吸收還有爭(zhēng)議。Grimble 等

[12]報(bào)道，腸道對(duì)大于三肽的寡肽吸收慢于小肽，腸道內(nèi)胰蛋白酶、肽酶對(duì)其進(jìn)一步水解可能是寡肽吸收

的主要限速反應(yīng)。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)水解產(chǎn)物中的寡肽和FAA所占比例較高時(shí)，寡肽能誘導(dǎo)腸肽酶的分泌，在腸肽

酶的進(jìn)一步作用下水解釋放出FAA，使FAA的濃度提高，從而加劇 FAA吸收的競(jìng)爭(zhēng)抑制，進(jìn)一步減慢肽的吸

收速。但是反芻動(dòng)物瘤胃細(xì)菌對(duì)大分子肽的攝取速度比小分子肽和氨基酸攝取速度快[13,14]，且利用效

率更高[15]，細(xì)菌對(duì)低分子量的蛋白質(zhì)降解產(chǎn)物（小分子量的肽和氨基酸）發(fā)酵較快，但高分子肽更容易

轉(zhuǎn)化為菌體蛋白質(zhì)[16]。
2 肽的氨基酸殘基組成
肽的氨基酸殘基組成是影響肽吸收的另一個(gè)重要因素。當(dāng)賴氨酸(Lys)與甘氨酸(Gly)形成二肽時(shí)，Lys處

于N端比處于C端吸收得更快；而Lys與谷氨酸(Glu)形成二肽時(shí)，Lys處于C端時(shí)吸收更為迅速[17]。L型小

肽比D型小肽更易被動(dòng)物吸收，中性小肽比酸堿性小肽更易被動(dòng)物吸收。當(dāng)肽是由疏水性且體積較大的底

物，如Met和Phe構(gòu)成時(shí)，載體對(duì)肽就有較高的親合力，因而轉(zhuǎn)運(yùn)速度較快；而親水性且?guī)щ姾傻男‰?，載

體對(duì)其親合力較小[18]，所以轉(zhuǎn)運(yùn)速度較慢。樂國(guó)偉等[19]研究發(fā)現(xiàn)含疏水性的苯丙氨酸的肽類對(duì)肽載體

的親和力高，以肽形式吸收可能是苯丙氨酸吸收本身的需要。
Broderick等[20]研究了混合瘤胃微生物對(duì)中性肽的代謝，發(fā)現(xiàn)含有3個(gè)丙氨酸殘基的肽比其它中性二肽、

三肽的代謝快，其次是Leu(Gly)2、Gly(Ala)2，然后是其它中性三肽、二肽代謝速度相似，但Gly-Pro較

慢，(Ala)2代謝較Gly-Pro快，在由丙氨酸殘基構(gòu)成的肽中，三肽大于四肽，然后是五肽，二肽最慢。由

此可見，肽鏈的氨基酸序列對(duì)肽的利用率也有影響。通過研究Lys-Pro肽、Lys-Ala肽、Met-Ala肽的效應(yīng)

發(fā)現(xiàn)，前兩種肽的代謝速度比后一種肽慢4倍。
3肽的來源
程茂基等[21]通過體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，反芻動(dòng)物對(duì)瘤胃液肽的攝取量和攝取率顯著高于大豆肽（P<0.05）和玉

米肽（P<0.05），表明肽來源不同能影響其吸收和利用。
2.2決定小肽飼料質(zhì)量的因素
1小肽飼料中小肽的含量
小肽是小肽飼料中的有效成份。不同生產(chǎn)工藝下小肽飼料中小肽的含量是不同的，小肽含量的高低決定了

小肽飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。小肽含量既要求飼料中要有足夠的肽又對(duì)這些肽的分子量有要求。
2小肽飼料中高價(jià)值氨基酸的含量
小肽最終是要進(jìn)動(dòng)物體內(nèi)充當(dāng)動(dòng)物組織蛋白的氨基酸殘基的。不同的氨基酸在體內(nèi)的重要性大不相同。以

賴氨酸、蛋氨酸等限制性氨基酸的殘基為主要組成成份的小肽必然具有更高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。另外，一些氨基

酸之間存在拮抗作用，包含這些氨基酸的殘基的小肽其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值也會(huì)高于其他小肽。
3 小肽飼料的特殊功能
除了作為蛋白飼料應(yīng)具有的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值外小肽飼料還有許多其他的功能。首先，小肽能促進(jìn)微量元素的吸收

。以小肽為主要配體的微量元素螯合物，利用小肽的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制和特點(diǎn)[22]，可能以整體的形式被轉(zhuǎn)運(yùn)

，因而能夠促進(jìn)微量元素的吸收，更有利于微量元素生物學(xué)效價(jià)的提高。大量的研究說明小肽絡(luò)合物形式

的礦物離子更易被機(jī)體吸收[23,24,25]，而且小肽螯合物的穩(wěn)定性較氨基酸螯合鹽（AAC）更高[26]。其

次，小肽能促進(jìn)動(dòng)物對(duì)其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率。Siddons（1975）通過在綿羊日糧中添加不同水平的小肽

蛋白替代植物蛋白（各處理組總蛋白水平相同），發(fā)現(xiàn)動(dòng)物對(duì)能量的利用率有顯著的提高（P<0.05）。第

三，小肽能提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能。施用暉等[27]報(bào)道，在蛋雞基礎(chǔ)日糧中添加肽制品后，其產(chǎn)蛋率和飼料

轉(zhuǎn)化率顯著提高，蛋殼強(qiáng)度也有提高的趨勢(shì)。曹志軍等[28]試驗(yàn)結(jié)果表明，荷斯坦牛日糧中添加小肽比不

添加小肽能較明顯地提高乳蛋白率（P<0.05），同時(shí)添加保護(hù)性小肽比添加普通小肽產(chǎn)奶量提高10.91%。

王恬等[29]試驗(yàn)表明，添加小肽營(yíng)養(yǎng)素后，無論是乳蛋白還是乳脂率，試驗(yàn)組均比對(duì)照組有所提高，且隨

著小肽營(yíng)養(yǎng)素添加濃度的增加有提高的趨勢(shì)，小肽營(yíng)養(yǎng)素對(duì)乳品質(zhì)的提高具有一定的促進(jìn)作用。不同的小

肽在這些生理功能中的貢獻(xiàn)是不一樣，因此某些特定種類的小肽的含量決定了小肽飼料的特定功能。
3 小肽的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的評(píng)價(jià)指標(biāo)及測(cè)定方法
3.1 評(píng)價(jià)小肽飼料價(jià)值的指標(biāo)
根據(jù)小肽的概念和影響其價(jià)值的因素，我們可以把小肽飼料的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)分成以下幾個(gè)方面進(jìn)行考慮：
（1）小肽的總含量
所有的小肽飼料都含有載體、稀釋劑等成分，其比例根據(jù)產(chǎn)品的生產(chǎn)方式、廠家及市場(chǎng)定位而有所不同。

小肽是飼料中的有效成分，它在飼料中所占的比例是影響小肽飼料質(zhì)量的最重要因素。因此必須測(cè)定飼料

中小肽的總含量。
（2）平均肽鏈長(zhǎng)度
小肽指的是二肽或三肽，大于三肽的并不容易被動(dòng)物機(jī)體吸收。許多小肽飼料中的肽其實(shí)是寡肽和多肽，

這些肽分子仍然要經(jīng)過消化后才能吸收，飼料中平均肽鏈長(zhǎng)度是影響小肽質(zhì)量的一個(gè)重要因素，反映了飼

料中有效的小肽所占的比例。
（3）特定小肽的含量
小肽由20多種氨基酸殘基中的兩個(gè)或三個(gè)構(gòu)成，這些氨基酸殘基的任意一種組合都是一種特定的小肽，再

加上不同的分子構(gòu)象，小肽的家族非常龐大。不同小肽被吸收的能力、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和生理功能并不相同。因

此測(cè)定特定小肽的含量也是評(píng)價(jià)小肽營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的重要指標(biāo)。
（4）特定氨基酸的含量
對(duì)動(dòng)物機(jī)體來說，不同的氨基酸具有不同的價(jià)值。小肽作為動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基酸來源，其所包含

的氨基酸決定了飼料的價(jià)值。因此小肽飼料中特定氨基酸的含量也是一個(gè)非常重要的指標(biāo)。
3.2小肽飼料價(jià)值指標(biāo)的測(cè)定方法
3.2.1 小肽總含量的測(cè)定方法
（1）雙縮脲法
雙縮脲法的原理是利用蛋白質(zhì)和肽分子中含有肽鍵（CO-NH-），具有雙縮脲反應(yīng)的特性。在堿性溶液中蛋

白質(zhì)或肽與Cu2+形成紫紅色的絡(luò)合物，絡(luò)合物顏色的深淺與其濃度成正比。所以它是蛋白質(zhì)和肽類物質(zhì)的

特異性測(cè)定方法。雙縮脲法測(cè)定靈敏度不高，一般測(cè)試濃度在1-10mg之間。此法尤其適合于肽類物質(zhì)的測(cè)

定，但只能測(cè)定二肽以上的肽, 造成測(cè)定結(jié)果偏低。對(duì)于小肽來說，雙縮脲法會(huì)把三肽以上的肽也算在小

肽里面，因此只適合可以確定飼料中只含有三肽的飼料。
（2）福林-酚法（Lowry法）
福林-酚法是在雙縮尿法的基礎(chǔ)上發(fā)展起米的。首先是在堿性溶液中蛋白質(zhì)與Cu2+形成紫紅色的絡(luò)合物，

然后該絡(luò)合物再與還原磷鉬酸-磷鎢酸試劑反應(yīng)產(chǎn)生深藍(lán)色溶液。此法適合于蛋白類的定量分析，靈敏度

較高，測(cè)試范圍在25-250μg之間，但專一性不強(qiáng)。同雙縮脲法一樣，此法也只適合可以確定飼料中只含

有三肽的小肽飼料的檢測(cè)。
（3）三氯乙酸（TCA）法
三氯乙酸法的原理是利用大分子的蛋白質(zhì)在TCA溶液中沉淀，除去酸不溶蛋白質(zhì)，然后測(cè)定酸溶蛋白含量

。國(guó)外大量資料表明在蛋白質(zhì)酶水解的研究中測(cè)定水解度，通常在酶解液中加入TCA溶液，是為水解的大

分子蛋白質(zhì)沉淀，而與小分子的酸溶蛋白成分，即肽類和FAA離開，測(cè)定酸溶蛋白占總蛋白的含量，求得

水解度，即酸溶蛋白占總蛋白的百分比。日本不二制油公司將TCA可溶蛋白做為大豆肽的常規(guī)檢測(cè)方法。

大豆肽粉行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中酸溶蛋白質(zhì)的測(cè)定方法就是將肽粉經(jīng)酸沉處理后用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB14771-1993）的方法

測(cè)定酸溶蛋白，游離氨基酸含量測(cè)定方法，采用GB/T14965食物中氨基酸的測(cè)定方法，酸溶蛋白質(zhì)含量減

游離氨基酸含量即為大豆肽含量。
3.2.2平均肽鏈長(zhǎng)度的測(cè)定
測(cè)定平均肽鏈長(zhǎng)度需要測(cè)定α-氨基氮（α-NH2-N）含量和總氮含量。用甲醛滴定法測(cè)定α-NH2-N含量，

總氮（TN）用凱氏定氮法測(cè)定[30]。然后計(jì)算平均肽鏈長(zhǎng)度[31,32,33] ，公式如下：

3.2.3 特定小肽和氨基酸含量的測(cè)定
（1）紫外光吸收法
分子中含有芳香族氨基酸（苯丙氨酸，酪氨酸，組氨酸的等）的肽，在280nm處有最大吸收峰。肽在最大

吸收峰λmax波長(zhǎng)處的吸光值的強(qiáng)弱與蛋白的濃度成正比。這種方法適合對(duì)分子中含有芳香族氨基酸的肽

進(jìn)行定量分析，對(duì)不含芳香族氨基酸的肽，靈敏度較低。
（2）消光系數(shù)法
分子中含有芳香族氨基酸殘基的肽，在280nm處有特定吸光值。肽分子中所含氨基酸數(shù)量不同，它們?cè)?br />
280nm處吸光值的強(qiáng)弱就有差異。因此，每一種純的單一肽在280nm處有一個(gè)特定的消光系數(shù)。如果已知某

個(gè)小肽的消光系數(shù)，只要在280nm處測(cè)定出該蛋白吸光值就可以計(jì)算出其相應(yīng)的含量。
（3）考馬斯亮蘭法（Bradford法）
1976年由Bradford建立的考馬斯亮蘭法，是根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理設(shè)計(jì)的。這種蛋白質(zhì)測(cè)定法具

有超過其他幾種方法的突出優(yōu)點(diǎn)，因而正在得到廣泛的應(yīng)用。這一方法是目前靈敏度最高的蛋白質(zhì)測(cè)定法

?？捡R斯亮蘭G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合，使染料的最大吸收峰的位置由465nm變?yōu)?95nm，

溶液的顏色也由棕黑色變?yōu)樘m色。經(jīng)研究認(rèn)為，染料主要是與蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸（特別是精氨酸）和

芳香族氨基酸殘基相結(jié)合。在595nm下測(cè)定的吸光度值A(chǔ)595，與蛋白質(zhì)濃度成正比。Bradford法的突出優(yōu)

點(diǎn)是：（a）靈敏度高，據(jù)估計(jì)比Lowry法約高四倍。（b）測(cè)定快速、簡(jiǎn)便，只需加一種試劑。完成一個(gè)

樣品的測(cè)定，只需要5分鐘左右。（c）干擾物質(zhì)少。此法可以用來測(cè)定含堿性氨基酸的肽的含量。
（4）層析比色法
通過層析柱將不同分子量的肽或氨基酸一一分開，用比色法測(cè)定其濃度，再采用已知分子量的肽類和氨基

酸做標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而計(jì)算出一定分子量范圍內(nèi)肽類的含量。該方法與以前的方法相比有很大的進(jìn)步，但基

本上仍屬化學(xué)法，操作煩瑣，人為誤差較大。
（5）高效凝膠色譜法（HPGC）
該法在層析比色法的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了儀器自動(dòng)化的改進(jìn)，準(zhǔn)確性高，重現(xiàn)性好，數(shù)據(jù)處理科學(xué)，能真是地

表示出蛋白質(zhì)和肽類的分子量分布。分子量分布的測(cè)定不但能定性的鑒定肽類產(chǎn)品的優(yōu)劣、真?zhèn)?，而且?br />
定量的表示出不同分子量范圍的肽的百分含量。國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)《轉(zhuǎn)移因子溶液》WS1-XG-036-2000中，將

該方法做為轉(zhuǎn)移因子（一種肽類）的標(biāo)準(zhǔn)分析方法。
（6）高效液相色譜法法（HPLC）
高效液相色譜法是20世紀(jì)60年代處發(fā)展起來的一種新型分離分析技術(shù)，隨著不斷改進(jìn)于發(fā)展，目前已成為

應(yīng)用極為廣泛的化學(xué)分離分析的重要手段，是常用的小肽分析方法，分兩種。一種用反相C18柱，用乙睛

和0.1% TFA或高氯酸的水溶液進(jìn)行梯度洗脫分離，有的還需加入十二烷基磺酸鈉。另一種是以分離氨基酸

的經(jīng)典反相高效液相色譜（HPLC）條件，對(duì)小肽進(jìn)行柱前或柱后衍生化來進(jìn)行測(cè)定。鄒娟娟等[34]研究了

反相HPLC 分離分析化學(xué)合成的O8肽的方法。歐宇[35]認(rèn)為HPLC測(cè)定小肽含量簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，結(jié)果穩(wěn)定，可以

用來測(cè)定已知小肽在瘤胃中的釋放情況。馮健等[36]使用HPLC法測(cè)定草魚血漿肽和蝦蛋白肽中小肽總量。

但是該法成本高、耗時(shí)長(zhǎng)，不適用一般飼料企業(yè)的快速測(cè)定。劉慶生等[37]研究了新型離子色譜的氨基酸

分析系統(tǒng)和積分脈沖安培檢測(cè)對(duì)小肽的檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)此方法無需衍生，可以直接分離測(cè)定小肽和氨基酸

，而且操作簡(jiǎn)單，且重現(xiàn)性好。其流動(dòng)相為水、氫氧化鈉和醋酸鈉溶液，有環(huán)境污染小、危險(xiǎn)性小和排放

少等優(yōu)點(diǎn)。
（7）CE-ESI-MS聯(lián)用法
毛細(xì)管電泳（CE）作為一種高效、快速的分離方法，樣品用量少，已被廣泛應(yīng)用小肽和蛋白質(zhì)的分離分析

。質(zhì)譜（MS）能夠進(jìn)行微量鑒定，并提供精確的分子量和結(jié)構(gòu)信息，使其成為小肽和蛋白質(zhì)檢測(cè)和序列測(cè)

定的強(qiáng)有力的支撐技術(shù)之一。其中，電噴霧（ESI）質(zhì)譜作為一種軟電離技術(shù)，易與常規(guī)的高分辨率分離

方法如高效液相色譜、毛細(xì)管電泳等實(shí)現(xiàn)在線聯(lián)用，具有分離效率高、檢測(cè)靈敏度高和樣品定性方便等特

點(diǎn)，因而在小肽和蛋白質(zhì)的測(cè)定中得到廣泛的應(yīng)用。梁振等[38]研究了CZE-ESI-MS聯(lián)用測(cè)定小肽混合物的

技術(shù)，其檢測(cè)限可達(dá)4.2~33pg。
4 總結(jié)
隨著小肽制品商業(yè)化的不斷深入，制定科學(xué)、統(tǒng)一的小肽標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)小肽飼料進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的評(píng)定已非常必

要?？茖W(xué)的測(cè)定方法是小肽標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)尺。明確小肽的概念，了解影響小肽飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的因素是評(píng)定小肽

價(jià)值的前提，在此基礎(chǔ)上我們要選擇必要的測(cè)定指標(biāo)，然后篩選相應(yīng)的測(cè)定方法。目前，測(cè)定小肽含量的

方法有很多種，但從中發(fā)展出一套科學(xué)有效的測(cè)定方法做為小肽標(biāo)準(zhǔn)的尺度仍是一個(gè)困難的任務(wù)，有待進(jìn)

一步的研究。

參考文獻(xiàn)
[1]Baker D H. Amino acid nutrition of the chick[a].in: Draper, H. H. ed. Advances in

nutrition research. Plenum. Pub. Corp., New. York.1977.299
[2]Pinchasov Y. Broiler chick response to lowprotein diets supplement-ed with synthetic

amino acids[J]. Poul. Sci., 1990, 69:1950~1955
[3]王鏡巖. 生物化學(xué)[M]. 北京：高等教育出版社，2002.163~164.
[4]黃翠芳,劉華貴,姜琳琳. 小肽的研究進(jìn)展[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2006, (6):18~20
[5]王建峰,樂國(guó)偉. 小肽在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)中的應(yīng)用[J].飼料工業(yè),2006,27(7):9~11
[6]Hara H, Funabiki R, Iwata M, et al. Prota labsorption of small peptides in rats under

undrestraied conditions [J]. J. Nutr., 1984, 114:1122~1129
[7]樂國(guó)偉.寡肽在家禽蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)中的作用[D].四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，1996
[8] Rerat A. Amino acid absorption and production of pancreatichormones in non-anaesthetized

pigs after duodenal infusions of amilk enzymic hydrolysate or of free amino acids[J]. Brit.

J Nutr, 1988, 60:121~136
[9]Backwell F R C. Quantification of cireulating peptides assessment of peptide uptake

across the gastrointestinal tract of sheep[J]. Anim. Sci., 1997(75):3 315~3 322
[10]Pocius P A, Clark J H,Baumrucker C R. Glutathione in bovine blood: possible source of

amino acids for milk protein synthesis[J]. J. Dairy Sci., 1981, 64:1551~1554
[11]Backwell F R. peptide utilization by tissues: current status and applications of stable

isotope procedures[J]. Proc Nutr Soc. 1994 Nov, 53(3):457~464.
[12]Grimble G K, Keohane P P, Higgins B E, Effect of peptide chain length on amino acid and

nitrogen absorption from two lactalbumin hydrolysates in the normal human jejunum

[J].Clinical science (London,England:1979), 1986,71(1):65~69.
[13] Chen Sniffen C J, Rssell J B. Concentration and destimated flow of peptides from the

rumen of dairy cattle: Effects of protein quantity, protein solubility and feeding

frequency[J]. J. Dairy sci, 1987, 70:983~992
[14] Broderick G A, Craig W M. Metabolism of peptides and amino acidsduring in vitro protein

degradation by mixed rumen or ganisms[J]. J. Dairy Sci., 1989, 72:2540~2548
[15]Hooever W H. Chemical factors involved in ruminal digestion[J]. Anim. Sci., 1991,

69:2755~2766
[16]Wright D E. Metabolism of peptides by rumen microorganisms[J]. Appl. Microbiol, 1967,

15:547
[17]Burston D, Matthews D M. Intestinal transport of dipeptides containing acidic and basic

L-amino acids and a neutral D-amino acide[J]. Clinical science, 1972, 42(1):4
[18]Matthews D M. Protein absorption: Development and present State of the subject[M]. Wily

-Liss, New York. 1991
[19]樂國(guó)偉,施用暉,楊鳳. 肽在動(dòng)物蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)中的作用──小肽在動(dòng)物氨基酸吸收中的作用[J].四川農(nóng)

業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1996，(s1):19-26
[20]Broderick G A, Craig W M. Metabolism of peptides and amino acidsduring in vitro protein

degradation by mixed rumen or ganisms[J]. J. Dairy Sci, 1989, 72:2540~2548
[21]程茂基,盧德勛,王洪榮,等.培養(yǎng)液中不同來源肽攝取規(guī)律的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2004, 31

(1):82~86
[22]Du Z, Hemken R W, Jackson J A, et al. Utilization of copper in copper proteinate, copper

lysine, and cupric sulfateusing the rat as an experimental model[J]. J. Anim. Sci., 1996,

74:1657~1663
[23]李永富，潘茹芳. 小肽絡(luò)合鐵對(duì)新生仔豬補(bǔ)鐵效果的研究[J]. 飼料研究，2000(2):11~13
[24] Zambonino J, Cahu C, Peres A. Partial substitution of di-and tripeptides for

nativeproteins in seabass diets improves dicent rarchus lab raxlarval development[J]. J.

Nutr., 1997, 127:608~614
[25]喬偉.小肽鉻的制備及其吸收效應(yīng)探討[D].四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004
[26]楊頻,高飛. 生物無機(jī)化學(xué)原理[M].北京:科學(xué)出版社，2002:26~29
[27]施用暉,樂國(guó)偉,等. 產(chǎn)蛋雞日糧中添加酪蛋白肽對(duì)產(chǎn)蛋性能及血漿肽和鐵、鋅含量的影響[J].四川農(nóng)

業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1996(14):46~50
[28]曹志軍,李勝利,丁志民.日糧中添加小肽對(duì)奶牛產(chǎn)奶性能影響的研究[J].飼料工業(yè),2004,25(4):35~37
[29]王恬,貝水榮,傅永明,等.小肽營(yíng)養(yǎng)素對(duì)奶牛泌乳性能的影響[J].中國(guó)奶牛,2004,2:12~14
[30]陳鈞輝主編.生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)(第三版)[M].北京:科學(xué)出版社,2003.57~58
[31] Adler - Nissen J. Enzymic hydrolysis of Food Proteins. Elsevier Applied Science[M].

Publishers NewYork, 1986.13~14
[32] Hyung J H, Song H B, Dong O N. Debittering of corn gluten hydrolysate with active

carbon[J]. J. Sci. Food Agric, 2000, 80:614~618
[33]鄧勇,馮學(xué)武. 大豆多肽分子質(zhì)量分布與苦味的確定[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2001,6(4):98~102
[34]鄒娟娟,張慶合,等. O8肽的HPLC分析與制備研究[J]. 分析測(cè)試學(xué)報(bào),2004,23(4):37~39
[35]歐宇. 不同蛋白源對(duì)綿羊瘤胃肽釋放的影響及抗瘤胃降解小肽的研究[D]. 北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué),2003.
[36]馮健,高玲,等. 草魚日糧中蝦蛋白肽對(duì)幼齡草魚生長(zhǎng)性能的影響[J]. 中山大學(xué)學(xué)報(bào), 2004, 43

(2):100~103
[37]劉慶生，張君濤，等.離子色譜法測(cè)定三種小肽[J].現(xiàn)代科學(xué)儀器,2006,(1):95~96
[38]梁振,張維冰,張玉奎. CE-ESI-MS聯(lián)用測(cè)定小肽混合物的研究[J].高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào), 2004, 25