微生態(tài)制劑對(duì)鵪鶉小腸發(fā)育、腸道菌群及血清中膽固醇質(zhì)量濃度的影響

華牧偉業(yè) · 發(fā)表于 2013-4-1 16:40:39

　　摘要：研究日糧中添加活性乳酸菌微生態(tài)中藥發(fā)酵制劑-保禽肽對(duì)鵪鶉小腸發(fā)育，腸道菌群及血清中膽固醇質(zhì)量濃度的影響。選用1日齡鵪鶉180羽，隨機(jī)分成4組，每組3 個(gè)重復(fù)，每重復(fù)15羽。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧中分別按比例0.1%、0.2%、0.3%添加活性乳酸菌發(fā)酵制劑-保禽肽。結(jié)果顯示，保禽肽對(duì)鵪鶉小腸發(fā)育影響不大（P>0.05） , 隨保禽肽添加量的增加，小腸中大腸桿菌數(shù)顯著降低（P<0.05） ,乳酸菌數(shù)量顯著增加（P<0.05）。日糧中添加0.2%和0.3%保禽肽可顯著降低血清中膽固醇質(zhì)量濃度（P<0.05）。由此得出，飼料中添加保禽肽可減少鵪鶉腸道內(nèi)大腸桿菌數(shù)量，增加乳酸菌數(shù)量，同時(shí)可降低血清膽固醇質(zhì)量濃度。
　　關(guān)鍵詞：微生態(tài)、中藥、益生素、發(fā)酵、保禽肽、乳酸菌、小腸發(fā)育、大腸桿菌、血清膽固醇。
　　保禽肽是利用現(xiàn)代生物技術(shù)和先進(jìn)設(shè)備利用工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)的活性乳酸菌對(duì)精選中藥進(jìn)行發(fā)酵，提高中藥功效4-28倍，并且改變了其適口性差的缺點(diǎn)?；钚匀樗峋l(fā)酵制劑-保禽肽具有功效全面、見效快（24小時(shí)）、貯藏時(shí)間長、使用方便等優(yōu)點(diǎn) ?；钚匀樗峋菄H公認(rèn)的可以飼用的有益菌種，也是中國批準(zhǔn)使用的有益菌品種，是一種綠色環(huán)保無公害添加劑。目前，有關(guān)研究報(bào)道主要集中于豬、肉雞、反芻動(dòng)物方面，對(duì)于鵪鶉的作用尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)通過在日糧中添加活性乳酸菌發(fā)酵制劑來研究活性乳酸菌對(duì)鵪鶉小腸發(fā)育、腸道菌群及血清膽固醇質(zhì)量濃度的影響。
　　1 材料與方法
　　1. 1 試驗(yàn)材料
　　飼用活性乳酸菌發(fā)酵制劑-保禽肽（活菌數(shù)≥10 億/g ）由哈爾濱中科生物工程有限公司生產(chǎn)?；A(chǔ)日糧不含任何添加劑、聚糖類、益生素及抗生素，分為0-2周齡和3-5 周齡2 個(gè)階段，基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)成分見表1。
　　1. 2 試驗(yàn)動(dòng)物的選擇與分組
　　將180 羽1 日齡雛鵪鶉隨機(jī)分成4 組，每組3 個(gè)重復(fù)，每重復(fù)15 羽。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧。試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.1%、0.2%、0.3% 的保禽肽。
　　表1 基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平

飼料原料/ ( g/ kg)	0-2 周齡	3-5 周齡
玉米	540	510
豆粕	270	260
進(jìn)口魚粉	100	90
米糠	50	100
骨粉	15	15
多維	2.5	2.5
微量元素	2.5	2.5
賴氨酸( 99%)	6	6
蛋氨酸( 99%)	1	1
食鹽	1	1
石粉	12	12
合計(jì)	1000	1000
粗蛋白CP	243.8	229.4
總磷 P	4.0	4.0
總鈣Ca	13.3	12.3
粗纖維	34.3	25.3
賴氨酸	11.2	8.7
蛋氨酸	4.7	3.8

　　注：代謝能分別為12. 05 和11. 98 kJ/g。賴氨酸、蛋氨酸為計(jì)算值，其余為實(shí)測值。基礎(chǔ)日糧中微量元素添加為Mn 90 mg/kg、Zn 100mg/kg、Cu 7mg/ kg 、I0.3 mg/kg 、Fe 80 mg/kg.

　　1. 3 飼養(yǎng)管理

　　7 d育雛期在育雛箱中飼養(yǎng)， 7 d后采用籠飼養(yǎng)，試驗(yàn)期35 d。自由采食和飲水，消毒程序按常規(guī)方法進(jìn)行。自然光和日光燈結(jié)合，試驗(yàn)初期全天24 h 光照， 10 d 后逐漸減少日光燈光照時(shí)間，直至完全停止，保持室內(nèi)溫度在33℃以上， 7 d后逐漸降低溫度至室溫。

　　1. 4 樣品采集與制備

　　1. 4. 1 血清采集 35 d 時(shí)從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)抽取已停止飼喂12 h以上的空腹鵪鶉4 羽，稱量活體質(zhì)量，用于計(jì)算腸指數(shù)。然后采用斷頸放血進(jìn)行采血，分別裝入離心管中， 3000 r/ min 離心10 min, 分離血清，置-20℃冰箱中保存。

　　1. 4. 2 腸樣采集將35 d屠宰后的鵪鶉每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取4 羽，總計(jì)48 羽進(jìn)行解剖，取其腸，測量其空腸、回腸、十二指腸長度（mm） , 并計(jì)算腸指數(shù)。結(jié)扎盲腸口，裝入樣品袋，立即進(jìn)行微生物培養(yǎng)計(jì)數(shù)。腸指數(shù)= 腸長度/體質(zhì)量。

　　1. 5 指標(biāo)測定

　　1. 5. 1 微生物麥康凱培養(yǎng)基、乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基購于北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司，用常規(guī)檢測法進(jìn)行測定。采用麥康凱培養(yǎng)基37℃有氧培養(yǎng)24 h 進(jìn)行大腸桿菌菌落計(jì)數(shù)；采用乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基37℃厭氧培養(yǎng)48 h進(jìn)行乳酸桿菌菌落計(jì)數(shù)。根據(jù)菌落形態(tài)、顏色和革蘭氏染色鏡檢結(jié)果進(jìn)行鑒別，用每克腸道內(nèi)容物中細(xì)菌個(gè)數(shù)的常用對(duì)數(shù)來表示。

　　1. 5. 2 血清膽固醇取潔凈干燥試管5支，編號(hào)，依次加入標(biāo)準(zhǔn)膽固醇應(yīng)用液0、0.1、0.2、0.3、0.4 mL, 再依次加入醋酸液使各管體積均為0.4mL, 然后，每管加入鄰苯二甲醛試劑0.2 mL, 蒸餾水0.01 mL, 混合酸4 mL, 混勻，靜置10 min,于550 nm 波長處比色測定，以總膽固醇質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，光密度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　取3 支清潔干燥試管編號(hào)， 1 支為對(duì)照，其余2 支為樣品，分別加入稀釋的血清樣品0、0.4、0.4mL, 各加入鄰苯二甲醛0.2 mL, 混合酸4 mL, 另外在對(duì)照管中加入0. 4 mL 冰醋酸，然后與標(biāo)準(zhǔn)曲線同時(shí)比色測定。其中量取0.1 mL 稀釋的未知血清樣品，再用冰醋酸稀釋到4 mL 制成分析樣品?；靹颍?靜置10 min, 在550 nm 處比色，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出樣品的膽固醇質(zhì)量濃度。

　　1. 6 數(shù)據(jù)處理

　　采用SPSS15.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，采用單因素方差分析（One-Way ANO-VA），并進(jìn)行Duncan?s 多重比較，取P <0.05 作為差異顯著性的臨界值，數(shù)據(jù)以“平均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

　　2 結(jié)果與分析

　　2. 1 鵪鶉腸長度及腸指數(shù)

　　從表2 可以看出， 0.3%保禽肽組鵪鶉空腸長度顯著高于0.1%保禽肽（ P<0.05） ; 但各水平保禽肽組鵪鶉空腸長度與對(duì)照組相比差異不顯著（P>0.05） ?；钚愿山湍笇?duì)鵪鶉回腸、十二指腸長度沒有顯著影響（P>0.05）。小腸長度隨添加量的增加總體有增長的趨勢，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著水平（P>0.05）。日糧添加保禽肽對(duì)空回比沒有顯著影響（P>0.05）。0.2%保禽肽組鵪鶉空腸指數(shù)顯著高于0.1%保禽肽組（P< 0.05） ; 但各水平保禽肽組鵪鶉空腸指數(shù)與對(duì)照組相比差異不顯著（P>0.05）。保禽肽對(duì)鵪鶉回腸、十二指腸、小腸腸指數(shù)沒有顯著影響（ P>0.05）。

　　表2 保禽肽對(duì)鵪鶉空腸、回腸、十二指腸、小腸長度及腸指數(shù)的影響

項(xiàng)目	保禽肽添加量(%)
項(xiàng)目	0(CK)	0.1	0.2	0.3
空腸長度/ cm	26.0±3.60ab	24.92±2.78b	27.98±3.25a	25.65±3.13a
回腸長度/ cm	25.19±3.68	26.13±3.70	25.48±3.42	26.85±5.07
十二指腸長度/ cm	12.42±1.27	12.77±1.63	12.57±1.00	12.67±1.30
空回比	1.05±0.19	0.97±0.19	1.11±0.12	0.98±0.17
小腸長度/ cm	63.64±5.70	63.8±4.922	66.39±6.19	65.07±6.21
空腸指數(shù)	1.41±0.18ab	1.25±0.11b	1.45±0.15a	1.31±0.09ab
回腸指數(shù)	1.36±0.08	1.32±0.12	1.32±0.17	1.37±0.09
十二指腸指數(shù)	0.67±0.13	0.64±0.09	0.65±0.08	0.65±0.10
小腸指數(shù)	3.44±1.24	3.21±1.32	3.44±1.10	3.32±1.21

　　注：同行數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著（ P< 0. 05）。

　　2. 2 鵪鶉腸道菌群含量

　　從表3 可看出，保禽肽對(duì)鵪鶉腸道內(nèi)大腸桿菌的菌群有較強(qiáng)抑制作用，試驗(yàn)組鵪鶉腸道內(nèi)大腸桿菌顯著低于對(duì)照組（P<0.05） ,而且隨添加量增加，作用增強(qiáng)，0.2%和0.3%保禽肽組鵪鶉腸道內(nèi)大腸桿菌顯著低于0.1%保禽肽組（P<0.05）。日糧添加保禽肽對(duì)鵪鶉腸道內(nèi)乳酸菌有促進(jìn)作用，試驗(yàn)組鵪鶉腸道內(nèi)乳酸菌顯著高于對(duì)照組（P<0.05） , 而且隨添加量增加，作用增強(qiáng)，0.2%和0.3%保禽肽組鵪鶉腸道內(nèi)乳酸菌顯著高于0.1%活性酵母組（P<0.05）。

　　表3 保禽肽對(duì)鵪鶉腸道內(nèi)大腸桿菌、乳酸菌及血清膽固醇質(zhì)量濃度的影響

保禽肽(%)	每克腸道內(nèi)容物中細(xì)菌數(shù)量的常用對(duì)數(shù)值
保禽肽(%)	大腸桿菌	乳酸菌	膽固醇質(zhì)量濃度/(g/L)
0(CK)	8.20±0.31a	6.75±0.09c	0.0416±0.0014a
0.1	4.88±0.20c	17.09±0.19a	0.0405±0.0014a
0.2	2.61±0.23c	27.30±0.24a	0.0381±0.0021b
0.3	2.45±0.20c	37.39±0.18a	0.0371±0.0013b

　　注：同行數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著（ P< 0. 05）。

　　2. 3 鵪鶉血清膽固醇質(zhì)量濃度

　　從表3 可以看出，隨日糧活性保禽肽添加量的增加鵪鶉血清中膽固醇質(zhì)量濃度減少，且0.2%和0.3%保禽肽組血清膽固醇質(zhì)量濃度顯著低于對(duì)照組和0.1%保禽肽組（P<0.05）。

　　3 結(jié)論與討論

　　3. 1 保禽肽對(duì)鵪鶉小腸發(fā)育的影響

　　小腸作為動(dòng)物體吸收營養(yǎng)物質(zhì)的主要場所，其長度直接影響營養(yǎng)物質(zhì)吸收，各種營養(yǎng)物質(zhì)在小腸內(nèi)吸收的部位不盡相同，如糖類、蛋白質(zhì)和脂肪的消化產(chǎn)物大部分是在十二指腸和空腸吸收；鐵、鎂、鈣在小腸上段吸收；而維生素、膽鹽則在回腸被吸收。各段腸指數(shù)也側(cè)面反映了各段腸道的發(fā)育狀況。本試驗(yàn)研究表明，保禽肽對(duì)鵪鶉小腸不同段（空腸、回腸、十二指腸）的生長發(fā)育雖然有一定的促進(jìn)作用，但影響程度不盡一致，保禽肽對(duì)空腸發(fā)育影響最大，0.2%保禽肽組鵪鶉空腸長度、空腸指數(shù)顯著高于0.1%保禽肽組。說明隨保禽肽量的增加對(duì)空腸發(fā)育的刺激作用較其他小腸段強(qiáng)。盡管隨日糧保禽肽添加量的增加對(duì)各組間鵪鶉空腸長度、空腸指數(shù)有顯著影響，但日糧添加保禽肽組與對(duì)照組相比，差異不顯著，而且日糧添加保禽肽對(duì)鵪鶉回腸、十二指腸及整個(gè)小腸的長度、腸指數(shù)未達(dá)到顯著差異水平。各組間空回比也未達(dá)到顯著差異水平。由于腸道長度增長可增加食物在腸道內(nèi)的吸收面積，利于食物在腸道內(nèi)的消化吸收，從而促進(jìn)動(dòng)物生長。這說明保禽肽促進(jìn)禽類生長，提高禽類生長性能的原因是由于保禽肽改善了腸道環(huán)境，因?yàn)閺谋驹囼?yàn)來看保禽肽對(duì)促進(jìn)腸道發(fā)育影響不大。

　　3. 2 活性干酵母對(duì)鵪鶉腸道內(nèi)菌群的影響

　　小腸不僅是營養(yǎng)物質(zhì)吸收和消化的主要場所，也與腸道內(nèi)菌群的平衡與宿主的生產(chǎn)性能有重要關(guān)系。日糧添加保禽肽，鵪鶉腸道內(nèi)大腸桿菌數(shù)量明顯減少，而乳酸桿菌數(shù)量顯著增加，保禽肽組與對(duì)照組相比，保禽肽組在降低大腸桿菌和提高乳酸菌數(shù)量方面效果很明顯。這說明保禽肽對(duì)腸道微生態(tài)具有調(diào)節(jié)作用。乳酸菌屬于厭氧菌，在無氧條件能繁殖，在消化道內(nèi)大量繁殖，并大量產(chǎn)酸，從而抑制了大腸桿菌、沙門氏菌等有害菌群的生長繁殖，促進(jìn)雙歧桿菌、乳酸菌等有益菌的繁殖。適量添加保禽肽可以改善胃腸環(huán)境和菌群結(jié)構(gòu)，促進(jìn)整個(gè)腸道乳酸菌、芽孢桿菌、雙歧桿菌等有益菌的繁殖，提高其數(shù)量及活力，從而促進(jìn)動(dòng)物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收和利用。

　　3. 3 保禽肽對(duì)鵪鶉血清膽固醇質(zhì)量濃度的影響

　　本試驗(yàn)采用保禽肽飼喂鵪鶉可降低血清中膽固醇的質(zhì)量濃度。這可能是由于添加保禽肽提高了腸道內(nèi)乳酸菌的數(shù)量。膽固醇可經(jīng)肝臟催化形成膽酸，再同甘氨酸或?；撬峤Y(jié)合形成可溶于水的脫氧甘膽酸鹽或牛磺膽酸鹽等膽汁鹽，通過糞便排出體外。腸內(nèi)一些乳酸菌等微生物產(chǎn)生的膽汁鹽水解酶催化膽汁鹽產(chǎn)生脫甘氨酸或脫牛磺酸的不溶于水的去結(jié)合型膽汁鹽，這種膽汁鹽可同血清中膽固醇發(fā)生共沉淀作用排出體外。除此之外，飼喂保禽肽降低鵪鶉血清中膽固醇質(zhì)量濃度的另一個(gè)原因可能是保禽肽含有β-葡聚糖， β-葡聚糖妨礙膳食膽固醇的吸收，抑制膽酸鹽的再吸收，增加膽固醇的排出量從而降低了血漿膽固醇的質(zhì)量濃度。