飼料中三聚氰胺檢測(cè)及其危害

apple12151007 · 發(fā)表于 2010-10-14 13:21:44

　　飼料中三聚氰胺檢測(cè)及其危害

　　謝榮國武曉宏楊俊華

　　摘要三聚氰胺是一種用途廣泛的有機(jī)化工原料，其含氮量達(dá)66%左右，一些不法企業(yè)在飼料中大量添加，造成飼料中粗蛋白虛高的假相，不僅對(duì)養(yǎng)殖業(yè)具有嚴(yán)重影響，對(duì)人類健康也存在著嚴(yán)重威脅。本文就三聚氰胺的性質(zhì)、檢測(cè)及在飼料中添加的危害作一簡(jiǎn)要闡述，供大家參考。
　　一何謂三聚氰胺
　　1、三聚氰胺的定義
　　三聚氰胺(Melamine)是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料，目前是重要的尿素后加工產(chǎn)品。三聚氰胺簡(jiǎn)稱三胺，學(xué)名三氨三嗪，別名蜜胺、氰尿酰胺、三聚氰酰胺。
　　2、三聚氰胺的性質(zhì)
　　(1) 物理性質(zhì)：分子式C3N6H6或C3N3(NH2)3，分子量126.12，白色結(jié)晶粉末，無毒，無味。相對(duì)密度1570kg/m³，堆積密度700～90kg/m³。在常壓下，300℃升華，354℃分解。比熱1.473kJ/kg·℃。能溶解于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶;微溶于水、乙醇;不溶于乙醚、苯和四氯化碳。
　　(2)化學(xué)性質(zhì)：三聚氰胺顯弱堿性，與鹽酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成鹽。在中性或微堿性情況下，與甲醛縮合而成各種羥甲基三聚氰胺，但在微酸性中(PH值5.5～6.5)與羥甲基的衍生物進(jìn)行縮聚反應(yīng)而生成樹脂產(chǎn)物。
　　3、三聚氰胺的用途
　　三聚氰胺是一種用途廣泛的基本有機(jī)化工中間產(chǎn)品，最主要的用途是作為生產(chǎn)三聚氰胺/甲醛樹脂(MF)的原料。三聚氰胺還可以作阻燃劑、減水劑、甲醛清潔劑等。該樹脂硬度比脲醛樹脂高，不易燃，耐水、耐熱、耐老化、耐電弧、耐化學(xué)腐蝕、有良好的絕緣性能、光澤度和機(jī)械強(qiáng)度，廣泛運(yùn)用于木材、塑料、涂料、造紙、紡織、皮革、電氣、醫(yī)藥等行業(yè)。
　　二三聚氰胺檢測(cè)
　　目前，三聚氰胺檢測(cè)方法有試劑盒檢測(cè)法(ELISA)和液相檢測(cè)法、氣質(zhì)檢測(cè)法。
　　1、試劑盒檢測(cè)法(ELISA)
　　方法原理：利用萃取液通過均質(zhì)及震蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺進(jìn)行免疫測(cè)定。
　　(1)樣品處理稱取1.0g均質(zhì)過的飼料樣品于離心管中，加入10 ml甲醇充分混合;15000轉(zhuǎn)離心10分鐘;取上清夜1 ml于小試管中用氮?dú)獯蹈?加入2.5 ml10%甲醇/20mMPBS溶液充分溶解;移取100 µl進(jìn)行分析。
　　(2)ELISA檢測(cè)步驟將所有試劑及樣品提取液回升至室溫(20～28℃);用前按試劑盒要求稀釋所用試劑，取相應(yīng)數(shù)量的微孔條，插入框架;吸取100µl標(biāo)樣或樣品提取液到相應(yīng)的微孔;每孔加入50µl三聚氰胺HRP酶標(biāo)記物;輕輕混合60秒，孵育30分鐘(20～28℃);孵育完后，將微空中的溶液倒入水槽中，用250µl洗液洗板五次;在吸水紙上拍打，盡可能將水拍干;每孔加入100µl底物溶液，孵育30分鐘(20～28℃);每孔加入100µl終止液;用酶標(biāo)儀讀取450nm下的吸光值。
　　(3)作圖所獲得的標(biāo)準(zhǔn)和樣品吸光值的平均值除以0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值再乘以100為縱坐標(biāo)，以三聚氰胺濃度半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定被測(cè)樣品的濃度。
　　2、液相檢測(cè)法和氣相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)法
　　方法原理：① 試樣中的三聚氰胺用三氯乙酸溶液提取，提取液離心后經(jīng)混合型陽離子交換固相萃取柱凈化，洗脫物吹干后用甲醇溶液溶解，用高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定;②凈化后的洗脫液用氮?dú)獯蹈?，用N，O-雙三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)衍生化，以氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行定性和定量。
　　(1)樣品處理稱取5.00 g試樣，準(zhǔn)確加入50ml三氯乙酸溶液(10g/L)，加入2ml乙酸鉛溶液(22g/L)，搖勻，超聲提取20min ，靜置2min ，取上層提取液約30ml轉(zhuǎn)入離心管，在12000r/min 離心5min 。分別用3ml甲醇、3ml水活化混合型陽離子交換固相萃取柱，準(zhǔn)確移取10ml離心液分次上柱，控制過柱速度在1ml/min以內(nèi)，再用3ml水和3ml甲醇洗滌混合型陽離子交換固相萃取柱，抽干后用5% 氨化甲醇3ml洗脫，洗脫液50℃氮?dú)獯蹈?，?zhǔn)確加入2ml甲醇溶液，渦旋振蕩1 min，過0.45µm膜，用高效液相色譜儀測(cè)定三聚氰胺含量。
　　(2)衍生根據(jù)液相的定量結(jié)果將洗脫液稀釋成濃度約為0.5µg/ml。分別吸取稀釋液0.5ml用氮?dú)獯蹈?，加?50µl吡啶和250µl衍生試劑，加蓋，混勻，70℃反應(yīng)30min，同時(shí)吸取0.5µg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5ml 做同步衍生，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀確證。
　　(3)儀器條件
　?、?液相色譜條件
　　紫外檢測(cè)器，波長(zhǎng)240nm;色譜柱：ZORBAX Eclipse XDB -C8，柱長(zhǎng)150mm，內(nèi)徑4.6 mm，粒度5µm;流動(dòng)相A ：B = 93 ：7(A ：稱取庚烷磺酸鈉2.02g和檸檬酸2.10g溶解，定容至1L;B：乙腈)，流動(dòng)相流速1.0mL/ min;進(jìn)樣量10µl。
　?、?氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀條件
　　色譜柱:VF-5ms 30m 0.25mm 0.25µm capillaiy column;進(jìn)樣口溫度：250℃;進(jìn)樣量：1µl;柱溫：起始溫度75℃，保持1min，以30℃/min升溫至300℃，保持2min;載氣：氦氣;流速：1.3mL/min;傳輸線溫度：280℃;溶劑延遲：5.5min;EM電壓：高于調(diào)諧電壓200V;離子阱溫度：220℃;選擇離子監(jiān)測(cè)：(M/Z)99，171，327，342。
　　(4)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
　　精密稱取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品0.1000 g，置于100ml容量瓶中，用甲醇溶液溶解、稀釋至刻度，濃度為1000µg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液;吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液5.00 ml，于50ml容量瓶中，用甲醇溶液定容至刻度，濃度為100 µg/ml的標(biāo)準(zhǔn)中間液 ;分別吸取標(biāo)準(zhǔn)中間液5ml、10ml、25ml、50 ml，于100ml容量瓶中，用甲醇溶液定容，濃度分別為5.0 µg/ml、10 µg/ml、25 µg/ml、50 µg/ml 、100 µg/ml。的標(biāo)準(zhǔn)工作液。
　　(5)結(jié)果計(jì)算
　　計(jì)算公式：X = C ·V·n/m
　　式中：
　　X—試樣中三聚氰胺的含量(mg /kg);
　　C—標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的試樣中三聚氰胺的濃度(µg/ml);
　　V—凈化后加入的甲醇溶液體積(ml);
　　m—試樣質(zhì)量(g);
　　n—稀釋倍數(shù)。
　　三三聚氰胺在飼料中的危害
　　1、“寵物毒糧”風(fēng)波
　　2007年3月，美國食品藥品管理局(FDA)在對(duì)連續(xù)死亡貓狗的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，數(shù)個(gè)知名品牌寵物飼料的主要原料小麥蛋白粉和大米蛋白濃縮物中，含有化學(xué)物質(zhì)三聚氰胺。隨后，更多含三聚氰胺的寵物飼料品牌被檢查出來。FDA要求廠方召回這些飼料的同時(shí)，發(fā)現(xiàn)涉及的兩種原料來自中國。美國食品藥品管理局(FDA)的調(diào)查已最終確證，導(dǎo)致寵物死亡的罪魁禍?zhǔn)?，是這些小麥蛋白粉和大米蛋白濃縮物里含有的一種名為三聚氰胺的化學(xué)物質(zhì)。這種物質(zhì)對(duì)人體和動(dòng)物的危害尚未被完全認(rèn)知，但已知的是，“如長(zhǎng)期和反復(fù)接觸作用，該物質(zhì)可能對(duì)腎發(fā)生作用”。 (《國際化學(xué)品安全手冊(cè)》第三卷)，“寵物毒糧”事件引起中美兩國政府和民眾高度關(guān)注。一時(shí)間，中國相關(guān)產(chǎn)品短期內(nèi)的出口在多個(gè)國家遭禁，美國媒體開始質(zhì)疑中國食品的安全性，甚至有個(gè)別媒體由此懷疑整個(gè)“中國制造”。
　　2、致富“捷徑”與制度“漏洞”
　　三聚氰胺是否可以加入食物和飼料，在此次事件前，科學(xué)界對(duì)此沒有過專門論證。在中國，三聚氰胺沒有進(jìn)入飼料添加劑名錄，但也無法律法規(guī)明令禁止。即使在美國，F(xiàn)DA此前也未對(duì)此種化學(xué)物質(zhì)有特別的規(guī)定，法律的漏洞為唯利是圖的商人們留下了空間。中國飼料業(yè)近年已趨于飽和，也形成了一些知名品牌，剛起步的小型飼料廠家已難以與品牌廠家競(jìng)爭(zhēng)。小飼料廠一般生產(chǎn)工藝原始且落后，其生產(chǎn)飼料的蛋白質(zhì)含量一般要比品牌廠家低數(shù)個(gè)百分點(diǎn)。而每低一個(gè)百分點(diǎn)，意味著每噸產(chǎn)品少賣50元至60元，一些小廠基本無利可圖。但是，添加三聚氰胺等化學(xué)原料可以在檢測(cè)中提高飼料的蛋白質(zhì)含量，這一方法很快在業(yè)內(nèi)傳開并被許多不良廠家大肆使用。目前國際上測(cè)定飼料蛋白質(zhì)含量通行的辦法叫“凱氏定氮法”，即以含氮的多少乘以一定系數(shù)得出蛋白質(zhì)含量。這套檢測(cè)辦法的問題在于，只要在飼料中添加一些含氮量高的化學(xué)物質(zhì)，就可在檢測(cè)中造成蛋白質(zhì)含量達(dá)標(biāo)的假象。
　　三聚氰胺成為不法廠商青睞的理想物質(zhì)之一。分子式顯示，其含氮量達(dá)66%左右。一些廠商添加三聚氰胺拉高飼料含氮量后，還可以在飼料中加入低價(jià)的淀粉等。這樣，他們的飼料不僅蛋白質(zhì)含量達(dá)標(biāo)，相比品牌廠家反而具備了價(jià)格優(yōu)勢(shì)，可以低價(jià)占領(lǐng)市場(chǎng)。由于歐美和東南亞國家的寵物飼料市場(chǎng)比國內(nèi)發(fā)達(dá)，且價(jià)格一般高于國內(nèi)，因此這些劣質(zhì)飼料多數(shù)銷往國外。
　　中國出口的產(chǎn)品分為法檢產(chǎn)品與非法檢產(chǎn)品。那些關(guān)系到人的健康安全、衛(wèi)生環(huán)保之類的產(chǎn)品被列入到強(qiáng)制檢驗(yàn)范圍，即法檢范圍。不涉及到這些方面的產(chǎn)品，就列入抽查范圍。照此解釋，上述企業(yè)產(chǎn)品出口時(shí)，即使標(biāo)明為寵物飼料，也為“非法檢范圍”，僅是抽查而已。寵物飼料只有國家強(qiáng)制要求，或出口國家有相關(guān)規(guī)定的話，才需要檢驗(yàn)。正是在這樣的監(jiān)管政策下，個(gè)別不法企業(yè)在飼料中大量添加三聚氰胺，并依靠低廉的價(jià)格獲得訂單，成功將產(chǎn)品順利出口。
　　在目前的飼料檢測(cè)中，除了對(duì)瘦肉精、蘇丹紅等少數(shù)違禁添加劑會(huì)進(jìn)行檢測(cè)，像三聚氰胺等絕大部分化工原料過去都未被列入檢測(cè)范圍，其原因是化工原料種類太多，不可能都列入檢測(cè)名錄。況且，瘦肉精、蘇丹紅等之所以要被檢測(cè)，也是發(fā)現(xiàn)相當(dāng)部分養(yǎng)殖戶違規(guī)使用后才列入的。今年4月11日，央視焦點(diǎn)訪談節(jié)目報(bào)道了一則“牛奶摻假”的新聞：奶站先往奶罐里注水，然后將蛋白粉、脂肪粉、麥芽糊精和VC鈉等添加劑摻入注水牛奶，最終達(dá)到乳品企業(yè)收奶的標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)際上，企業(yè)從利益角度出發(fā)，任意添加各種添加物的行為十分普遍，添加物的選擇也五花八門，種類繁多，時(shí)時(shí)更新?lián)Q代。相比之下，目前無論是在標(biāo)準(zhǔn)制定和產(chǎn)品檢測(cè)監(jiān)管上，都漏洞重重。
　　美國法律規(guī)定，在人類食品和絕大多數(shù)寵物食品中添加物質(zhì)，生產(chǎn)者必須向FDA做出正式申請(qǐng)，并提供大量數(shù)據(jù)和檢測(cè)結(jié)果來證明食用它的安全性。同時(shí)，政府研究部門也有責(zé)任通過大量檢測(cè)來證明這種物質(zhì)不會(huì)對(duì)身體造成傷害，并提出可使用的劑量和程度。而中國目前還沒有制訂出類似的規(guī)定。能使飼料中蛋白質(zhì)虛高的化學(xué)物質(zhì)不止三聚氫胺一種，像這種跟著突發(fā)事件“亡羊補(bǔ)牢”式的法規(guī)建設(shè)，只能被不法廠商牽著鼻子走。如此，下一個(gè)瘦肉精、下一個(gè)三聚氰胺總會(huì)出現(xiàn)。
　　可喜的是，此次事件發(fā)生后，中國政府采取了一系列措施阻止此類事件再次發(fā)生。4月中旬，國家農(nóng)業(yè)部發(fā)布貫徹實(shí)施《飼料生產(chǎn)企業(yè)審查辦法》的通知，規(guī)定要“及時(shí)處理生產(chǎn)條件發(fā)生重大變化、存在安全衛(wèi)生隱患等問題的企業(yè)，堅(jiān)決注銷不具備生產(chǎn)條件企業(yè)的《飼料生產(chǎn)企業(yè)審查合格證》，依法查處違規(guī)企業(yè)”。同年4月下旬，國家質(zhì)檢總局采取緊急措施，從173家植物源性蛋白出口企業(yè)抽取的399個(gè)樣品進(jìn)行檢測(cè);開展全國質(zhì)量監(jiān)督專項(xiàng)抽查，抽查包括奶粉、香腸、方便面等12類800批次食品。兩項(xiàng)檢測(cè)均未檢出三聚氰胺。隨后，政府將三聚氰胺列入出口法檢范圍。
　　四結(jié)束語
　　三聚氰胺雖是一種用途廣泛的有機(jī)化工原料，但在飼料中添加，不僅對(duì)養(yǎng)殖業(yè)具有嚴(yán)重影響，還對(duì)人類健康存在著嚴(yán)重威脅。開發(fā)無污染、無殘留的綠色飼料，提供無污染、無殘留的安全動(dòng)物性食品，成為當(dāng)前畜牧工作者迫在眉睫的任務(wù)。我們應(yīng)該大力推進(jìn)飼料科技進(jìn)步，制定和完善飼料行業(yè)政策法規(guī)，打擊攙雜使假、違規(guī)添加違禁物行為，全國上下齊心協(xié)力，共同確保飼料安全，使中國的飼料工業(yè)在新世紀(jì)健康發(fā)展!