《飼用植酸酶活性的測定——分光光度法》新舊國標變化及解讀一

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由于植酸酶在配合飼料中的混合均勻度相對較差，飼料原料配方的復雜性、差異性會干擾添加植酸酶的配合飼料酶活檢測結果的準確度、精確度及穩(wěn)定性。5.5.3 對于加酶飼料樣品中酶的提取新標準中規(guī)定：“使用超聲波溶解器上超聲溶解15min，再放入回旋式振蕩器中振蕩30min。

從2009年10月1日起，GB/T 18634-2009《飼用植酸酶活性的測定——分光光度法》標準正式實施。 隨著植酸酶的大規(guī)模應用，飼料企業(yè)如何選擇和鑒別植酸酶產品的問題，已經成為使用者的當務之急。在眾多影響使用效果的因素中，產品本身的原因主要包括酶的種源、含量、溫度穩(wěn)定性、容重、pH特性及體內水解效率等，其中酶活含量是最重要的質量指標。 GB/T 18634-2002《飼用植酸酶活性的測定——分光光度法》是在參考了AOAC方法的基礎上制定的，在國標頒布之初，由于市場上的植酸酶菌種相對單一，國標檢測方法具有普遍的代表性，對植酸酶的生產、應用和檢測起到了很好的指導作用。隨著植酸酶的逐漸普及，特別是在2004年以后，國內對植酸酶的研究開發(fā)進展迅速，有大量采用不同菌種發(fā)酵的植酸酶相繼問世，GB/T 18634-2002在檢測新型植酸酶產品上顯現出缺陷和不足，直接影響到檢測結果的準確性。這次標準的修訂為植酸酶的制造、貿易、應用甚至糾紛仲裁、以及加酶飼料的質量控制和檢測方法的統(tǒng)一都提供了充分的依據，也是植酸酶發(fā)揮效果的基本前提。下面結合生產檢測實際 ，談談新舊國標的主要區(qū)別： 1 縮小了方法的適用范圍 新標準（GB/T 18634-2009，以下同）適用范圍刪去原國標（GB/T 18634-2002，以下同）中規(guī)定的“添加有植酸酶的濃縮飼料和添加劑預混合飼料”。修訂為：“本標準適用于飼料添加劑用植酸酶產品、也適用于添加有植酸酶的配合飼料”。 預混合飼料、濃縮飼料中金屬離子濃度高，成分復雜，對樣品干擾大，隨著樣品保存時間的延長，酶的活性很不穩(wěn)定，用現行的提取條件不能將酶活提取完全，檢測結果不準確。因此，新國標適用范圍中去掉了“添加劑預混合飼料、濃縮飼料”，保留“添加劑用植酸酶產品、配合飼料”。后兩類產品按照新標準的方法檢測均能達到較好結果。 2 調整了最低檢出限量和添加植酸酶的配合飼料樣品兩次試驗的允許差 方法最低定量限由原標準的“90U/g”調整為“130U/g”。擴大了添加植酸酶的配合飼料樣品兩次試驗的允許差，由原標準的“≤10%”調整為“≤15%”。 由于植酸酶在配合飼料中的混合均勻度相對較差，飼料原料配方的復雜性、差異性會干擾添加植酸酶的配合飼料酶活檢測結果的準確度、精確度及穩(wěn)定性。盡管此次標準在最低檢出限量和試驗允許差這兩方面做了調整，但并不能從根本上提高添加植酸酶配合飼料樣品酶活檢測的準確度、精確度。實際檢測過程中，我們發(fā)現不同化驗室間對添加植酸酶配合飼料中植酸酶檢測結果存在較大差別也是一種較為常見的現象。 3 刪除了相對法 原標準中絕對法是不借助中間物質和步驟，直接使用烘至恒重的磷酸二氫鉀作為基準物繪制工作標準曲線，測定植酸酶含量。但是方法本身先天的因素造成測定精度低。為了保證準確度，必須加大測定的重復數，靠取平均數的辦法獲得可靠的測定值。所需時間長，費用高。絕對法適用于法定的質量認證及仲裁機構標定植酸酶標準品含量，為一般單位常規(guī)提供基準物質。相對法是借助已知準確含量的植酸酶標準對照品作為工作標準曲線，間接獲得樣品的植酸酶含量。相對法結果的準確性對標準品質量的依賴性較大。其測定結果精度高，速度快，費用低。高精確度是通過精確測定條件來達到的。適用于一般有日常測定需要的機構、企業(yè)使用。由于精度高，減少了重復次數，可以增加同一測定批次的樣品數。兩種方法的根本區(qū)別就在于對照品不同。