維生素K3的檢驗(yàn)方法??！

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原理
在氨存在的條件下維生素K3與氰乙酸乙酯形成藍(lán)紫色物質(zhì)，在575nm下的吸光度值與維生素K3的濃度成正比，用分光光度計(jì)測定有色物質(zhì)的吸光度值，定量分析樣品中維生素K3的含量。本法檢出限為0.05mg。
2.適用范圍
本方法適用于強(qiáng)化食物及飼料中水溶性維生素K3的測定。
3.儀器
分光光度計(jì)
4.試劑
本實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析級，實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水。
（1） 0.1mol/L碘溶液：稱取25g KI 溶解于20ml水中，加入9.8g碘，混勻溶解，加水至750ml。貯存于棕色瓶中，避光保存24h。
（2） 0.1mol/L硫代硫酸鈉：將水煮沸后冷卻。稱取25g Na2S2O3·5H2O溶解于500ml含0.1g Na2CO3 的冷卻水中，并用冷卻的水稀釋至1000ml 。
（3） 淀粉指示劑：稱取2g可溶性淀粉，加于10ml水中，搖勻。然后緩慢加至200ml沸水中，煮2 min。
（4） 氨水+異丙醇（1+1）溶液：取異丙醇與等體積的濃氨水混合。
（5） 氰乙酸乙酯（30g/L）：取3g氰乙酸乙酯溶解于100 ml異丙醇中。
（6） VK3標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1 mg/ml）：準(zhǔn)確稱取50mgVK3標(biāo)準(zhǔn)品，轉(zhuǎn)至500ml棕色容量瓶中，用異丙醇溶解并定容至刻度。
5.測定步驟
所有操作均需避光進(jìn)行
5.1 提?。簻?zhǔn)確稱取約15g已混勻的樣品，準(zhǔn)確加入100ml水，攪拌10min，保證VK3充分溶解與混勻。過濾，如濾液渾濁，則反復(fù)過濾至澄清。
5.2 氧化：吸取40ml濾液至100 ml容量瓶中，加1～2滴淀粉指示劑，用0.1mol/L碘溶液滴定，至出現(xiàn)持續(xù)的藍(lán)色。向溶液中滴入1滴0.1mol/L Na2S2O3消除藍(lán)色。用水定容至刻度。
（注：碘溶液的作用是作為氧化劑氧化樣品中的還原性物質(zhì)，多余的碘溶液可使淀粉變成藍(lán)色，Na2S2O3則是去除多余的氧化劑，消除蘭色，以避免有色物質(zhì)影響測定。）
5.3 標(biāo)準(zhǔn)管和樣品管的制備：分別取2套20ml比色管，分別按表1順序加入VK3標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品提取液及試劑，制備標(biāo)準(zhǔn)管和樣品管。

用水定容至20ml，搖勻，放置20min。
（注：樣品管和標(biāo)準(zhǔn)管中水定容的體積與顯色強(qiáng)度、顯色的穩(wěn)定時(shí)間密切相關(guān)，如果定容體積過少，則色度較弱，且穩(wěn)定時(shí)間短。如按本方法的操作進(jìn)行，顯色反應(yīng)至少可以穩(wěn)定2小時(shí)。
5.4比色測定：用分光光度計(jì)于575cm波長下，以標(biāo)準(zhǔn)0管做空白管，調(diào)節(jié)儀器零點(diǎn)，測定各管吸光度值。
6.計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)VK3含量作橫坐標(biāo)，吸光度值作縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程。用樣品測定管與空白管吸光度值的差值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品管的VK3含量，然后計(jì)算出樣品中VK3的含量。


7.注意事項(xiàng)
（1） 同一實(shí)驗(yàn)室平行測定或重復(fù)測定結(jié)果的相對偏差絕對值＜10%。
（2） 天然食物中不含有維生素K3，只有部分強(qiáng)化食物可能用VK3作為強(qiáng)化劑。有文獻(xiàn)報(bào)道人工合成維生素K3可能有一定的毒副作用，盡管目前還沒有有力的證據(jù)支持這一論點(diǎn)，但是現(xiàn)在市場上應(yīng)用維生素K3作為強(qiáng)化劑的產(chǎn)品較少見。飼料常用維生素K3作為維生素K 的來源，所以維生素K3的測定對飼料檢測和質(zhì)量控制更有意義。

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