小檗堿對實驗性大腸桿菌病的療效觀察

apple12151007 · 發(fā)表于 2010-9-26 17:05:14

　　小檗堿對實驗性大腸桿菌病的療效觀察

　　于鳳芝，喬立東，張永東，楊新建張潔(北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學院畜牧，102442)

　　[摘要] 大腸桿菌病是畜禽常見傳染病之一，已成為現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)的一大障礙。本實驗通過給小鼠腹腔注射大腸桿菌菌液造成實驗性大腸桿菌病，通過臨床觀察、病理組織學觀察,研究小檗堿對大腸桿菌病的防治效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)小檗堿對大腸桿菌病有明顯的防治效果。
　　[關鍵詞]小檗堿實驗性大腸桿菌病療效
　　小檗堿為毛莨科黃連屬植物黃連、黃柏的根莖提取的主要成分。長期用于解熱、解毒、抗腸道細菌感染，具有抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗癌等方面的藥理作用[1]。本實驗通過給小鼠腹腔注射大腸桿菌菌液造成實驗性大腸桿菌病，通過臨床觀察、病理組織學觀察,研究小檗堿對大腸桿菌病的防治效果，為篩選適合臨床治療豬大腸桿菌病的中藥制劑提供理論依據(jù)。
　　1 材料
　　1.1 試驗動物
　　健康昆明小鼠(20g左右)35只購自北京實驗動物中心
　　1.2 主要試劑
　　小檗堿：天津市中醫(yī)藥研究所提純標準品(純度>97%)
　　大腸桿菌K88菌種：由微生物實驗室提供
　　2.試驗方法
　　2.1 大腸桿菌菌液及小檗堿溶液的制備
　　大腸桿菌菌液制備: 試驗前先將大腸桿菌接種麥康凱培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)24h，挑選典型單個菌落1-2個接種于50ml 普通肉湯培養(yǎng)基中，370C靜止培養(yǎng)24h后取出，取20ml肉湯培養(yǎng)物離心，棄去上清液，用生理鹽水稀釋至20ml。備用。
　　小檗堿溶液： 0.5mg/ml.配制小檗堿溶液，取6mg小檗堿溶于12ml生理鹽水。濾菌后備用。
　　2.2 大腸桿菌K88致小鼠腹瀉模型的建立
　　昆明小鼠飼養(yǎng)1周，觀察情況無異常，用直腸試紙棉培養(yǎng)檢測ETEC為陰性。感染前,停止喂食12h，腹腔注射0.2ml菌液，2h后正常喂食。對照組處理的不同之處是把菌液改為生理鹽水。感染后對動物的觀察:每隔3h觀察1次，記錄動物的發(fā)病情況。動物發(fā)病的定義:拉稀便;肛周粘附有稀便或粘液或血液;毛松，活動少;進食少或不進食，出現(xiàn)以上癥狀的任一項為發(fā)病。
　　2.3 試驗分組
　　小鼠30只(雄雌各半)，分為三組，每組10只：
　　(A)對照組：生理鹽水0.2ml腹腔注射
　　(B)自然恢復組：同時生理鹽水0.2ml，大腸桿菌0.2ml腹腔注射
　　(C)中藥治療組：小檗堿0.2ml，大腸桿菌0.2ml腹腔注射。3小時后肌注0.2ml小檗堿
　　每3小時觀察記錄臨床變化及死亡情況，24小時后處死，常規(guī)病理剖解，取小腸固定于10%福爾馬林液中，常規(guī)石蠟切片觀察組織學變化。
　　3 結(jié)果
　　3.1死亡率攻毒4小時后B組發(fā)現(xiàn)小鼠開始死亡。12小時后統(tǒng)計結(jié)果如下：
　　A組(生理鹽水對照組)：無死亡，0%
　　B組(自然恢復組)：死亡5只，50%
　　C組(中藥治療組)：死亡1只，10%
　　3.2 臨床變化
　　攻毒后發(fā)現(xiàn)自然恢復組的小鼠毛發(fā)凌亂且無光澤，精神沉郁，反應遲緩，嗜睡，拒絕進食，拉稀，呼吸急促，部分小鼠抽搐死亡。12小時中共死亡5只小鼠，具體死亡時間依次為：攻毒后4小時、4.5小時、7.5小時、8小時、8.5小時。而中藥治療組的小鼠精神較好。反應較自然恢復組敏捷。攻毒6小時后有小鼠開始進食?；謴捅容^迅速。12小時內(nèi)死亡1只小鼠，具體死亡時間為攻毒后8小時。
　　3.3 剖檢結(jié)果
　　[1] 自然恢復組小鼠的剖檢情況：打開腹腔有腥臭味，肝臟上有出血點及壞死點，肝臟、脾舯大，腸黏膜充血，出血嚴重。
　　[2] 中藥治療組小鼠的剖檢情況：腹腔比較干凈，腸出血較少，肝臟無出血壞死。
　　[3] 生理鹽水對照組的小鼠剖檢情況(即正常小鼠情況)。
　　4 討論
　　目前，豬的大腸桿菌病一直是危害養(yǎng)豬業(yè)的一大疾病。據(jù)有關報道，在美國新生仔豬的腹瀉疾病中，由大腸桿菌引起的占到45%以上;臺灣有15%～25%的仔豬因此病無法育成，每年直接損失達36—39億元;在國內(nèi)仔豬黃、白痢的發(fā)病率高達20%—60%，個別豬場出現(xiàn)混合性感染或繼發(fā)性感染，病死率高達60%以上[2]。近年來，由于多種抗生素的長期濫用，造成耐藥菌株的種類越來越多，并且其致病力變得越來越強，對豬的危害性越來越大。因此有必要開發(fā)既可有效防治大腸桿菌病、藥理作用機制明確，且又能替代抗生素的新型中藥制劑。
　　在防治大腸桿菌病方面，很多中藥方劑有較好的療效[3-5]。小檗堿已被證明對多種急慢性炎癥模型有明顯的抑制作用。本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)小檗堿對大腸桿菌病療效顯著并且快速。本實驗結(jié)果為臨床篩選治療大腸桿菌病的中藥提供理論依據(jù)，但對于大腸桿菌的致病機理以及小檗堿的作用機制還需進一步深入研究。
　　參考文獻
　　[1] 朱坤杰，李濤.小檗堿的藥理研究及臨床應用進展.藥物研究，2000，9(1)：22-23
　　[2] 吳文福，巫月生.豬大腸桿菌病的流行特點.廣東畜牧獸醫(yī)科技，2001，26(1)：13~15
　　[3] 曹國文，姜永康.中草藥抗豬大腸桿菌制劑的研制與效果觀察，黑龍江畜牧獸醫(yī)，2002，(10)：33-34
　　[4] 趙恒章，王三虎，趙坤.中草藥注射液對仔豬大腸桿菌病治療效，河南職業(yè)技術師范學院學報，2003，3：53-55
　　[5] 中王會香，戴揚川，袁天旭.“三黃湯”合劑治療仔豬白痢病的效果觀察，四川畜牧獸醫(yī)，2000，6(27)：27
　