全球基因工程實(shí)驗(yàn)室都在使用耐熱達(dá)93℃的DNA聚合酶……

saturnbio · 發(fā)表于 2010-12-7 12:47:30

本帖最后由 saturnbio 于 2010-12-7 12:52 編輯

當(dāng)飼料行業(yè)還在質(zhì)疑酶制劑是否可能做到天然耐熱的時(shí)候，天然耐熱93℃以上的DNA聚合酶早已在基因工程的PCR技術(shù)中普遍應(yīng)用。
PCR技術(shù)是指聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其英文Polymease Chain Reaction(PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個(gè)周期,循環(huán)進(jìn)行,使目的DNA得以迅速擴(kuò)增,具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡便、省時(shí)等特點(diǎn)。它不僅可用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎(chǔ)研究,還可用于疾病病的診斷或任何有DNA,RNA的地方．聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)又稱無細(xì)胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴(kuò)增技術(shù)。由美國科學(xué)家PE（Perkin Elmer珀金-埃爾默）公司遺傳部的Dr. Mullis發(fā)明，由于PCR技術(shù)在理論和應(yīng)用上的跨時(shí)代意義，因此Mullis獲得了1993年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。

技術(shù)原理　　
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。在

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。

　　但是，DNA聚合酶在高溫時(shí)會(huì)失活，因此，每次循環(huán)都得加入新的DNA聚合酶，不僅操作煩瑣，而且價(jià)格昂貴，制約了PCR技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展。發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受93℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。