不同免疫增強(qiáng)劑對蛋雞新城疫疫苗免疫效果影響試驗

哈中活菌

免疫調(diào)節(jié)劑是用于調(diào)節(jié)和控制免疫功能的藥物，包括免疫抑制劑和免疫增強(qiáng)劑。免疫增強(qiáng)劑是一類單獨使用或與抗原同時使用、通過非特異性途徑增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答的物質(zhì)，可增強(qiáng)機(jī)體的

免疫功能，緩解由環(huán)境造成的免疫功能紊亂，有利于預(yù)防和治療傳染性和條件性疾病。目前在臨床上常用的免疫增強(qiáng)劑有黃芪多糖、卡介苗、鹽酸左旋咪唑、香菇多糖、VC、VE、硒、白細(xì)胞介素-2（白介素-2）等。本試驗選用黃芪多糖粉劑、鹽酸左旋咪唑、VE、VC作為免疫增強(qiáng)劑，以探明不同免疫增強(qiáng)劑對蛋雞新城疫免疫效果的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

    1 日齡健康海蘭褐蛋雞，購于泰安東岳種禽有限公司。

1.2 試驗材料

    96 孔V 型微量反應(yīng)板、移液器、生理鹽水、1%雞紅細(xì)胞懸液。

    新城疫血凝抑制試驗抗原由中國科學(xué)院提供；雞新城疫滅活疫苗（La Sota 株）購于乾元浩生物股份有限公司。

    黃芪多糖粉劑、鹽酸左旋咪唑、VE、VC由ACV健康養(yǎng)殖工程中心提供。

    RPMI 1640 培養(yǎng)液（Gibco 公司）；CKK-8、刀豆蛋白A（ConA，Sigma公司）。

    小牛血清、Hank′s液、臺酚蘭、肝素鈉。

1.3 試驗動物的處理

    600 只健康海蘭褐蛋雞隨機(jī)分為A、B、C、D、E 5 組，每組120 只。試驗在相同的環(huán)境下，采用同種飼料進(jìn)行飼喂和同一防疫程序進(jìn)行免疫預(yù)防。50 日齡防疫新城疫Ⅳ系和新城疫滅活疫苗時，免疫增強(qiáng)劑在防疫前后（48~52 日齡）連用5 d。A 組使用預(yù)防量的黃芪多糖粉劑，B 組鹽酸左旋咪唑10 mg/kg 拌料，每天早晚各一次，C 組VE 80 mg/kg 拌料，D 組VC 100 mg/kg 拌料，E 組不加免疫增強(qiáng)劑，作為對照組。

1.4 抗體水平檢測

    分別于免疫前1 d 和免后第7、14、21、28、35、42 天，每組隨機(jī)抽樣15 只雞翅靜脈采血，分離血清，采用血凝（HA）與血凝抑制試驗（HI）（《高致病性禽流感診斷技術(shù)》中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18936-2003）檢測抗體效價，計算每組平均值，結(jié)果以log2表示。

1.5 ConA誘導(dǎo)的雞血液T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗

    分別于免疫前1 d 和免后第7、14、21、28、35、42 天，每組隨機(jī)抽取15 只雞翅靜脈采取抗凝血，將1.5 mL 抗凝血與1.5 mL 細(xì)胞培養(yǎng)液（1640，不含胎牛血清）混勻；在滅菌離心管中加入3 mL 淋巴細(xì)胞分離液，并將3 mL 混勻血液輕輕的平鋪在淋巴細(xì)胞分離液表面，1 500 r/min 離心20 min；將離心分層的淋巴細(xì)胞吸出，轉(zhuǎn)到1.5 mL 離心管中，加入細(xì)胞培養(yǎng)液（1640，不含胎牛血清）重懸，3 000 r/min 洗滌兩次；將淋巴細(xì)胞懸浮于1640 細(xì)胞培養(yǎng)液中，用臺酚蘭染色計數(shù)活細(xì)胞數(shù)（應(yīng)在95%以上），調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107個/mL。將調(diào)整好的細(xì)胞懸液加入96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加99 μL，然后實驗組加入1 μL ConA（終濃度為10 μg/mL），對照組加入1 μL 細(xì)胞培養(yǎng)液（1640，含胎牛血清），空白對照加入100 μL 細(xì)胞培養(yǎng)液（1640，含胎牛血清）。每個樣品作兩個平行。將鋪好的96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板放入5%CO2，37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h；每孔加入終濃度10 μL CCK-8，放入二氧化碳培養(yǎng)箱，孵育1 h 后用酶標(biāo)儀（OD450）讀數(shù)，并計算刺激值。