《飼用植酸酶活性的測定——分光光度法》新舊國標(biāo)變化及解讀

　　從2009年10月1日起，GB/T 18634-2009《飼用植酸酶活性的測定——分光光度法》標(biāo)準(zhǔn)正式實施。

　　隨著植酸酶的大規(guī)模應(yīng)用，飼料企業(yè)如何選擇和鑒別植酸酶產(chǎn)品的問題，已經(jīng)成為使用者的當(dāng)務(wù)之急。在眾多影響使用效果的因素中，產(chǎn)品本身的原因主要包括酶的種源、含量、溫度穩(wěn)定性、容重、pH特性及體內(nèi)水解效率等，其中酶活含量是最重要的質(zhì)量指標(biāo)。

　　GB/T 18634-2002《飼用植酸酶活性的測定——分光光度法》是在參考了AOAC方法的基礎(chǔ)上制定的，在國標(biāo)頒布之初，由于市場上的植酸酶菌種相對單一，國標(biāo)檢測方法具有普遍的代表性，對植酸酶的生產(chǎn)、應(yīng)用和檢測起到了很好的指導(dǎo)作用。隨著植酸酶的逐漸普及，特別是在2004年以后，國內(nèi)對植酸酶的研究開發(fā)進(jìn)展迅速，有大量采用不同菌種發(fā)酵的植酸酶相繼問世，GB/T 18634-2002在檢測新型植酸酶產(chǎn)品上顯現(xiàn)出缺陷和不足，直接影響到檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。這次標(biāo)準(zhǔn)的修訂為植酸酶的制造、貿(mào)易、應(yīng)用甚至糾紛仲裁、以及加酶飼料的質(zhì)量控制和檢測方法的統(tǒng)一都提供了充分的依據(jù)，也是植酸酶發(fā)揮效果的基本前提。下面結(jié)合生產(chǎn)檢測實際 ，談?wù)勑屡f國標(biāo)的主要區(qū)別：

　　1 縮小了方法的適用范圍

　　新標(biāo)準(zhǔn)（GB/T 18634-2009，以下同）適用范圍刪去原國標(biāo)（GB/T 18634-2002，以下同）中規(guī)定的“添加有植酸酶的濃縮飼料和添加劑預(yù)混合飼料”。修訂為：“本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料添加劑用植酸酶產(chǎn)品、也適用于添加有植酸酶的配合飼料”。

　　預(yù)混合飼料、濃縮飼料中金屬離子濃度高，成分復(fù)雜，對樣品干擾大，隨著樣品保存時間的延長，酶的活性很不穩(wěn)定，用現(xiàn)行的提取條件不能將酶活提取完全，檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。因此，新國標(biāo)適用范圍中去掉了“添加劑預(yù)混合飼料、濃縮飼料”，保留“添加劑用植酸酶產(chǎn)品、配合飼料”。后兩類產(chǎn)品按照新標(biāo)準(zhǔn)的方法檢測均能達(dá)到較好結(jié)果。

　　2 調(diào)整了最低檢出限量和添加植酸酶的配合飼料樣品兩次試驗的允許差

　　方法最低定量限由原標(biāo)準(zhǔn)的“90U/g”調(diào)整為“130U/g”。擴(kuò)大了添加植酸酶的配合飼料樣品兩次試驗的允許差，由原標(biāo)準(zhǔn)的“≤10%”調(diào)整為“≤15%”。

　　由于植酸酶在配合飼料中的混合均勻度相對較差，飼料原料配方的復(fù)雜性、差異性會干擾添加植酸酶的配合飼料酶活檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度、精確度及穩(wěn)定性。盡管此次標(biāo)準(zhǔn)在最低檢出限量和試驗允許差這兩方面做了調(diào)整，但并不能從根本上提高添加植酸酶配合飼料樣品酶活檢測的準(zhǔn)確度、精確度。實際檢測過程中，我們發(fā)現(xiàn)不同化驗室間對添加植酸酶配合飼料中植酸酶檢測結(jié)果存在較大差別也是一種較為常見的現(xiàn)象。

　　3 刪除了相對法

　　原標(biāo)準(zhǔn)中絕對法是不借助中間物質(zhì)和步驟，直接使用烘至恒重的磷酸二氫鉀作為基準(zhǔn)物繪制工作標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定植酸酶含量。但是方法本身先天的因素造成測定精度低。為了保證準(zhǔn)確度，必須加大測定的重復(fù)數(shù)，靠取平均數(shù)的辦法獲得可靠的測定值。所需時間長，費用高。絕對法適用于法定的質(zhì)量認(rèn)證及仲裁機(jī)構(gòu)標(biāo)定植酸酶標(biāo)準(zhǔn)品含量，為一般單位常規(guī)提供基準(zhǔn)物質(zhì)。相對法是借助已知準(zhǔn)確含量的植酸酶標(biāo)準(zhǔn)對照品作為工作標(biāo)準(zhǔn)曲線，間接獲得樣品的植酸酶含量。相對法結(jié)果的準(zhǔn)確性對標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量的依賴性較大。其測定結(jié)果精度高，速度快，費用低。高精確度是通過精確測定條件來達(dá)到的。適用于一般有日常測定需要的機(jī)構(gòu)、企業(yè)使用。由于精度高，減少了重復(fù)次數(shù)，可以增加同一測定批次的樣品數(shù)。兩種方法的根本區(qū)別就在于對照品不同。